發(fā)布時間：2016-11-10 13:46

  本文關鍵詞：RGD靶向微泡與載藥微球在肝臟創(chuàng)傷滲血診斷和治療中的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國人民解放軍醫(yī)學院》 2015年

RGD靶向微泡與載藥微球在肝臟創(chuàng)傷滲血診斷和治療中的研究

周璇  

【摘要】：第一部分靶向造影微泡制備及其在肝臟創(chuàng)傷滲血診斷中的研究目的制備三種超聲造影劑：普通脂質微泡(MBMal)、靶向脂質微泡(MBRGD)和對照脂質微泡(MBRAD),分別對其性質進行檢測,并通過動物實驗研究MBRGD在肝臟創(chuàng)傷滲血診斷中的價值。方法(1)采用機械震蕩法制備各型MB,對其進行形態(tài)、分散性、粒徑、電位、計數、多肽連接率、多肽連接量的觀察和測定;(2)對各型MB進行體內外增強顯影;(3)各型MB體外尋靶能力的觀察;(4)對12只新西蘭兔分成兩組進行肝臟創(chuàng)傷造模,造模后兩組均首先靜脈注射MBMal,超聲造影(CEUS)觀察10 min,證明無活動性出血但實際未完全止血情況下,實驗組注射MBRGD,對照組注射MBRAD,觀察病灶區(qū)域造影劑灌注狀況,共計10min,脫機分析數據,每隔1 min應用DFY軟件測量感興趣區(qū)的平均灰度值(AGVs),分別與其之前的MBMal造影圖像作對比分析。結果(1)三種MB光鏡下觀察大小基本一致,分布均勻,分散性較好；MBMal、MBRGD及MBRAD的平均粒徑分別為：4.25±0.67μm,3.71±0.58μm,4.18±0.86μm;平均電位分別為：0.01±7.86mV,-37.3±3.44mV,-34.5±5.21mV;濃度分別是：2.52±0.26×108個/mL,2.74±0.12×108個/mL,2.34±0.46×108個/mL;MBRGD多肽結合率為98.62%,MBRAD的多肽結合率為98.94%;多肽連接量分別是9.76±0.91×104個RGD/MBRGD,10.13±0.34×104個RAD/MBRAD。(2)三種MB均在105數量級濃度時,增強顯影效果最佳,相同數量級濃度條件下三種MB的AGVs統(tǒng)計無明顯差異(P值均大于0.05)。體內增強顯影開始于注射后10s左右,持續(xù)時間均在10 min左右,三種MB在相同時間點的平均灰度值均無明顯差異(P值均大于0.05)。(3)鏡下觀察MBRGD明顯聚集于活化凝集的血小板周圍或內部;MBMal與MBRGD與活化的血小板無明顯團聚或粘附現象。(4)每組中均有5只動物模型制作成功。實驗組CEUS顯示MBRGD在創(chuàng)傷區(qū)域聚集,而對照組未見MBRAD聚集顯影。實驗組MBRGD較之于空白微泡MBMal在CEUS早期即1-3 min的表現相似,創(chuàng)傷灶的AGVs相比無統(tǒng)計學意義,P1min、P2min、P3min均大于0.05;自第4min開始,MBRGD開始在創(chuàng)傷灶內有少量聚集,至第6min,MBRGD進行CEUS的AGVs較之于MBMal均有統(tǒng)計學意義,P4min、 P5min0.01, P6min0.05;第7min時兩者的AGVs比較無統(tǒng)計學意義,P7min0.05;第8、9min時MBRGD的AGVs較前降低,但較之于MBMal仍有統(tǒng)計學意義,P8min 0.05, P9min0.05;至第10min時,兩者的AGVs比較無統(tǒng)計學差異,P10min0.05。對照組MBRAD較之于空白微泡MBMal在各個時間點的AGVs比較均無統(tǒng)計學差異,P值均大于0.05。靶向微泡MBRGD與陰性對照微泡MBRGD進行CEUS的AGVs在各個時間點相比,第4、10min比較差異無統(tǒng)計學意義,P4min0.05,P10min0.05;其余時間點比較則均有統(tǒng)計學意義,其中,第2、3、6、8min比較差異有顯著統(tǒng)計學意義,P2min、P3min、P6min、P8min0.01;第1、5、7、9 min比較差異有統(tǒng)計學意義,P1min、P5min、P7min、P9min0.05。結論機械振蕩法制備RGD靶向脂質微泡方法簡單,成泡率高,粒徑均一,分散度好,體外靶向性好,體內外顯影效果好,對于滲血可以靶向顯影,可嘗試作為診斷肝臟創(chuàng)傷滲血的對比顯影劑,為臨床診斷提供新思路。第二部分載氨甲環(huán)酸靶向微球的制備及其在肝臟創(chuàng)傷滲血治療中的研究目的制備四種高分子材料微球：載氨甲環(huán)酸靶向微球(PLGA-TXA-RGD),載氨甲環(huán)酸空白微球(PLGA-TXA),載氨甲環(huán)酸非靶向微球(PLGA-TXA-RAD),非載藥靶向微球(PLGA-RGD),并對其性質進行檢測,通過動物實驗研究PLGA-TXA-RGD對肝臟創(chuàng)傷滲血的治療價值。方法(1)采用雙乳化法制備各型PLGA微球,對其進行形態(tài)、分散性、結構、粒徑、電位、多肽連接率、載藥量、包封率及釋藥率進行觀察及測定;(2)48只雄性SD大鼠隨機分為6組：生理鹽水組(N.S),靜脈注射TXA組(I.V TXA), PLGA-TXA-RGD組,PLGA-TXA組,PLGA-TXA-RGD組,PLGA-RGD組;肝臟創(chuàng)傷造模后經尾靜脈緩慢注射各組試劑0.5 ml,自造模開始至滲血結束,記錄出血量、出血時間、干增重及3h內死亡率,對各組數據進行統(tǒng)計學分析。(3)創(chuàng)傷灶處組織行冰凍切片處理,熒光顯微鏡下觀察創(chuàng)傷灶切口邊緣及血凝塊中PLGA微球的情況。結果(1)光鏡下觀察各組PLGA微球粒徑較均勻,分散性好,無團聚現象;透射電鏡觀察到微球的結構為球形,可見其殼樣結構,欠光滑;PLGA-TXA-RGD, PLGA-TXA, PLGA-TXA-RAD, PLGA-RGD四種PLGA微球的平均粒徑分別是1811±369.4nm,1747±276.7nm,1831±268.3 nm,1909±305.4nm;平均電位分別是-24.7±4.4 mV,-24.3±4.49mV,-24.6±3.61 mV,-25.5±4.28 mV;流式細胞儀檢測載藥PLGA微球連接RGD和RAD多肽的連接率分別是92.88%和93.85%;載藥PLGA微球的包封率為18.5±2.4%,載藥量為3.7±0.5%。3 h時超聲輻照組的釋藥率達到27.3±1.1%,非超聲輻照組的釋藥率達到20.0±1.6%。 (2)比較各組出血時間(t)、出血量(W)、出血量干增重(W’),P值均小于0.01,差異有顯著統(tǒng)計學意義。組間進行兩兩比較,I.V TXA組與N.S組在t、W、W’上均有統(tǒng)計學差異,P值均小于0.05。對t進行兩兩比較時,PLGA-TXA-RGD組分別與I.V TXA組、PLGA-RGD組相比,P0.05,差異無統(tǒng)計學意義,與PLGA-TXA-RAD組相比,P0.01,差異有顯著統(tǒng)計學意義。對W進行兩兩比較時,PLGA-TXA-RGD組與PLGA-RGD相比,P0.05,差異無統(tǒng)計學意義；與I.V TXA組相比,P0.05,差異有統(tǒng)計學意義;與PLGA-TXA、PLGA-TXA-RAD相比,P0.01,差異有顯著統(tǒng)計學意義。對W’進行兩兩比較時,比較結果同W組。比較各組死亡率,P0.05,差異無統(tǒng)計學意義；兩兩比較,P0.05,差異無統(tǒng)計學意義。(3) PLGA-TXA組與PLGA-TXA-RAD組的創(chuàng)面邊緣未見大量的紅色熒光微球聚集成帶狀,僅在血凝塊內部觀察到紅色熒光。PLGA-RGD組與PLGA-TXA-RGD組的創(chuàng)面邊緣可見橙紅色熒光微球聚集,數量較多,形成帶狀,在靠近創(chuàng)面邊緣形成血凝塊的部位可見紅色熒光微球聚集。結論雙乳化法制作的載氨甲環(huán)酸靶向PLGA微球粒徑均勻,分散性好,包封率及載藥量可,其具備靶向及載藥雙重功能,可作為止血劑靜脈注射用于肝臟創(chuàng)傷后滲血治療。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R657.3
【目錄】：

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