發(fā)布時(shí)間：2018-01-11 03:14

  本文關(guān)鍵詞：歐前胡素抗炎作用和尾葉香茶菜丙素抗腫瘤作用機(jī)制研究　出處：《延邊大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 歐前胡素 NF-κB PI3K/Akt ROS 尾葉香茶菜丙素 HIF-1α

【摘要】：目的:NF-κB與HIF-1α參與炎癥反應(yīng)、腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡與血管生成等多種生物進(jìn)程。長(zhǎng)白山藥用植物白芷中分離出的歐前胡素以及尾葉香茶菜中分離出尾葉香茶菜丙素分別以NF-κB與HIF-1α信號(hào)為藥物作用靶點(diǎn),從細(xì)胞和分子水平深入研究其干預(yù)炎癥與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制,為抗炎、抗腫瘤藥物的開發(fā)提供可靠的科學(xué)依據(jù)。方法:(1)熒光素酶報(bào)告基因與MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)歐前胡素對(duì)NF-κB轉(zhuǎn)錄活性及細(xì)胞存活率的影響;免疫熒光實(shí)驗(yàn)與蛋白免疫印跡檢測(cè)歐前胡素對(duì)p65及COX-2、cyclinD1、MMP-9、VEGF、IL-6、Bc1-xL、p-IKKα/β、p-Akt、caspases-8、PARP蛋白表達(dá)的影響;RT-qPCR與ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了歐前胡素對(duì)mRNA Bcl-xL、mRNA IL-6、mRNA TNF-α及細(xì)胞分泌物MMP-9、IL-6的影響;凋亡和ROS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了歐前胡素對(duì)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞內(nèi)ROS的影響;(2)熒光素酶報(bào)告基因與MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)尾葉香茶菜丙素對(duì)HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性及細(xì)胞存活率的影響;蛋白免疫印跡與免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)尾葉香茶菜丙素對(duì)腫瘤細(xì)胞中HIF-1α蛋白表達(dá)的影響;RT-PCR與ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了尾葉香茶菜丙素對(duì)HIF-1α mRNA、VEGF mRNA、EPO mRNA以及細(xì)胞上清液中VEGF的影響;流式細(xì)胞術(shù)及裸鼠體內(nèi)移植瘤實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)了尾葉香茶菜丙素對(duì)細(xì)胞周期及體內(nèi)移植瘤的影響。結(jié)果:(1)歐前胡素劑量依賴性的抑制了 TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB下游靶基因的表達(dá);歐前胡素促進(jìn)TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡;歐前胡素抑制了 HeLα細(xì)胞中PI3K/Akt的活化,IKKα/β的磷酸化,IκBα的降解以及P65的核轉(zhuǎn)移,并呈劑量依賴關(guān)系抑制活性氧ROS的含量。(2)尾葉香茶菜丙素對(duì)缺氧誘導(dǎo)條件下不同腫瘤細(xì)胞中HIF-1α呈劑量依賴性抑制并抑制HIF-1α蛋白的合成,對(duì)其降解和HIF-1αmRNA的表達(dá)并無(wú)影響;尾葉香茶菜丙素可有效抑制HIF-1α靶基因VEGF、EPO及GLUT1的表達(dá);尾葉香茶菜丙素能夠抑制裸鼠體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),并且對(duì)腫瘤組織中HIF-1α的表達(dá)呈明顯的抑制作用。結(jié)論:(1)歐前胡素通過(guò)抑制由TNF-α誘導(dǎo)的ROS/PI3K/Akt/NF-κB信號(hào)通路起到抗炎作用;(2)尾葉香茶菜丙素可以抑制腫瘤細(xì)胞中HIF-1α的表達(dá)及裸鼠體內(nèi)移植瘤的生長(zhǎng)。
[Abstract]:Objective to investigate the role of HIF-1 偽 and NF- 魏 B in inflammatory response and tumor cell proliferation. Apoptosis and angiogenesis, etc. NF- 魏 B and HIF-1 偽 signal were used as the drug for the separation of Elaeagnin from Dahurica dahurica, a medicinal plant in Changbai Mountain, and propanoside from Camellia oleifera, a medicinal plant in Changbai Mountain, which was isolated from Radix angelicae dahurica. Target. The molecular mechanism of its intervention in inflammation and tumorigenesis and development is the anti-inflammatory mechanism at cellular and molecular level. Methods the luciferase reporter gene and MTT assay were used to detect the effect of omeptin on NF- 魏 B transcriptional activity and cell survival. Immunofluorescence assay and Western blotting were used to detect the p65 and COX-2 cyclin D 1 MMP-9 and VEGFU IL-6 Bc1-xL in p65 and COX-2 cyclinD1MMP-9. The effect of p-IKK 偽 / 尾 on the expression of PARP in caspases-8 of p-Aktases-8; RT-qPCR and ELISA experiments were used to detect the effect of omeprazine on mRNA Bcl-xLU mRNA TNF- 偽 and cell secretion MMP-9. The effect of IL-6; Apoptosis and ROS assay were used to detect the effect of omeprazine on cell apoptosis and intracellular ROS. (2) luciferase reporter gene and MTT assay were used to detect the effect of procylin on the transcriptional activity and cell viability of HIF-1 偽. Western blot and immunofluorescence assay were used to detect the expression of HIF-1 偽 protein in tumor cells. RT-PCR and ELISA were used to detect HIF-1 偽 -mRNA-VEGF mRNA. The effects of EPO mRNA and VEGF in cell supernatant; Flow cytometry and tumor transplantation in nude mice were used to detect the effects of cytosol on cell cycle and tumor transplantation in vivo. The expression of NF- 魏 B downstream target gene induced by TNF- 偽 was inhibited in a dose-dependent manner. The apoptosis induced by TNF- 偽 was promoted by omeprazine. The activation of PI3K/Akt and the phosphorylation of I 魏 B 偽 and the nuclear transfer of p65 in HeL 偽 cells were inhibited by omeprazine. In a dose-dependent manner, the content of reactive oxygen species (ROS) was inhibited in a dose-dependent manner. HIF-1 偽 in different tumor cells was inhibited in a dose-dependent manner and the synthesis of HIF-1 偽 protein was inhibited in a dose-dependent manner. There was no effect on its degradation and the expression of HIF-1 偽 mRNA. The expression of HIF-1 偽 target gene (VEGF 偽) EPO and GLUT1 was effectively inhibited by propanoside. Cyclopropanin can inhibit the growth of tumor cells in nude mice. The expression of HIF-1 偽 in tumor tissue was inhibited obviously. Conclusion: 1). The anti-inflammatory effect of omeganthin was found by inhibiting the Ros / PI3K / Akt / NF- 魏 B signaling pathway induced by TNF- 偽. The expression of HIF-1 偽 in tumor cells and the growth of xenografts in nude mice were inhibited.
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：1407896