發(fā)布時(shí)間：2017-12-22 19:17

  本文關(guān)鍵詞：柞蠶滯育蛹解除滯育過程中糖含量變化及海藻糖合成酶基因的表達(dá)分析　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：柞蠶(Antheraea pernyi)屬于鱗翅目大蠶蛾科柞蠶屬的泌絲昆蟲,屬完全變態(tài)昆蟲,一生經(jīng)歷卵、幼蟲、蛹和成蟲四個(gè)不同的生理階段,以蛹滯育的形式渡過惡劣的外界環(huán)境。研究柞蠶蛹滯育的解除,為實(shí)現(xiàn)柞蠶"一化二放"提供理論依據(jù)。選用沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省昆蟲資源工程技術(shù)研究中心保育的沈黃1號(hào)和河南省蠶業(yè)科學(xué)研究院保育的豫大1號(hào)為材料,研究光照解除柞蠶滯育蛹滯育方法、測定了柞蠶蛹海藻糖和糖原的含量、克隆了柞蠶海藻糖合成酶基因(ApTPS),并對(duì)該基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析、組織表達(dá)譜分析、實(shí)時(shí)熒光定量、原核表達(dá)和Western Blot等研究,結(jié)果如下:1.柞蠶品種沈黃1號(hào)和豫大1號(hào)滯育蛹解除滯育研究結(jié)果表明,400 Lux、17L:7D的光照組合對(duì)豫大1號(hào)的滯育解除效果最好,校正羽化率為80%,羽化高峰出現(xiàn)較早;260 Lux、17 L:7 D的光照組合對(duì)沈黃1號(hào)的滯育解除效果較好,最高校正羽化率為89.9%;400 Lux、17 L:7D組合的羽化高峰期最早。熒光燈處理下,豫大1號(hào)的平均校正羽化率較沈黃1號(hào)低9.1%,羽化持續(xù)時(shí)間長19.16 d。2.柞蠶滯育蛹解除滯育期間海藻糖和糖原含量測定結(jié)果表明,豫大1號(hào)和沈黃1號(hào)的海藻糖含量在滯育解除過程中無明顯的變化規(guī)律,豫大1號(hào)在自然光處理期間糖原含量無明顯變化規(guī)律,在400 Lux、17 L:7D光照處理期間,糖原含量呈先下降后上升的趨勢,而沈黃1號(hào)的糖原含量在400 Lux、17 L:7 D光照和自然光光照處理下都呈持續(xù)下降的趨勢。3.克隆獲得了柞蠶海藻糖合成酶基因ApTPS(GenBank收錄號(hào)為KU977454),開放閱讀框ORF長2 487 bp,編碼828個(gè)氨基酸,推測其蛋白分子量為93.19 KDa,等電點(diǎn)(pI)4.61,無信號(hào)肽,無跨膜區(qū),蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位預(yù)測該蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)中。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域分析表明,ApTPS有2個(gè)保守功能區(qū):TPS(第22-497位氨基酸)和TPP(第532-772位氨基酸)。4.采用半定量RT-PCR技術(shù)對(duì)柞蠶幼蟲各組織ApTPS基因特異性分析表明,ApTPS基因在柞蠶各組織中均有表達(dá),其中脂肪體中表達(dá)量最高。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測了柞蠶蛹解除滯育過程的ApTPS基因表達(dá)量,ApTPS基因在脂肪體和血淋巴中的表達(dá)量均有所升高且顯著高于對(duì)照組(P0.05),血淋巴中表達(dá)量的升高滯后于脂肪體。5.以pET-28a為質(zhì)粒,設(shè)計(jì)引物構(gòu)建ApTPS基因原核表達(dá)載體,對(duì)表達(dá)的目的蛋白進(jìn)行了純化,制備了抗體和Western blot等驗(yàn)證,結(jié)果表明ApTPS基因原核表達(dá)重組載體構(gòu)建成功,通過對(duì)柞蠶蛹滯育解除期間脂肪體ApTPS的Western Blot分析,結(jié)果與實(shí)時(shí)定量PCR的結(jié)果一致,都呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S885.1

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本文編號(hào)：1320684