發(fā)布時間：2024-09-17 19:29

　　目的:分別觀察miRNA-451、c-Myc以及E-cadherin在三陰性乳腺癌、癌旁組織中的表達(dá)情況以及相互關(guān)系,驗證miRNA-451與c-Myc表達(dá)之間可能存在的調(diào)控關(guān)系,通過慢病毒轉(zhuǎn)染,觀察miRNA-451不同表達(dá)水平下c-Myc、E-cadherin蛋白表達(dá)變化,以及調(diào)控c-Myc表達(dá)對三陰性乳腺癌細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞遷移、侵襲能力以及細(xì)胞周期、凋亡的影響。方法:(1)收集2016-08至2018-02新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院三陰性乳腺癌標(biāo)本16例,采用自身配對的方式對乳腺癌組織以及癌旁組織中作為實驗組以及對照組PCR方法和Western Blot檢測miRNA-451、c-Myc及E-cadherin的基因、蛋白表達(dá)水平;(2)首先構(gòu)建c-Myc 3’UTR野生及突變質(zhì)粒,生物信息方法分析并預(yù)測可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點,PCR方法擴(kuò)增c-Myc基因3’-UTR序列,連接于熒光素酶報告檢測各組熒光素酶活性,以海腎熒光素酶作為對照,檢測細(xì)胞干預(yù)前后螢光素酶變化情況。雙熒光素酶報告結(jié)果,以螢火蟲/海腎熒光素酶比值表示;(3)構(gòu)建穩(wěn)定的MDA-MB-231細(xì)胞,培養(yǎng)穩(wěn)定傳代2-3代后...

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-1RNA電泳圖

表7結(jié)果說明:RNA樣本A260/A280的比值是一種RNA純度檢測方法,比值范圍為1.8-2.1的RNA樣本視為合格。圖1結(jié)果說明:圖中的電泳圖中,28S與18S亮度較高,5S最弱或無條帶,條帶單一完整,視為合格RNA樣本。

圖1-2PCR引物鑒定電泳圖

2.1.2PCR產(chǎn)物電泳圖圖2結(jié)果說明:圖中分別鑒定了檢測基因c-Myc、E-cadherin以及內(nèi)參基因Actin的PCR產(chǎn)物大小(產(chǎn)物大小依循表5),圖中的PCR產(chǎn)物大小符合檢測基因的片段長度,產(chǎn)物條帶單一,其中E-cadherin基因由于本底表達(dá)水平較低,所以PCR產(chǎn)物顯....

圖1-3三陰性乳腺癌與癌旁組織基因表達(dá)量

2.1.4c-Myc、miRNA-451以及E-cadherin在乳腺癌患者臨床資料之間的表達(dá)差異2.2WesternBlot檢測結(jié)果

圖1-4目的蛋白條帶拼接圖

2.2.2蛋白檢測結(jié)果圖1結(jié)果說明:圖中分別鑒定了檢測目的蛋白c-Myc、E-cadherin以及內(nèi)參蛋白β-actin的western結(jié)果,圖中的條帶大小符合目的蛋白的大小。

本文編號：4005935