發(fā)布時(shí)間：2017-12-22 21:25

  本文關(guān)鍵詞：木犀草素對(duì)化膿隱秘桿菌MATE基因抑制作用的研究　出處：《沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：化膿隱秘桿菌(Trueperellapyogenes)是一種可引起動(dòng)物化膿性感染的重要病原菌,由于該菌耐藥性迅猛發(fā)展,已受到學(xué)者廣泛關(guān)注。主動(dòng)外排系統(tǒng)的存在是導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生的重要因素之一,現(xiàn)存外排泵抑制劑(EPIs)雖能消減菌體對(duì)抗菌藥的排出,卻因?yàn)閯┝扛�、副作用大而在臨床應(yīng)用中受到限制。本研究分析了化膿隱秘桿菌外排基因與其耐藥相關(guān)性,并探究木犀草素對(duì)該菌外排基因的影響,以期為木犀草素作為抗菌新藥的研發(fā)奠定基礎(chǔ),對(duì)減少化膿隱秘桿菌耐藥性的產(chǎn)生具有重要意義。本研究通過(guò)分子生物學(xué)和生物信息學(xué)技術(shù)相結(jié)合的方法,對(duì)化膿隱秘桿菌MATE基因進(jìn)行篩查;并對(duì)該基因所編碼蛋白質(zhì)的二級(jí)、三級(jí)結(jié)構(gòu)及其保守結(jié)構(gòu)域等進(jìn)行預(yù)測(cè)分析。結(jié)果顯示,化膿隱秘桿菌分離株中MATE基因的攜帶率為94.12%(32/34),該基因共編碼436個(gè)氨基酸,相對(duì)分子量為44.94232 kD,理論等電點(diǎn)為10.05,總平均親水性指數(shù)(GRAVY)為0.873;該轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白最有可能分布于細(xì)胞膜上;不含信號(hào)肽序列、N-糖基化位點(diǎn),含有12個(gè)跨膜區(qū)域、25個(gè)磷酸化位點(diǎn);其二級(jí)結(jié)構(gòu)是以α-螺旋為主的混合結(jié)構(gòu),含有2個(gè)保守結(jié)構(gòu)域;未預(yù)測(cè)出較可靠的蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)。采用微量肉湯稀釋法分別測(cè)定木犀草素和慶大霉素對(duì)34株化膿隱秘桿菌的最小抑菌濃度(MIC)。選取對(duì)慶大霉素耐藥的化膿隱秘桿菌,通過(guò)棋盤法測(cè)定兩種藥物聯(lián)合抑菌效果。經(jīng)亞抑菌濃度木犀草素作用耐藥菌株,比較木犀草素作用前后化膿隱秘桿菌對(duì)慶大霉素的耐藥性變化情況。結(jié)果表明,木犀草素對(duì)化膿隱秘桿菌的MIC值為39～156 μg/mL,與慶大霉素聯(lián)合的作用為不相關(guān);耐藥菌經(jīng)亞抑菌濃度木犀草素(1/4MIC)作用36 h后,慶大霉素對(duì)耐藥菌的MIC值下降2～32倍,且原菌株耐藥水平越高,MIC下降倍數(shù)越高。提示木犀草素具有良好抗菌活性的體外抗菌活性,且能夠消減化膿隱秘桿菌耐藥性。選取8株攜帶MATE基因的耐慶大霉素化膿隱秘桿菌,通過(guò)熒光定量PCR擴(kuò)增等方法,研究木犀草素對(duì)化膿隱秘桿菌MATE基因序列及其mRNA表達(dá)量的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),經(jīng)亞抑菌濃度木犀草素(1/4MIC)作用后,對(duì)MATE基因的堿基序列沒(méi)有變化,但MATE基因mRNA表達(dá)量均下降,且隨著該基因mRNA表達(dá)量的下降,菌株MIC值亦呈下降趨勢(shì),但傳代后變化趨勢(shì)不明顯。初步說(shuō)明,木犀草素可能通過(guò)抑制化膿隱秘桿菌MATE基因mRNA的表達(dá)量而影響其耐藥性。本研究從外排基因入手,預(yù)測(cè)并分析化膿隱秘桿菌MATE基因與其耐藥相關(guān)性,探究木犀草素抑菌活性及其對(duì)化膿隱秘桿菌外排基因的影響,將對(duì)研究該菌耐藥機(jī)制及延緩該菌耐藥性的產(chǎn)生具有重要意義,同時(shí)為木犀草素作為新型抗菌藥物的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.61

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本文編號(hào)：1321088