發(fā)布時(shí)間：2018-01-11 20:10

  本文關(guān)鍵詞：潛陽(yáng)育陰顆粒通過(guò)抑制炎性反應(yīng)改善高血壓早期腎損害的基礎(chǔ)與臨床研究　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：一、目的圍繞高血壓早期腎保護(hù),開(kāi)展基礎(chǔ)與臨床研究。通過(guò)觀察院內(nèi)特色制劑潛陽(yáng)育陰顆粒作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)損傷模型,明確該藥能否下調(diào)炎癥因子表達(dá)、減輕腎臟花生四烯酸(AA)代謝紊亂;通過(guò)該藥干預(yù)高血壓的臨床研究,證實(shí)該藥是否可以改善高血壓早期腎損害的相關(guān)指標(biāo);通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查研究,尋找引起高血壓腎損害的危險(xiǎn)因素,為中醫(yī)藥多因素干預(yù)高血壓早期腎損害提供進(jìn)一步的證據(jù)。二、方法及內(nèi)容(一)基礎(chǔ)研究潛陽(yáng)育陰顆粒對(duì)HUVEC細(xì)胞損傷模型活性及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響:將SD大鼠隨機(jī)分為正常組、纈沙坦膠囊組、潛陽(yáng)育陰顆粒組、潛陽(yáng)育陰顆粒聯(lián)合纈沙坦膠囊組,每組8只,灌胃給藥,其中潛陽(yáng)育陰顆粒,劑量為10 g/kg/d,分2次給藥,纈沙坦膠囊每日1次給藥,劑量為0.027g/kg/d,連續(xù)給藥7d,制備含藥血清。HUVEC分為5組,除正常組外,其余組均采用AngⅡ作用于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HUVEC建立細(xì)胞損傷模型。造模后,分別給予相應(yīng)含藥血清干預(yù):對(duì)照組(10%空白血清培養(yǎng)液)、模型組(10%空白血清培養(yǎng)液)、纈沙坦膠囊組(10%纈沙坦膠囊血清培養(yǎng)液)、潛陽(yáng)育陰顆粒組(10%潛陽(yáng)育陰顆粒血清培養(yǎng)液)、潛陽(yáng)育陰顆粒聯(lián)合纈沙坦膠囊組(10%潛陽(yáng)育陰顆粒+10%纈沙坦膠囊血清培養(yǎng)液),繼續(xù)培養(yǎng)24 h。觀察:①M(fèi)TT法檢測(cè)含藥血清對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)HUVEC損傷細(xì)胞活性的影響;②熒光顯微鏡觀察含藥血清對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)HUVEC損傷細(xì)胞形態(tài)的影響;③含藥血清對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)的HUVEC損傷細(xì)胞活性氧生成的影響;④含藥血清對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型NF-κB p65的影響;⑤含藥血清對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型COX-1、COX-2的影響;⑥含藥血清對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型PGES及PGIS的影響。結(jié)果:①不同藥物的含藥血清干預(yù)后,結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,模型組HUVEC細(xì)胞存活率顯著降低(P0.01),給予含藥血清干預(yù)后,各組細(xì)胞存活率與模型組相比顯著升高(P0.01),潛陽(yáng)育陰顆粒與纈沙坦膠囊聯(lián)合用藥組較纈沙坦膠囊組的活細(xì)胞數(shù)目更高(P0.01)。③與對(duì)照組相比,模型組細(xì)胞活性氧水平顯著升高(P0.01)。給予含藥血清后,各給藥組活性氧水平顯著降低(P0.01),且聯(lián)合用藥組對(duì)HUVEC損傷細(xì)胞模型的活性氧水平降低最為顯著(P0.05)。④模型組細(xì)胞NF-κBp65蛋白表達(dá)的水平顯著升高(P0.01);與模型組相比,各給藥組NF-κBp65蛋白表達(dá)水平顯著降低(P0.01),聯(lián)合用藥組較纈沙坦膠囊組NF-κBp65蛋白表達(dá)水平降低明顯(P0.05)。⑤各組間相比,COX-1蛋白表達(dá)水平無(wú)顯著差異(P0.05);與對(duì)照組相比,模型組細(xì)胞COX-2蛋白表達(dá)的水平顯著升高(P0.01);與模型組相比,各給藥組COX-2蛋白表達(dá)水平顯著降低(P0.0[),聯(lián)合用藥組COX-2蛋白表達(dá)水平降低更加明顯(P0.01)。⑥與模型組相比,各給藥組PGES及PGIS蛋白表達(dá)水平顯著降低(P0.01),其中,聯(lián)合用藥組較纈沙坦膠囊組降低PGIS的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。結(jié)論:①潛陽(yáng)育陰顆粒含藥血清可以提高AngⅡ誘導(dǎo)HUVEC損傷細(xì)胞的存活率,降低活性氧的水平;②潛陽(yáng)育陰顆�？梢詼p少AngⅡ誘導(dǎo)損傷HUVEC細(xì)胞的炎性反應(yīng),機(jī)制可能與降低NF-κB p65、COX-2炎癥因子的表達(dá)有關(guān)。③潛陽(yáng)育陰顆粒拮抗AngⅡ誘導(dǎo)損傷HUVEC細(xì)胞的機(jī)制可能與下調(diào)PGES及PGIS蛋白表達(dá),從而可能減少致炎前列腺素的產(chǎn)生。④潛陽(yáng)育陰顆粒和纈沙坦膠囊聯(lián)合用藥組保護(hù)HUVEC細(xì)胞損傷模型的作用強(qiáng)于單純纈沙坦膠囊用藥組。(二)臨床研究潛陽(yáng)育陰顆粒干預(yù)高血壓早期腎損害的臨床研究:選擇符合年齡在35-75歲之間;原發(fā)性2或3級(jí)高血壓病;中醫(yī)肝火亢盛證或陰虛陽(yáng)亢證;eGFR≥60ml/min/1.73m2,尿ACR正常;自愿參加試驗(yàn)并簽署知情同意書(shū)的受試者,按照1:1的比例隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組,試驗(yàn)組采用潛陽(yáng)育陰顆粒加西藥標(biāo)準(zhǔn)降壓治療(以ACEI或ARB為基礎(chǔ)治療,可以聯(lián)合CCB),對(duì)照組采用上述單純西藥治療,觀察周期為6個(gè)月,觀察指標(biāo)為:兩組用藥前后尿微量白蛋白、尿ACR、eGFR、NGAL、KIM-1、IL-18以及人口學(xué)資料、生命體征、生化指標(biāo)等,采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析兩組間比較,采用兩個(gè)獨(dú)立樣本均數(shù)T檢驗(yàn),組內(nèi)比較采用配對(duì)T檢驗(yàn)。結(jié)果:①給藥前試驗(yàn)組與對(duì)照組在人口學(xué)特點(diǎn)、生命體征、生化指標(biāo),尿微量白蛋白、尿ACR、eGFR等數(shù)據(jù)兩組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明兩組基線均衡有可比性。②給藥觀察6個(gè)月后,兩組人口學(xué)特點(diǎn)、生命體征、生化指標(biāo),尿微量白蛋白、尿ACR、eGFR的組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。尿微量白蛋白指標(biāo)的組內(nèi)配對(duì)T檢驗(yàn)結(jié)果顯示,試驗(yàn)組x±sd為(9.578±25.871)mg/L,P值為0.017,前后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),對(duì)照組的x±sd為(9.318±65.629)mg/L,P值為0.352,前后比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在改善NGAL方面,組間成組T檢驗(yàn)比較結(jié)果顯示,試驗(yàn)組入組前的x±sd為(155.961±62.884)ng/ml,對(duì)照組入組前x±sd為(172.625±88.3733)ng/ml,兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),給藥6個(gè)月后,試驗(yàn)組x±sd為(131.611±46.576)ng/ml,對(duì)照組x±sd為(158.180±61.502)ng/ml,兩組療后6個(gè)月組間比較P值為0.024,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。組內(nèi)配對(duì)T檢驗(yàn)結(jié)果,試驗(yàn)組NGALx±sd為(22.5347±56.391)ng/ml,前后比較P值為0.011,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而對(duì)照組x±sd為(18.1929±79.2146)ng/ml,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。IL-18、KIM-1組間及組內(nèi)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:潛陽(yáng)育陰顆粒干預(yù)6個(gè)月后,可以改善高血壓患者早期腎臟損害指標(biāo)NGAL的表達(dá),同時(shí)有降低尿微量白蛋白的趨勢(shì)。(三)流行病學(xué)調(diào)查研究南京社區(qū)人群高血壓腎損害危險(xiǎn)因素調(diào)查研究:納入來(lái)源于南京秦淮區(qū)大光路社區(qū)衛(wèi)生中心門(mén)診體檢系統(tǒng)導(dǎo)出的2015年1月至2016年12月診斷為高血壓人群及健康人群數(shù)據(jù),體檢資料完整。采用成組T檢驗(yàn),以eGFR90及≥90ml/min/1.73m2分兩組,分析Height、Weight、HR、SBP、ALT、AST、TBIL、BUN、TC、HDL-C、LDL-C、TG、血WBC、RBC、PLT、Hb,以及合并冠心病、糖尿病之間的差異;以eGFR為因變量,以上述因素為自變量,采用多元線性回歸分析其相關(guān)性。結(jié)果:①共納入符合方案要求的2697例人群數(shù)據(jù),包括健康人群1309例,高血壓人群1388例,其中,單純高血壓660例,高血壓合并糖尿病297例,合并冠心病124例。②在健康人群或高血壓人群中,以eGFR水平分組,成組T檢驗(yàn)比較結(jié)果顯示:男女之間的eGFR值均有極顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001),女性高于男性;eGFR值與BUN、UA之間呈極顯著的負(fù)相關(guān)(P0.001);與SBP呈顯著的負(fù)相關(guān)(P0.01);與TB1L之間呈負(fù)相關(guān)(P0.05)。在1388例高血壓人群中分析顯示:eGFR與TG之間呈有極顯著的負(fù)相關(guān)(P0.001),合并冠心病患者eGFR下降更為明顯(P0.001)。660例單純高血壓人群組分析顯示:eGFR與體重之間呈負(fù)相關(guān)(P0.01)。高血壓人群較健康人eGFR相比,呈極顯著的負(fù)相關(guān)(P0.001)。③線性多元回歸分析:eGFR與LDL-C、FBG、WBC、PP之間呈負(fù)相關(guān)(P0.05),與BUN、UA、SBP之間呈極顯著負(fù)相關(guān)(P0.001)。eGFR與RBC、PLT之間呈正相關(guān)(P0.05)。結(jié)論:社區(qū)人群高血壓腎損害危險(xiǎn)因素流行病學(xué)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn),高血壓患者影響腎小球?yàn)V過(guò)率的因素可能有體重、TG、LDL-C、SBP、PP、BUN、UA、FBG,并呈負(fù)相關(guān);男性比女性eGFR值低;高血壓人群較健康人群eGFR值低,合并冠心病者更低。
[Abstract]:Objective To study the effects of anti - inflammatory factors on human umbilical vein endothelial cells ( HUVEC ) induced by Ang 鈪，

本文編號(hào)：1411029