發(fā)布時(shí)間：2017-12-22 19:17

  本文關(guān)鍵詞：柞蠶滯育蛹解除滯育過程中糖含量變化及海藻糖合成酶基因的表達(dá)分析　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 柞蠶 滯育解除 糖含量變化 海藻糖合成酶基因克隆 表達(dá)分析 原核表達(dá)

【摘要】：柞蠶(Antheraea pernyi)屬于鱗翅目大蠶蛾科柞蠶屬的泌絲昆蟲,屬完全變態(tài)昆蟲,一生經(jīng)歷卵、幼蟲、蛹和成蟲四個(gè)不同的生理階段,以蛹滯育的形式渡過惡劣的外界環(huán)境。研究柞蠶蛹滯育的解除,為實(shí)現(xiàn)柞蠶"一化二放"提供理論依據(jù)。選用沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省昆蟲資源工程技術(shù)研究中心保育的沈黃1號和河南省蠶業(yè)科學(xué)研究院保育的豫大1號為材料,研究光照解除柞蠶滯育蛹滯育方法、測定了柞蠶蛹海藻糖和糖原的含量、克隆了柞蠶海藻糖合成酶基因(ApTPS),并對該基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析、組織表達(dá)譜分析、實(shí)時(shí)熒光定量、原核表達(dá)和Western Blot等研究,結(jié)果如下:1.柞蠶品種沈黃1號和豫大1號滯育蛹解除滯育研究結(jié)果表明,400 Lux、17L:7D的光照組合對豫大1號的滯育解除效果最好,校正羽化率為80%,羽化高峰出現(xiàn)較早;260 Lux、17 L:7 D的光照組合對沈黃1號的滯育解除效果較好,最高校正羽化率為89.9%;400 Lux、17 L:7D組合的羽化高峰期最早。熒光燈處理下,豫大1號的平均校正羽化率較沈黃1號低9.1%,羽化持續(xù)時(shí)間長19.16 d。2.柞蠶滯育蛹解除滯育期間海藻糖和糖原含量測定結(jié)果表明,豫大1號和沈黃1號的海藻糖含量在滯育解除過程中無明顯的變化規(guī)律,豫大1號在自然光處理期間糖原含量無明顯變化規(guī)律,在400 Lux、17 L:7D光照處理期間,糖原含量呈先下降后上升的趨勢,而沈黃1號的糖原含量在400 Lux、17 L:7 D光照和自然光光照處理下都呈持續(xù)下降的趨勢。3.克隆獲得了柞蠶海藻糖合成酶基因ApTPS(GenBank收錄號為KU977454),開放閱讀框ORF長2 487 bp,編碼828個(gè)氨基酸,推測其蛋白分子量為93.19 KDa,等電點(diǎn)(pI)4.61,無信號肽,無跨膜區(qū),蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位預(yù)測該蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)中。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域分析表明,ApTPS有2個(gè)保守功能區(qū):TPS(第22-497位氨基酸)和TPP(第532-772位氨基酸)。4.采用半定量RT-PCR技術(shù)對柞蠶幼蟲各組織ApTPS基因特異性分析表明,ApTPS基因在柞蠶各組織中均有表達(dá),其中脂肪體中表達(dá)量最高。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測了柞蠶蛹解除滯育過程的ApTPS基因表達(dá)量,ApTPS基因在脂肪體和血淋巴中的表達(dá)量均有所升高且顯著高于對照組(P0.05),血淋巴中表達(dá)量的升高滯后于脂肪體。5.以pET-28a為質(zhì)粒,設(shè)計(jì)引物構(gòu)建ApTPS基因原核表達(dá)載體,對表達(dá)的目的蛋白進(jìn)行了純化,制備了抗體和Western blot等驗(yàn)證,結(jié)果表明ApTPS基因原核表達(dá)重組載體構(gòu)建成功,通過對柞蠶蛹滯育解除期間脂肪體ApTPS的Western Blot分析,結(jié)果與實(shí)時(shí)定量PCR的結(jié)果一致,都呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S885.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉景毅;林健榮;;家蠶滯育及滯育解除機(jī)制研究進(jìn)展[J];廣東蠶業(yè);2011年03期

2 黎萬順;陳斌;何正波;;蔥蠅非滯育、冬滯育和夏滯育蛹發(fā)育和形態(tài)特征比較[J];昆蟲學(xué)報(bào);2012年07期

3 蔣猷龍;;桑蠶卵滯育機(jī)理研究進(jìn)展[J];蠶桑通報(bào);1980年03期

4 吳敦肅 ,王高順;桑蠶卵的滯育[J];廣西蠶業(yè)通訊;1982年02期

5 蘇樹鑫;滕國良;伍錫生;;家蠶越年蠶卵冬季解除滯育的調(diào)查[J];江蘇蠶業(yè);1982年03期

6 島田順;沈衛(wèi)德;;家蠶咽側(cè)體在誘導(dǎo)卵滯育中的作用[J];國外農(nóng)學(xué)-蠶業(yè);1986年04期

7 沈榮武;薛芳森;;二化螟滯育發(fā)生的特點(diǎn)及其與化性的關(guān)系[J];江西植保;1987年02期

8 李亞新,張乃鑫;偽鈍綏螨滯育的研究[J];植物保護(hù);1990年05期

9 Eiichi Kuwano;承憲成;;用幾種咪唑解除天蠶卵的滯育[J];國外農(nóng)學(xué)-蠶業(yè);1992年04期

10 蔣滿貴;家蠶卵酯酶A與滯育性關(guān)系研究進(jìn)展[J];廣西蠶業(yè);2000年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 黃少虹;江幸福;羅禮智;;昆蟲滯育發(fā)生與調(diào)控的生理生態(tài)機(jī)制[A];植物保護(hù)與現(xiàn)代農(nóng)業(yè)——中國植物保護(hù)學(xué)會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

2 肖海軍;何海敏;朱杏芬;薛芳森;;低溫和光周期對黑紋粉蝶滯育解除的影響[A];植�？萍紕�(chuàng)新與病蟲防控專業(yè)化——中國植物保護(hù)學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

3 李秉，

本文編號：1320684