發(fā)布時間：2017-12-22 19:26

  本文關(guān)鍵詞：鹽脅迫下大頭典竹差異蛋白組學(xué)的研究　出處：《福建農(nóng)林大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：高鹽濃度的土壤不利于大多植被的生長,而大頭典竹作為我國東南沿海成功引種的樹種之一,在當?shù)乇憩F(xiàn)出較強的適應(yīng)性,研究其耐鹽機制尤為重要。以2年生的大頭典竹為試驗材料,對盆栽的大頭典竹進行正常的澆水處理和濃度為0.4%、0.6%的NaCl鹽溶液處理。試驗經(jīng)優(yōu)化后的大頭典竹雙向電泳技術(shù),獲得鹽脅迫前后蛋白差異表達譜,質(zhì)譜鑒定確定差異蛋白的信息功能,為充分認識植物的耐鹽機制提供理論基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:(1)試驗比對了 TCA丙酮法、Tris-酚抽法、三氯乙酸-丙酮法與酚抽結(jié)合法三種不同蛋白提取方法的凝膠圖譜效果,同時還從膠條水化運行方式、等點聚焦程序(IEF)參數(shù)設(shè)置、蛋白上樣量幾個方面進行優(yōu)化,獲得適用于大頭典竹的雙向電泳體系:采用三氯乙酸-丙酮法與酚抽結(jié)合法提取葉片蛋白,17 cm pH 5-8IPG膠條在等電聚焦程序參數(shù)為65000 VH條件下,采用膠面向上、被動水化24 h的運行方式,蛋白上樣量為50μL,獲得的凝膠圖譜重復(fù)性好,分辨率高。(2)利用優(yōu)化后的適合大頭典竹的雙向電泳體系,獲得鹽脅迫前后的凝膠圖譜蛋白點均為600個左右。經(jīng)PDQuest8.0.1蛋白軟件分析,獲得在統(tǒng)計學(xué)上具有意義的差異蛋白點。在0.4%鹽濃度脅迫下,得到34個顯著的差異蛋白(12個蛋白上調(diào),22個蛋白下調(diào))。在0.6%鹽濃度脅迫下,得到的差異蛋白有40個(13個上調(diào),27個下調(diào))。(3)共挑選18個差異的蛋白質(zhì)譜鑒定分析,成功鑒定15個。其中,在0.4%和0.6%鹽濃度脅迫下,放氧增強子蛋白1、放氧增強子蛋白3、核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶、磷酸甘油酸激酶的表達量隨著鹽濃度的升高而增加。谷氨酰胺合成酶、抗壞血酸過氧化物酶2的表達量均表現(xiàn)上調(diào)。ATP合酶β亞基、ATP合酶的表達量均表現(xiàn)顯著下調(diào),ATP合酶α亞基表達量呈現(xiàn)先上調(diào)后下調(diào)的趨勢。(4)對15個差異蛋白進行GO(Gene Ontology)注釋和KEGG分析,大多數(shù)差異蛋白位于細胞部位,主要參與了細胞過程和代謝過程,以離子結(jié)合功能、轉(zhuǎn)運活性功能、催化活性功能為主。其主要涉及到光合作用代謝通路(4個),氧化磷酸化代謝通路(3個),三羧酸代謝(5個)和光合生物中的碳固定(5個)等代謝途徑。將成功鑒定的差異蛋白劃分為類,涉及到光合作用相關(guān)蛋白(20%)、能量代謝相關(guān)蛋白(20%)、碳代謝相關(guān)蛋白(34%)、細胞防御蛋白相關(guān)蛋白(13%)、其它和未知蛋白(13%)。(5)試驗發(fā)現(xiàn)核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶、谷氨酰胺合成酶(細胞防御性相關(guān)蛋白)、抗壞血酸過氧化物酶2(耐受性蛋白)在響應(yīng)鹽脅迫都高豐度表達,它們在大頭典竹抗鹽機制中可能承擔重要的作用。
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S795

【參考文獻】

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本文編號：1320715