發(fā)布時間：2024-05-28 00:37

　　目的:探討DRG中P2X₇和P2Y₁受體在電針足三里、三陰交緩解內臟痛敏中的作用機制。方法:TNBS灌腸誘導IBS大鼠內臟痛模型,給予足三里_((雙))、三陰交穴_((雙))電針刺激干預(強度1m A,頻率2Hz,波寬0.1ms),15min/次,1次/日,共1周。運用病理形態(tài)學、行為學、逆行示蹤、電生理學、分子生物學等方法,探討DRG中P2X₇和P2Y₁受體介導電針緩解內臟痛敏的神經生物學機制。結果:電針明顯抑制內臟高敏感性,可被鞘內注射氟代檸檬酸部分抑制。電針能夠抑制內臟痛大鼠DRG神經元的興奮性:降低靜息膜電位、上調基強度、抑制神經元動作電位發(fā)放,鞘內注射FCA后電針的調節(jié)作用受到一定程度抑制,表明膠質細胞可能參與電針對神經元電生理學特性的調節(jié)。P2X₇選擇性激動劑Bz ATP增加AWR評分,拮抗劑A740003抑制AWR評分,說明P2X₇在內臟痛敏中發(fā)揮促進作用。Bz ATP拮抗了電針鎮(zhèn)痛效應,A740003能夠協(xié)同電針鎮(zhèn)痛效應。電針顯著抑制P2X...

【文章頁數(shù)】：157 頁

【學位級別】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
引言
第一部分 DRG內膠質細胞介導電針緩解TNBS誘導IBS大鼠內臟痛敏效應觀察
    1.引言
    2.材料和方法
        2.1 實驗動物及倫理
        2.2 主要實驗儀器
        2.3 主要實驗試劑
        2.4 TNBS誘導大鼠IBS內臟痛模型
        2.5 結腸組織微觀病理評分標準
        2.6 結直腸擴張球囊制作
        2.7 內臟運動反射的行為測試
        2.8 溶液配置
        2.9 鞘內注射
        2.10 大鼠穴位定位
        2.11 動物分組與干預方法
        2.12 標本采集與處理
        2.13 結腸組織病理學HE染色
        2.14 結腸相關DRG神經元逆行示蹤
        2.15 DRG神經元急性分離與培養(yǎng)
        2.16 全細胞膜片鉗記錄
        2.17 數(shù)據(jù)采集與分析
    3.結果
        3.1 TNBS誘導結腸炎癥在不同時間微觀病理評分
        3.2 DRG內膠質細胞介導電針緩解TNBS誘導內臟痛效應
        3.3 膠質細胞介導電針調節(jié)TNBS誘導內臟痛大鼠DRG中結腸相關神經元電生理學特性
    4.討論
        4.1 慢性內臟痛病因病機的中醫(yī)認識
        4.2 慢性內臟痛發(fā)病機制研究
        4.3 穴位選擇依據(jù)
        4.4 DRG中“神經元-膠質細胞”共同參與感覺信息整合
        4.5 結腸非炎癥性內臟高敏感
        4.6 DRG膠質細胞參與IBS內臟高敏感性及電針對結腸相關神經元興奮性調節(jié)
    小結
第二部分 DRG膠質細胞P2X₇受體介導電針緩解內臟痛敏研究
    1.引言
    2.材料與方法
        2.1 實驗動物及倫理
        2.2 主要實驗儀器
        2.3 主要實驗試劑
        2.4 TNBS誘導大鼠IBS內臟痛模型
        2.5 內臟運動反射的行為測試
        2.6 溶液配置
        2.7 動物分組與干預方法
        2.8 標本采集與處理
        2.9 免疫熒光雙標
        2.10 Real time PCR m RNA檢測
        2.11 Western Blot蛋白檢測
        2.12 數(shù)據(jù)采集與分析
    3.結果
        3.1 DRG中 GFAP-P2X₇、P2X₃-P2X₇免疫熒光共定位染色
        3.2 DRG膠質細胞中P2X₇介導TNBS誘導IBS內臟痛外周敏化
        3.3 P2X₇介導電針緩解IBS大鼠內臟痛敏
    4.討論
        4.1 嘌呤受體與內臟痛
        4.2 針刺發(fā)揮作用的重要信使物質-ATP
        4.3 P2X₇在TNBS誘導的IBS內臟高敏感過程中發(fā)揮促進作用
        4.4 P2X₇介導電針抑制內臟痛外周敏化
    小結
第三部分 DRG神經元P2Y₁受體介導電針緩解內臟痛敏研究
    1.引言
    2.材料與方法
        2.1 實驗動物及倫理
        2.2 主要實驗儀器
        2.3 主要實驗試劑
        2.4 TNBS誘導大鼠IBS內臟痛模型
        2.5 內臟運動反射的行為測試
        2.6 溶液的配置
        2.7 動物分組與干預方法
        2.8 標本采集與處理
        2.9 免疫熒光雙標
        2.10 Real time PCR m RNA檢測
        2.11 Western Blot蛋白檢測
        2.12 數(shù)據(jù)采集與分析
    3.結果
        3.1 DRG中 GFAP-P2Y₁、P2Y₁-P2X₃免疫熒光共定位染色
        3.2 DRG神經元中P2Y₁介導IBS內臟痛敏的抑制效應
        3.3 P2Y₁介導電針緩解IBS大鼠內臟痛敏
    4.討論
        4.1 DRG神經元P2Y₁介導TNBS誘導IBS內臟痛敏
        4.2 P2Y₁介導電針緩解IBS大鼠內臟痛敏
    小結
第四部分 DRG中 P2X₇→P2Y₁→P2X₃途徑介導電針緩解內臟痛敏研究
    1.引言
    2.材料與方法
        2.1 實驗動物及倫理
        2.2 主要實驗儀器
        2.3 主要實驗試劑
        2.4 TNBS誘導大鼠IBS內臟痛模型
        2.5 內臟運動反射的行為測試
        2.6 動物分組與干預方法
        2.7 標本采集與處理
        2.8 溶液的配置
        2.9 Real time PCR m RNA檢測
        2.10 Western Blot蛋白檢測
        2.11 數(shù)據(jù)采集與分析
    3.結果
        (一)“P2X₇→P2Y₁"介導IBS內臟痛大鼠DRG中“神經元-膠質細胞”信息交互及電針的鎮(zhèn)痛效應
            3.1 膠質細胞P2X₇受體抑制神經元P2Y₁受體介導IBS內臟痛外周敏化
            3.2 “P2X₇→P2Y₁"調節(jié)途徑介導電針緩解IBS內臟痛
        (二)DRG中“P2Y₁→P2X₃"調節(jié)途徑介導IBS內臟痛及電針鎮(zhèn)痛效應
            3.3 內臟痛大鼠結腸相關DRG神經元P2Y₁抑制P2X₃受體表達
            3.4 “P2Y₁→P2X₃"調節(jié)途徑介導電針緩解TNBS誘導IBS內臟痛
    4.討論
        4.1 背根神經節(jié)中“神經元-膠質細胞”與IBS內臟痛
        4.2 “P2X₇→P2Y₁"介導IBS內臟痛大鼠DRG中“神經元-膠質細胞”信息交互及電針的鎮(zhèn)痛效應
        4.3 DRG中“P2Y₁→P2X₃"調節(jié)途徑介導IBS內臟痛敏及電針鎮(zhèn)痛效應
    小結
創(chuàng)新點
結論
研究不足與展望
致謝
參考文獻
附錄一 :文獻綜述 P2受體介導IBS內臟痛外周敏化在中醫(yī)經穴臟腑相關理論中的意義
    參考文獻
附錄二 :在校期間發(fā)表學術論文全文及摘要
附錄三 :參加學術會議情況



本文編號：3983260