發(fā)布時間：2018-01-13 02:08

  本文關(guān)鍵詞：DYYG化合物通過刺激調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對狼瘡性腎炎作用及機(jī)制研究　出處：《吉林大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：狼瘡性腎炎是系統(tǒng)性紅斑狼瘡最常見、最嚴(yán)重的并發(fā)癥,是導(dǎo)致終末期腎臟病的重要病因之一,也是引起系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者死亡的重要原因。狼瘡性腎炎發(fā)病機(jī)制異常復(fù)雜,涉及到遺傳背景、環(huán)境、內(nèi)分泌異常及免疫功能紊亂等。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是一類具有免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞亞群,參與包括狼瘡性腎炎、腫瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等在內(nèi)的多種疾病的免疫調(diào)節(jié),CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞是目前研究的比較多的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞類型。它可以通過分泌抑制性細(xì)胞因子TGF-β和IL-10以及細(xì)胞-細(xì)胞接觸等方式抑制樹突狀細(xì)胞對B細(xì)胞的抗原提呈能力,從而抑制輔助性T細(xì)胞活化B細(xì)胞,進(jìn)而抑制B細(xì)胞生成各種自身抗體,從而減輕組織當(dāng)中免疫復(fù)合物介導(dǎo)的各種損傷。眾多的研究發(fā)現(xiàn),在狼瘡性腎炎疾病過程中,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量和/或功能下降,治療后其數(shù)量增加和/或其功能改善可以對狼瘡性腎炎產(chǎn)生保護(hù)性作用,延緩病情進(jìn)展。目前治療狼瘡性腎炎的藥物主要為激素以及免疫抑制劑等,但治療效果并不十分理想。DYYG化合物是一種由北京德益陽光生物科技有限公司研發(fā)的新型小分子化合物,既往的實驗發(fā)現(xiàn)DYYG化合物能夠促進(jìn)正常人外周血中CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞體外增殖,因此我們進(jìn)一步采取體內(nèi)、外實驗,研究其對CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞增殖的影響,以及其對狼瘡性腎炎的治療作用和可能涉及到的作用機(jī)制。首先選用免疫磁珠法,分選8周齡雌性C57BL/6小鼠脾臟和淋巴結(jié)細(xì)胞中的CD4~+CD25~+T細(xì)胞進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng),應(yīng)用不同濃度的DYYG化合物加以刺激,隨后通過流式細(xì)胞術(shù)分析CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞增殖情況,采用ELISA法測定培養(yǎng)基上清中TGF-β1和IL-10的濃度。研究發(fā)現(xiàn)DYYG化合物可以促進(jìn)C57BL/6小鼠脾臟和淋巴結(jié)細(xì)胞中的CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞體外增殖,DYYG化合物濃度為100n M時促進(jìn)CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞增殖作用最強;該濃度時細(xì)胞培養(yǎng)基上清中TGF-β1和IL-10濃度明顯升高,因?qū)嶒炦^程中未加入TGF-β1和IL-10,故培養(yǎng)基上清中的TGF-β1和IL-10全部由CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞分泌;因此認(rèn)為DYYG化合物可以促進(jìn)CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞增殖并分泌TGF-β1和IL-10,改善了CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞部分功能,這可能是DYYG化合物通過刺激CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞增殖并發(fā)揮作用的機(jī)制之一。隨后構(gòu)建慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼瘡性腎炎小鼠模型,研究DYYG化合物對狼瘡性腎炎小鼠的治療作用,是否可以刺激cGVHD狼瘡性腎炎小鼠CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞數(shù)量增加,以及CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞是通過何種作用機(jī)制發(fā)揮其對狼瘡性腎炎的治療作用。研究證明DYYG化合物治療可以有效的減輕狼瘡性腎炎小鼠尿蛋白,減少血清抗雙鏈DNA抗體的生成,減輕腎臟的病理損傷;通過流式細(xì)胞術(shù)分析小鼠外周血中的CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞變化,我們發(fā)現(xiàn)cGVHD狼瘡性腎炎小鼠外周血中的CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞顯著減少,而DYYG化合物治療8周后,外周血中CD4~+CD25~+Foxp3~+T細(xì)胞數(shù)量明顯增加,因此認(rèn)為DYYG化合物對cGVHD狼瘡性腎炎的治療機(jī)制,某種程度上與其促進(jìn)狼瘡性腎炎小鼠的CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞的增加有關(guān)。隨后測定小鼠外周血中TGF-β1和IL-10濃度,發(fā)現(xiàn)DYYG化合物治療組TGF-β1和IL-10濃度明顯升高,結(jié)合細(xì)胞實驗結(jié)果,我們認(rèn)為TGF-β1和IL-10濃度的升高可能與DYYG化合物刺激CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞增加有關(guān)。因此我們認(rèn)為DYYG化合物可能通過促進(jìn)調(diào)節(jié)性CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞數(shù)量增加、功能改善發(fā)揮其對cGVHD狼瘡性腎炎小鼠的治療作用。前期實驗中,證實DYYG化合物可以促進(jìn)正常人、C57BL/6小鼠以及cGVHD狼瘡性腎炎小鼠的CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞增殖,因此我們行細(xì)胞實驗進(jìn)一步研究DYYG化合物能否可以影響狼瘡性腎炎患者外周血CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞增殖。研究發(fā)現(xiàn)盡管DYYG化合物對狼瘡性腎炎患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+T細(xì)胞體外增殖作用不明顯,但免疫抑制實驗提示DYYG化合物可以增強CD4~+CD25~+Foxp3~+T細(xì)胞功能。眾多研究表明,體外實驗中CD4~+CD25~+Foxp3~+T細(xì)胞大多可以通過細(xì)胞-細(xì)胞接觸機(jī)制介導(dǎo)免疫調(diào)節(jié),而CTLA-4通過與APC細(xì)胞表面的CD80/CD86結(jié)合,反式作用于APC細(xì)胞,導(dǎo)致T細(xì)胞的增殖減少,這是其細(xì)胞-細(xì)胞接觸介導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)的重要機(jī)制之一。因此我們加入CTLA-4抗體后重復(fù)免疫抑制實驗,研究證實當(dāng)加入CTLA-4抗體后,CD4~+CD25~+Foxp3~+T細(xì)胞免疫抑制能力下降。因此認(rèn)為CTLA-4介導(dǎo)的細(xì)胞-細(xì)胞接觸調(diào)節(jié)也可能是DYYG化合物通過刺激CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞發(fā)揮作用的方式。我們將進(jìn)一步合成DYYG化合物,在小鼠體內(nèi)分別中和TGF-β1、IL-10、CTLA-4后,進(jìn)一步驗證其治療效果及作用機(jī)制。我們的研究也為狼瘡性腎炎的新型治療藥物的研發(fā)打下了基礎(chǔ)。綜上我們得出結(jié)論:1.DYYG化合物可以促進(jìn)C57BL/6小鼠CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞體外增殖;DYYG化合物可以促進(jìn)CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞分泌TGF-β1及IL-10,改善與其相關(guān)的CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞功能。2.DYYG化合物對cGVHD狼瘡性腎炎小鼠具有治療作用;其作用機(jī)制可能與促進(jìn)外周血中CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞增加有關(guān),而CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞發(fā)揮其免疫調(diào)控作用與TGF-β1及IL-10的分泌有一定關(guān)系。3.DYYG化合物可以增強狼瘡性腎炎患者外周血中CD4~+CD25~+FoxP3~+T細(xì)胞的免疫抑制功能,可能與體外CTLA-4介導(dǎo)的細(xì)胞-細(xì)胞接觸機(jī)制發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用有關(guān)。4.本研究也為新型治療狼瘡性腎炎的藥物研發(fā)提供了理論支持。
[Abstract]:The present study found that DYYG compound can promote the proliferation of CD4 ~ + CD25 ~ + FoxP3 ~ + T cells in peripheral blood of normal people . It is suggested that DYYG compound can promote the proliferation of CD4 ~ + CD25 ~ + FoxP3 ~ + T cells in peripheral blood of normal people . It is suggested that DYYG compound can promote the proliferation of CD4 ~ + CD25 ~ + FoxP3 ~ + T cells in peripheral blood of patients with lupus nephritis , and it is suggested that DYYG compounds may enhance the function of CD4 ~ + CD25 ~ + FoxP3 ~ + T cells in peripheral blood of patients with lupus nephritis .

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R593.242

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本文編號：1416977