本文關(guān)鍵詞：miR-218抑制宮頸癌細(xì)胞EMT、侵襲遷移及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
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miR-218抑制宮頸癌細(xì)胞EMT、侵襲遷移及其機(jī)制研究
姜兆靜；
知網(wǎng)
原文摘要
一、研究背景宮頸癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率僅次于乳腺癌,位居全球第二。超過85%的患者位于發(fā)展中國(guó)家,是嚴(yán)重危害女性身體健康的一種惡性腫瘤,其致死性的主要原因是腫瘤的治療失敗、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。發(fā)生轉(zhuǎn)移的第一步是局限性的侵襲,這需要原發(fā)腫瘤發(fā)生許多表型的改變,其中惡性腫瘤的上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)是引起腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟之一。正常上皮組織的多層細(xì)胞結(jié)構(gòu)不利于惡性腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲,為了獲得運(yùn)動(dòng)和侵襲能力,腫瘤細(xì)胞必須丟失許多的上皮細(xì)胞的表型,使上皮層能夠發(fā)生EMT。發(fā)生EMT的細(xì)胞,一方面失去了上皮細(xì)胞的典型形態(tài),上皮細(xì)胞之間的相互作用消失,組織結(jié)構(gòu)也相對(duì)松散,立方上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榧忓N形纖維細(xì)胞的形態(tài),并且表現(xiàn)出侵襲性；另一方面,細(xì)胞的基因表達(dá)譜也發(fā)生改變,上皮細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白如E-cadherin表達(dá)下調(diào),而間質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志蛋白如N-cadherin表達(dá)上調(diào)。惡性實(shí)體腫瘤中央的細(xì)胞為上皮細(xì)胞的表型,周圍細(xì)胞常常會(huì)呈現(xiàn)間質(zhì)細(xì)胞表型,因此周圍細(xì)胞往往具有較強(qiáng)的運(yùn)動(dòng)能力而促使腫瘤細(xì)胞在局部產(chǎn)生浸潤(rùn),并且侵入到血管和淋巴管進(jìn)而轉(zhuǎn)移至遠(yuǎn)處靶器官,隨后惡性腫瘤的細(xì)胞可以發(fā)生間質(zhì)細(xì)胞向上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化(mesenchyma1—pithelial transitions, MET)來重建細(xì)胞之間的連接以及細(xì)胞骨架,從而形成轉(zhuǎn)移灶。因此EMT是一個(gè)多步驟的動(dòng)態(tài)的可逆的變化過程。microRNA (miRNA)是廣泛存在于真核生物中的非編碼的小分子RNA。miRNA具有明顯的結(jié)構(gòu)特征,即成熟的miRNA通常是由長(zhǎng)度為20-25個(gè)核苷酸的單鏈結(jié)構(gòu)組成,其5’端有一個(gè)磷酸基團(tuán),3’端為羥基。miRNA與其靶基因的mRNA的3’非編碼區(qū)相結(jié)合,能夠通過抑制靶基因mRNA翻譯和促進(jìn)mRNA的降解而抑制靶基因的表達(dá)。由于miRNA與靶基因的結(jié)合并不是完全互補(bǔ)的,因此,同一個(gè)miRNA可以有多個(gè)不同的靶點(diǎn)。而在同一個(gè)miRNA中有兩條部分互補(bǔ)的雙鏈,根據(jù)miRNA在其前體pre-miRNA上的位置分別命名為5p和3p,這兩條鏈可以結(jié)合在不同的mRNA上,各自行使不同的功能。目前,一系列的研究證據(jù)表明,miRNA與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),能夠影響細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移以及EMT。目前所發(fā)現(xiàn)的與腫瘤相關(guān)的miRNA,一部分能夠促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展,具有促進(jìn)惡性腫瘤的作用,而另一些則能夠抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展,發(fā)揮抑制惡性腫瘤的作用。隨著研究的逐步深入,將會(huì)有更多的與腫瘤相關(guān)的miRNA被發(fā)現(xiàn)。microRNA在腫瘤中的表達(dá)常常是失調(diào)的,其表達(dá)特征不僅具有組織特異性,而且在腫瘤發(fā)生的不同階段也各有差異,分析腫瘤的組織特異的microRNA的表達(dá)譜可應(yīng)用于腫瘤的早期診斷并且能夠指導(dǎo)治療。因此,microRNA的研究對(duì)于宮頸癌的診斷、治療以及預(yù)后估計(jì)也具有重要意義。人類SFMBT1是一種PcG蛋白,也屬于MBT (malignant brain tumor)蛋白家族,在維持轉(zhuǎn)錄沉默方面具有重要作用。研究表明SFMBT1可間接促進(jìn)HSC/前體細(xì)胞活性,在維持造血干細(xì)胞的干性特征方面發(fā)揮重要作用。SFMBT1調(diào)節(jié)MyoD介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄沉默從而穩(wěn)定肌源性前體細(xì)胞的未分化狀態(tài),并能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖。SFMBT1參與Snail誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄抑制,從而抑制細(xì)胞的上皮性特征,誘導(dǎo)乳腺癌上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化。SFMBT1是TGF-p抑制肺癌上皮基因表達(dá)促進(jìn)其發(fā)生EMT的過程中必不可少的因素。LSD1-SFMBT1-Snail誘導(dǎo)的染色質(zhì)調(diào)節(jié)程序能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞發(fā)生EMT并促進(jìn)癌癥的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移�？傊�,SFMBT1通過其轉(zhuǎn)錄抑制作用,在維持細(xì)胞干性、促進(jìn)細(xì)胞增殖、促進(jìn)癌癥細(xì)胞EMT及侵襲性方面有重要作用,能夠促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)展和轉(zhuǎn)移,與腫瘤不良預(yù)后相關(guān)。我們的研究發(fā)現(xiàn)SFMBT1是miR-218的直接靶點(diǎn),miR-218能夠通過抑制SFMBT1的表達(dá)而抑制宮頸癌細(xì)胞的EMT和侵襲遷移。我們首次發(fā)現(xiàn)下調(diào)SFMBT1能夠抑制宮頸癌細(xì)胞發(fā)生EMT,與過表達(dá)miR-218的作用相似。而過表達(dá)SFMBT1能夠逆轉(zhuǎn)miR-218抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移能力,也能夠逆轉(zhuǎn)miR-218抑制EMT的作用。這些研究結(jié)果提示,下調(diào)SFMBT1在miR-218抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移能力及抑制EMT的發(fā)生的過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。SCCRO/DCUN1D1/DCN1是一種致癌基因。研究表明,超過50%的頭頸癌、70%肺鱗癌、55%卵巢囊腺癌、34%宮頸癌和內(nèi)膜癌、26%肺腺癌、15%惡性膠質(zhì)瘤存在DCUN1D1的過表達(dá)。DCUN1D1與肺癌的T分期、腫瘤分期相關(guān),其過表達(dá)能促進(jìn)肺鱗癌的局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腦轉(zhuǎn)移,降低肺鱗癌患者的生存期；可以增強(qiáng)細(xì)支氣管肺泡癌細(xì)胞的局部侵襲；能夠參與膠質(zhì)瘤的形成,促進(jìn)惡性膠質(zhì)瘤的進(jìn)展。此外,DCUN1D1的表達(dá)與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-α(VEGF-α)表達(dá)相關(guān),能夠促進(jìn)血管生成。過量飲酒或吸煙能夠引起染色質(zhì)的異常,增強(qiáng)DCUN1D1的表達(dá),而促進(jìn)頭頸鱗癌、肺癌等癌癥的發(fā)生發(fā)展。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)在宮頸癌細(xì)胞中DCUN1D1是miR-218的靶基因,受到miR-218下調(diào)。干擾DCUN1D1能夠抑制宮頸癌細(xì)胞的侵襲和遷移,而過表達(dá)DCUN1D1能夠逆轉(zhuǎn)miR-218對(duì)宮頸癌細(xì)胞侵襲和遷移的調(diào)節(jié)。這些結(jié)果提示,DCUN1D1的下調(diào)在miR-218抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)miR-218在多種腫瘤中異常表達(dá)。miR-218在肺癌、乳腺癌、甲狀腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、前列腺癌、惡性膠質(zhì)瘤、膀胱癌和宮頸癌等惡性腫瘤中均表達(dá)量降低,且在轉(zhuǎn)移腫瘤的表達(dá)低于良性腫瘤。在上述腫瘤miR-218低表達(dá)與侵襲遷移及不良預(yù)后密切相關(guān)。這些研究說明miR-218在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著重要角色。雖然這些研究將miR-218與腫瘤轉(zhuǎn)移聯(lián)系在一起,但miR-218的具體功能以及相應(yīng)的機(jī)制尚不明確,需要進(jìn)一步研究。本研究旨在探究miR-218對(duì)宮頸癌轉(zhuǎn)移的作用及其機(jī)制。二、研究方法1細(xì)胞培養(yǎng)與處理SiHa、HeLa細(xì)胞使用高糖DMEM,分別添加10%胎牛血清,在37℃、CO2的濃度為5%,相對(duì)濕度為50%細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度適時(shí)更換培養(yǎng)基,用0.25%胰蛋白酶-0.02% EDTA工作液消化分散細(xì)胞,進(jìn)行傳代或接種培養(yǎng)。2侵襲遷移試驗(yàn)選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞傳代至24或12孔培養(yǎng)板,正常過夜培養(yǎng),待細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,細(xì)胞融合密度達(dá)80%左右時(shí),采用invitorgen公司lipofactemin 2000轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染,具體操作參考說明書,轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,進(jìn)行侵襲和遷移的檢測(cè)或提取細(xì)胞的總蛋白等。遷移試驗(yàn)時(shí)用無血清培養(yǎng)基重懸1.0×105細(xì)胞接種于BD小室內(nèi)；侵襲試驗(yàn)時(shí)用無血清培養(yǎng)基重懸2.0×105細(xì)胞接種于Matrigel包被的BD小室內(nèi)。37℃培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)24h后取出小室,用PBS輕輕漂洗,用95%甲醇室溫固定20min;0.25%結(jié)晶紫(甲醇配制)染色,室溫染色30min,清水漂凈,用棉簽擦去上室內(nèi)細(xì)胞；鏡下拍照計(jì)數(shù)。3免疫印跡試驗(yàn)冰上裂解細(xì)胞提取總蛋白；SDS-PAGE電泳分離蛋白并轉(zhuǎn)移PVDF膜；5%脫脂奶粉封閉1小時(shí)；4℃孵育一抗過夜；常溫孵育二抗1小時(shí)；化學(xué)發(fā)光法膠片曝光,掃描。4熒光素酶試驗(yàn)充分裂解細(xì)胞,取樣品50μl,加入50微升熒光素酶或p-半乳糖苷酶檢測(cè)試劑,用槍打勻混勻后測(cè)定RLU(relative light unit)。以報(bào)告基因細(xì)胞裂解液為空白對(duì)照。混合后,在37℃放置30分鐘或直至樣品孔內(nèi)出現(xiàn)淺黃色。加入150微升反應(yīng)終止液終止反應(yīng),按儀器操作說明書開啟酶標(biāo)儀或分光光度計(jì),將測(cè)定波長(zhǎng)設(shè)定為420rnm,測(cè)定吸光度。5熒光定量PCR應(yīng)用上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司(Shanghai GenePharma Co.,Ltd)的Ezol提取宮頸癌細(xì)胞總RNA；分光光度計(jì)和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的濃度和純度,進(jìn)行質(zhì)量控制檢測(cè)；采用提供的上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司的Hairpin-itTM miRNAs qPCR Quantitation Kit檢測(cè)試劑盒對(duì)miR-218進(jìn)行實(shí)時(shí)定量,U6作為本實(shí)驗(yàn)的內(nèi)參。具體實(shí)驗(yàn)流程參照Hairpin-itTM miRNAs qPCR Quantitation Kit實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)試劑盒說明。6原位雜交和免疫組化組織芯片原位雜交：脫蠟和水化；0.2N HC1室溫處理；蛋白酶K (40μg/ml)室溫孵育20分鐘；4%多聚甲醛固定10分鐘；預(yù)處理液室溫孵育10分鐘；53℃雜交；室溫封閉；抗地高辛一抗(1：1000)4℃孵育過夜；BCIP/NBT暗處染色；水洗殘液,脫水、封片。組織芯片免疫組化：常規(guī)脫蠟水合；加熱；冷卻至室溫；3%H202室溫處理10min;山羊血清室溫封閉；一抗4℃過夜；二抗室溫孵育；DAB顯色；蘇木素復(fù)染；1%鹽酸酒精分化;水洗反藍(lán)；晾干封片。7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示,應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。兩組之間的差異比較用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)(Independent-samples t test),三組及以上的差異比較應(yīng)用單因素方差分析(One-Way ANOVA)。若方差齊,直接用F檢驗(yàn),并用LSD檢驗(yàn)及進(jìn)行多重比較。若方差不齊,則采用校正的F檢驗(yàn)(Welch法),并用Tamhane’s T2檢驗(yàn)進(jìn)行方差不齊條件下的多重比較。microRNA和靶蛋白的表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系應(yīng)用χ2檢驗(yàn)和Fisher確切概率法。靶蛋白與microRNA的表達(dá)關(guān)系比較應(yīng)用雙變量相關(guān)分析。p<0.05表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三、研究結(jié)果1 miR-218在宮頸癌組織中低表達(dá)并且能夠抑制宮頸癌細(xì)胞的EMT及侵襲遷移(1) miR-218在宮頸癌組織中的表達(dá)低于正常宮頸組織,并與腫瘤分期負(fù)相關(guān)為了進(jìn)一步研究在miR-218與宮頸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系,我們應(yīng)用組織芯片分析了miR-218與宮頸癌病理參數(shù)的關(guān)系。含有104例福爾馬林固定石蠟包埋的宮頸癌及癌旁正常宮頸組織的組織芯片的原位雜交結(jié)果顯示,miR-218在宮頸癌組織中的表達(dá)低于正常宮頸組織,在發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中的表達(dá)低于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織。這一結(jié)果說明miR-218與宮頸癌的進(jìn)展及臨床分期呈負(fù)相關(guān)。(2)miR-218抑制宮頸癌細(xì)胞發(fā)生EMT。為了研究miR-218對(duì)宮頸癌細(xì)胞的影響,我們?cè)趯m頸癌細(xì)胞SiHa和HeLa分別轉(zhuǎn)染miR-218的mimics和miR-218的抑制劑,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-218的mimics,增強(qiáng)miR-218的表達(dá)后能夠抑制宮頸癌細(xì)胞發(fā)生EMT。首先我們轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞,48h后觀察細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組的SiHa細(xì)胞短圓相比,轉(zhuǎn)染miR-218的抑制劑的細(xì)胞形態(tài)變得瘦長(zhǎng),呈梭形,由上皮樣向間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化。此外,細(xì)胞骨架F-actin從雜亂分布轉(zhuǎn)變?yōu)槭鵂罘植�。�?xì)胞的這些變化提示,抑制miR-218的表達(dá)可能促進(jìn)了細(xì)胞發(fā)生EMT。反過來,與對(duì)照組的SiHa細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染miR-218的mimics的細(xì)胞形態(tài)相對(duì)更短圓,細(xì)胞繼續(xù)保持上皮樣特征,細(xì)胞骨架F-actin仍是雜亂分布。細(xì)胞的這些變化提示,miR-218可能抑制了細(xì)胞發(fā)生EMT。為了進(jìn)一步確認(rèn)細(xì)胞發(fā)生了EMT,我們檢測(cè)了EMT相關(guān)蛋白在轉(zhuǎn)染miR-218的mimics和miR-218的抑制劑后的SiHa細(xì)胞和HeLa細(xì)胞的中的變化,結(jié)果顯示與對(duì)照相比,抑制miR-218表達(dá)的宮頸癌細(xì)胞的間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志分子N-cadherin表達(dá)升高,而上皮細(xì)胞標(biāo)志分子E-cadherin表達(dá)下降,而增強(qiáng)miR-218表達(dá)的宮頸癌細(xì)胞的間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志分子N-cadherin表達(dá)下降,而上皮細(xì)胞標(biāo)志分子E-cadherin表達(dá)升高,這一變化符合EMT蛋白的變化特征。上述結(jié)果說明miR-218能夠抑制宮頸癌細(xì)胞發(fā)生EMT。(3)miR-218抑制宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。為了進(jìn)一步驗(yàn)證miR-218對(duì)宮頸癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的影響,我們檢測(cè)了miR-218對(duì)宮頸癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響。結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染miR-218的mimics能夠顯著抑制宮頸癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力,而轉(zhuǎn)染miR-218的抑制劑能夠增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力。這一結(jié)果說明miR-218能夠顯著下調(diào)宮頸癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力。2 miR-218抑制宮頸癌EMT及侵襲遷移的機(jī)制(1) SFMBT1和DCUN1DI是miR-218的靶點(diǎn)尋找miRNA的下游靶基因,是研究miRNA作用機(jī)制的關(guān)鍵。我們結(jié)合生物信息學(xué)策略篩選miR-218的潛在靶點(diǎn)。首先,分別應(yīng)用TargetScan、PicTar、 miRanda靶基因預(yù)測(cè)軟件篩選靶基因。結(jié)合miR-218的功能,我們篩選到8個(gè)抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的基因,分別是HAPLN1、SFMBT1、RNF38、UGT8、ARID4B、 BCAT1、CTNND2 和 DCUN1D1。為了驗(yàn)證這些基因是否是miR-218的直接靶點(diǎn),我們進(jìn)行了熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)。結(jié)果顯示含有SFMBT1和DCUNID1野生型3’端非編碼區(qū)的報(bào)告基因載體的熒光素酶活性有顯著的下降,而其它靶基因沒有顯著下降。這一結(jié)果初步顯示SFMBT1和DCUNIDI是miR-218的直接靶點(diǎn)。然后,我們將含有SFMBT1和DCUN1D1突變型3’端非編碼區(qū)的報(bào)告基因載體進(jìn)行熒光素酶活性檢測(cè),結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-218的mimic與其陰性對(duì)照相比,熒光素酶活性沒有顯著變化。免疫印跡的結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染miR-218后,SFMBT1和DCUN1D1的表達(dá)量下調(diào)。此外,下調(diào)miR-218后,SFMBT1和DCUNID1的表達(dá)量上升。免疫印跡的結(jié)果和熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)的結(jié)果都說明SFMBT1和DCUN1D1是miR-218的靶基因。(2)miR-218通過抑制SFMBT1和DCUN1D1的表達(dá)而抑制宮頸癌細(xì)胞侵襲與遷移能力。為了明確miR-218的功能靶基因,我們分別應(yīng)用特異性的小干擾RNA和過表達(dá)質(zhì)粒下調(diào)或上調(diào)宮頸癌細(xì)胞SFMBT1和DCUN1D1的表達(dá),應(yīng)用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了SFMBT1和DCUNID1對(duì)宮頸癌細(xì)胞細(xì)胞侵襲遷移能力的影響。結(jié)果顯示,過表達(dá)SFMBT1或DCUN1D1后,宮頸癌細(xì)胞SiHa的侵襲能力增強(qiáng)。干擾SFMBT1或DCUN1D1后,宮頸癌細(xì)胞SiHa的侵襲能力下降。此外,過表達(dá)SFMBT1或DCUN1D1均能夠逆轉(zhuǎn)miR-218對(duì)宮頸癌細(xì)胞SiHa細(xì)胞侵襲能力的影響。上述研究表明,miR-218通過抑制SFMBT1或DCUN1D1的表達(dá)而抑制宮頸癌細(xì)胞侵襲與遷移能力。(3)miR-218通過抑制SFMBT1抑制宮頸癌細(xì)胞發(fā)生EMT。過表達(dá)SFMBT1后SiHa細(xì)胞的形態(tài)變得瘦長(zhǎng),呈梭形,這與干擾miR-218的作用一致。而過表達(dá)DCUN1D1后,SiHa細(xì)胞形態(tài)沒有明顯變化。此外,過表達(dá)SFMBT1能夠逆轉(zhuǎn)miR-218對(duì)SiHa細(xì)胞形態(tài)的改變。免疫印跡的結(jié)果顯示,與轉(zhuǎn)染miR-218抑制劑類似,過表達(dá)SFMBT1后SiHa細(xì)胞的間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志分子N-cadherin表達(dá)升高,而上皮細(xì)胞標(biāo)志分子E-cadherin表達(dá)下降。反過來,干擾SFMBT1后SiHa細(xì)胞的間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志分子N-cadherin表達(dá)降低,而上皮細(xì)胞標(biāo)志分子E-cadherin表達(dá)升高。這樣,我們首次發(fā)現(xiàn)下調(diào)SFMBT1能夠抑制宮頸癌EMT。綜上,SFMBT1可能是miR-218抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵分子。(4)miR-218抑制宮頸癌的EMT和侵襲能力受到HPV16 E6的調(diào)控為了明確HPV對(duì)miR-218的表達(dá)及其功能影響,我們檢測(cè)了不同HPV狀態(tài)的宮頸癌細(xì)胞中miR-218的表達(dá)情況,證實(shí)HPV16 E6在宮頸癌細(xì)胞中直接抑制miR-218的表達(dá)。我們通過抑制HPV16 E6發(fā)現(xiàn)了其在宮頸癌的EMT和侵襲能力兩個(gè)方面的作用,結(jié)果表明抑制HPV16 E6可以抑制宮頸癌的EMT和侵襲能力和miR-218功能靶蛋白的表達(dá),而抑制miR-218可以逆轉(zhuǎn)抑制HPV16 E6對(duì)miR-218靶蛋白的影響,因此HPV16 E6可能通過抑制miR-218的表達(dá)而促進(jìn)宮頸癌的EMT和侵襲能力,從而促進(jìn)宮頸癌的轉(zhuǎn)移。這一結(jié)果也說明,miR-218抑制宮頸癌的EMT和侵襲能力是受HPV16E6調(diào)控的。(5) DCUN1D1在宮頸癌組織中的表達(dá)與miR-218的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系為了進(jìn)一步研究miR-218與SFMBT1和DCUN1D1兩個(gè)靶基因的關(guān)系,我們應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)并分析了SFMBT1和DCUN1D1在宮頸癌組織中與miR-218的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果顯示,在宮頸癌組織中,DCUN1D1的信號(hào)強(qiáng)弱的空間分布與miR-218信號(hào)相反,進(jìn)一步對(duì)104例宮頸癌及癌旁正常宮頸組織的DCUNID1信號(hào)強(qiáng)弱統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn),miR-218與DCUNID1信號(hào)強(qiáng)弱呈負(fù)性相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。四、結(jié)論本研究中,我們首次揭示了miR-218在宮頸癌EMT和侵襲遷移過程中的作用及其機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)在宮頸癌中miR-218表達(dá)降低,且在宮頸癌中的表達(dá)量低于正常宮頸組織。在宮頸癌細(xì)胞中,miR-218通過抑制其靶基因SFMBT1和DCUNID1的表達(dá),進(jìn)而抑制宮頸癌細(xì)胞的EMT、侵襲和遷移,最終抑制宮頸癌轉(zhuǎn)移。同時(shí)發(fā)現(xiàn),miR-218抑制宮頸癌的EMT和侵襲能力是受HPV16 E6調(diào)控的。這些發(fā)現(xiàn)揭示了miR-218在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的作用及其機(jī)制,并為SFMBT1和DCUNID1在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用提供了理論依據(jù)。腫瘤轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致腫瘤治療失敗乃至患者死亡的首要原因,該研究將為臨床治療提供參考。
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本文關(guān)鍵詞：miR-218抑制宮頸癌細(xì)胞EMT、侵襲遷移及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
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176953
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