發(fā)布時間：2017-12-24 07:12

  本文關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測試紙的研制　出處：《鄭州大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關(guān)文章： 豬圓環(huán)病毒2型 Cap蛋白 膠體金免疫層析試紙

【摘要】：豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)能夠引發(fā)斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS),對養(yǎng)豬業(yè)危害極大。PCV2不斷變異且易與其他病毒混合感染,為其檢測帶來重重困難。目前PCV2抗體檢測方法主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和膠體金免疫層析試紙(immunochromatographic strip,ICS),其中ICS具有快速、靈敏、特異、結(jié)果易判讀、不需要專業(yè)實驗操作人員和精密的儀器設(shè)備等優(yōu)點,因此比較適用于大量臨床血清的現(xiàn)場快速檢測。本研究旨在獲得具有良好免疫反應(yīng)性的PCV2重組衣殼蛋白(capsid protein,Cap protein),并制備PCV2抗體檢測膠體金免疫層析試紙,以期給PCV2疫苗的評價及免疫方案的制定提供技術(shù)支撐。本研究的內(nèi)容和結(jié)果如下:1.豬圓環(huán)病毒病2型Cap蛋白的純化本研究將菌種pET-28a-ORF2-BL21,進行IPTG誘導表達,利用鎳親和層析法純化可溶性重組Cap蛋白,并對其進行鑒定。結(jié)果表明,表達的重組蛋白分子量約為26 kDa,主要以可溶性蛋白的形式存在,純化后的蛋白純度可達90%,濃度為1.31 mg/mL,每升菌液純化可得30.6 mg蛋白。Western bloting和間接ELISA實驗證實重組蛋白能夠與PCV2陽性血清反應(yīng)。本研究所制備的重組Cap蛋白具有較高的純度和良好的免疫反應(yīng)性,有望用于PCV2抗體檢測免疫層析試紙的研制。2.豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測膠體金免疫試紙的研制用膠體金標記重組PCV2 Cap蛋白,并將標記后的Cap蛋白噴涂于玻璃纖維膜上,制備金標墊,將金黃色葡萄球菌A蛋白噴涂在檢測線上,并將PCV2多克隆抗體IgG噴涂在質(zhì)控線上,組裝成試紙條,鑒定試紙條的性能。結(jié)果顯示,該試紙結(jié)果判讀時間為5 min,對PCV2陽性血清有高度的特異性,而與豬其它相關(guān)病毒的陽性血清無交叉反應(yīng),試紙條的靈敏性為1�U25600與商品化ELISA試劑盒相近。試紙在室溫存儲6個月,其性能無明顯變化。用該試紙檢測274份血清樣品,結(jié)果表明,其與國產(chǎn)豬圓環(huán)病毒2型ELISA試劑盒總符合率為98.17%(269/274)。本研究制備的PCV2抗體檢測膠體金免疫層析試紙具有高度特異、快捷靈敏、穩(wěn)定準確且操作簡單等特點,適用于大量臨床樣品的檢測,為PCV2的抗體檢測提供了有效的工具。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S852.651

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本文編號：1327371