本文關(guān)鍵詞：BCL11A在中國急性髓系白血病病人中的表達(dá)水平及其調(diào)控機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘇州大學(xué)》 2015年

BCL11A在中國急性髓系白血病病人中的表達(dá)水平及其調(diào)控機(jī)制研究

尹甲偉  

【摘要】：目的：選取5個急性髓系白血病(AML)相關(guān)基因,對新診斷的中國和歐洲血統(tǒng)占主要優(yōu)勢的西方AML患者進(jìn)行基因突變差異比較。研究BCL11A在中國AML患者中的表達(dá)水平。對BCL11A上游調(diào)控機(jī)制進(jìn)行深入研究,包括轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)鑒定,啟動子活性分析,髓系分化關(guān)鍵調(diào)控因子CEBPa在BCL11A啟動子上結(jié)合位點(diǎn)的鑒定以及CEBPa對BCL11A的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究。進(jìn)一步探討B(tài)CL11A在白血病發(fā)生過程中起到的致癌基因作用。方法：(1) 收集AML患者骨髓樣本269例,PCR擴(kuò)增NF1,TP53,NRAS, FLT3, DNMT3A5個AML相關(guān)基因并進(jìn)行測序鑒定,分析鑒定其突變情況。(2)TaqMan探針實(shí)時熒光定量方法,精確定量AML患者中BCL11A的表達(dá)水平,并與12例正常人骨髓樣本進(jìn)行比較,分析其表達(dá)是否失調(diào)。(3) 生物信息學(xué)分析及5'-RACE方法對BCL11A轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)進(jìn)行鑒定。(4) 構(gòu)建MBCL11A啟動子及啟動子系列缺失體,通過雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)分析啟動子活性。對活性顯著的啟動子再次進(jìn)行生物信息學(xué)分析,分析其可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。(5) 通過構(gòu)建CEBPA相關(guān)表達(dá)載體,與BCL11A啟動子共轉(zhuǎn)染,CEBPA突變,啟動子結(jié)合位點(diǎn)突變等實(shí)驗(yàn)鑒定CEBPa對BCL11A啟動子活性的影響。(6)通過過表達(dá)CEBPA實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其對內(nèi)源BCL11A表達(dá)的影響。(7) 構(gòu)建HL-60細(xì)胞分化模型,通過分化等實(shí)驗(yàn)來研究ATRA誘導(dǎo)HL-60髓系分化過程中BCL11A所起的作用。結(jié)果：(1) NF1, TP53, DNMT3A, NRAS, FLT3在中國AML患者中的突變頻率分別為0,1%,6%,7%,23%。且這5個基因突變與臨床特征包括年齡、性別、FAB-type和細(xì)胞遺傳學(xué)等沒有顯著的聯(lián)系。除FLT3-ITD外,其余四個基因在中國AML患者中的突變頻率均低于歐洲血統(tǒng)占主要優(yōu)勢的西方AML患者。(2) BCL11A在中國AML患者中表達(dá)失調(diào),表現(xiàn)出一定的高表達(dá)。(3) 5'-RACE實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)BCL11A存在新轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),在NCBI公布的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)基礎(chǔ)上繼續(xù)向上游延伸142bp。(4) BCL11A新轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游500bp堿基序列具有顯著的啟動子活性。(5) 轉(zhuǎn)錄因子CEBPα抑制BCL11A啟動子活性,且抑制作用隨著CEBPA表達(dá)時間的延長和表達(dá)量的增加而加深。CEBPA基因突變后,抑制作用消失。對BCL11A啟動子上CEBPα可能的結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)突變后,BCL11A啟動子活性上升約40%。(6) CEBPA過表達(dá)抑制內(nèi)源BCL11A表達(dá)。(7)HL-60細(xì)胞分化過程中,CEBPA表達(dá)水平上升,BCL11A表達(dá)水平降低,兩者呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。而過表達(dá)BCL11A則會抑制HL-60細(xì)胞分化。結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)與西方研究相比,AML發(fā)生密切相關(guān)的基因在中國AML患者中突變頻率普遍偏低,提示在中國AML的發(fā)生發(fā)展中可能有其他基因通過其他尚未被發(fā)現(xiàn)的機(jī)制起作用。首次發(fā)現(xiàn)BCL11A在中國AML患者中表達(dá)失調(diào)。并在隨后的BCL11A分子遺傳調(diào)控網(wǎng)絡(luò)研究中鑒定了新的BCL11A轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),還首次發(fā)現(xiàn)髓系分化過程中關(guān)鍵的調(diào)控因子CEBPα可能作為一個主要的轉(zhuǎn)錄因子抑制BCL11A的表達(dá),并且抑制作用隨著CEBPA表達(dá)時間的延長和表達(dá)量的增加而加深。HL-60細(xì)胞分化過程中,內(nèi)源CEBPA表達(dá)上升并抑制內(nèi)源BCL11A的表達(dá),兩者呈現(xiàn)負(fù)相關(guān),并且BCL11A高表達(dá)會抑制HL-60細(xì)胞分化。提示BCL11A的表達(dá)下調(diào)是介導(dǎo)CEBPα誘導(dǎo)髓系分化的重要事件。為進(jìn)一步證實(shí)BCL11A在白血病發(fā)生過程中起到致癌基因作用打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.71
【目錄】：

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