發(fā)布時(shí)間：2017-12-22 21:25

  本文關(guān)鍵詞：木犀草素對化膿隱秘桿菌MATE基因抑制作用的研究　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 化膿隱秘桿菌 主動外排系統(tǒng) 木犀草素 耐藥性 耐藥機(jī)制

【摘要】：化膿隱秘桿菌(Trueperellapyogenes)是一種可引起動物化膿性感染的重要病原菌,由于該菌耐藥性迅猛發(fā)展,已受到學(xué)者廣泛關(guān)注。主動外排系統(tǒng)的存在是導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生的重要因素之一,現(xiàn)存外排泵抑制劑(EPIs)雖能消減菌體對抗菌藥的排出,卻因?yàn)閯┝扛摺⒏弊饔么蠖�在臨床應(yīng)用中受到限制。本研究分析了化膿隱秘桿菌外排基因與其耐藥相關(guān)性,并探究木犀草素對該菌外排基因的影響,以期為木犀草素作為抗菌新藥的研發(fā)奠定基礎(chǔ),對減少化膿隱秘桿菌耐藥性的產(chǎn)生具有重要意義。本研究通過分子生物學(xué)和生物信息學(xué)技術(shù)相結(jié)合的方法,對化膿隱秘桿菌MATE基因進(jìn)行篩查;并對該基因所編碼蛋白質(zhì)的二級、三級結(jié)構(gòu)及其保守結(jié)構(gòu)域等進(jìn)行預(yù)測分析。結(jié)果顯示,化膿隱秘桿菌分離株中MATE基因的攜帶率為94.12%(32/34),該基因共編碼436個(gè)氨基酸,相對分子量為44.94232 kD,理論等電點(diǎn)為10.05,總平均親水性指數(shù)(GRAVY)為0.873;該轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白最有可能分布于細(xì)胞膜上;不含信號肽序列、N-糖基化位點(diǎn),含有12個(gè)跨膜區(qū)域、25個(gè)磷酸化位點(diǎn);其二級結(jié)構(gòu)是以α-螺旋為主的混合結(jié)構(gòu),含有2個(gè)保守結(jié)構(gòu)域;未預(yù)測出較可靠的蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)。采用微量肉湯稀釋法分別測定木犀草素和慶大霉素對34株化膿隱秘桿菌的最小抑菌濃度(MIC)。選取對慶大霉素耐藥的化膿隱秘桿菌,通過棋盤法測定兩種藥物聯(lián)合抑菌效果。經(jīng)亞抑菌濃度木犀草素作用耐藥菌株,比較木犀草素作用前后化膿隱秘桿菌對慶大霉素的耐藥性變化情況。結(jié)果表明,木犀草素對化膿隱秘桿菌的MIC值為39～156 μg/mL,與慶大霉素聯(lián)合的作用為不相關(guān);耐藥菌經(jīng)亞抑菌濃度木犀草素(1/4MIC)作用36 h后,慶大霉素對耐藥菌的MIC值下降2～32倍,且原菌株耐藥水平越高,MIC下降倍數(shù)越高。提示木犀草素具有良好抗菌活性的體外抗菌活性,且能夠消減化膿隱秘桿菌耐藥性。選取8株攜帶MATE基因的耐慶大霉素化膿隱秘桿菌,通過熒光定量PCR擴(kuò)增等方法,研究木犀草素對化膿隱秘桿菌MATE基因序列及其mRNA表達(dá)量的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),經(jīng)亞抑菌濃度木犀草素(1/4MIC)作用后,對MATE基因的堿基序列沒有變化,但MATE基因mRNA表達(dá)量均下降,且隨著該基因mRNA表達(dá)量的下降,菌株MIC值亦呈下降趨勢,但傳代后變化趨勢不明顯。初步說明,木犀草素可能通過抑制化膿隱秘桿菌MATE基因mRNA的表達(dá)量而影響其耐藥性。本研究從外排基因入手,預(yù)測并分析化膿隱秘桿菌MATE基因與其耐藥相關(guān)性,探究木犀草素抑菌活性及其對化膿隱秘桿菌外排基因的影響,將對研究該菌耐藥機(jī)制及延緩該菌耐藥性的產(chǎn)生具有重要意義,同時(shí)為木犀草素作為新型抗菌藥物的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.61

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本文編號：1321088