新型非編碼RNA Vvrr1參與溶藻弧菌毒力調(diào)控的機制研究
發(fā)布時間：2020-12-05 12:02
溶藻弧菌廣泛分布于世界各地的海水及河口處,存在于多種海洋動物的體表及體內(nèi),是海洋養(yǎng)殖環(huán)境中最常見的條件致病菌之一。近年來,由于氣候變化及海水溫度上升的影響,溶藻弧菌感染的發(fā)病率顯著增加,給我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。本課題組早期從自然發(fā)病的養(yǎng)殖大黃魚中分離出具有較強毒性的溶藻弧菌ND-01菌株,并對其進行轉(zhuǎn)錄組測序分析,發(fā)現(xiàn)了一種具有毒力調(diào)控作用的非編碼RNA Vvrr1（Vibrio virulence regulatory RNA 1）。本研究通過構(gòu)建Vvrr1過表達菌株并進行蛋白質(zhì)組學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)多種與毒力相關(guān)的Vvrr1潛在靶基因,其中pykF及l(fā)euO在Vvrr1參與的溶藻弧菌毒力調(diào)控機制中發(fā)揮著重要的樞紐作用。此外,我們不僅利用GFP報告基因分析技術(shù)明確了Vvrr1與pykF的作用方式,還利用轉(zhuǎn)錄組測序及Chip-seq預(yù)測、篩選了LeuO靶基因及其靶標(biāo)ncRNA,為Vvrr1、pykF、leuO參與調(diào)控溶藻弧菌毒力的機制提供理論基礎(chǔ)。通過以上研究,我們在溶藻弧菌中總結(jié)出兩種Vvrr1參與毒力調(diào)控的可能模式:（1）以“Vvrr1-pykF”為主軸的與粘附相關(guān)的毒力調(diào)控...
【文章來源】：集美大學(xué)福建省
【文章頁數(shù)】：106 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
Vvrr1的結(jié)構(gòu)與序列
集美大學(xué)碩士學(xué)位論文新型非編碼RNAVvrr1參與溶藻弧菌毒力調(diào)控的機制研究34離子及低pH脅迫的菌株中，Vvrr1的表達水平顯著增加，該結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果相一致（圖3-2）。圖3-2Vvrr1在脅迫條件下的表達水平注：由溴化乙錠染色的核糖體(r)RNA帶作為負(fù)載對照（上排泳道）。3.1.3Vvrr1敲除菌株的構(gòu)建以及粘附能力的檢驗根據(jù)轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果可知，Vvrr1表達水平的升高伴隨著菌株粘附能力的減弱，因此我們認(rèn)為在脅迫條件下，Vvrr1可能介導(dǎo)溶藻弧菌的粘附能力調(diào)控。為了證實該猜想，我們構(gòu)建了Vvrr1敲除菌株并進行PCR驗證（圖3-3.a）。同時我們在同等脅迫條件下，對溶藻弧菌野生菌株和Vvrr1敲除菌株進行粘附能力的檢測，發(fā)現(xiàn)與野生菌株相比，敲除菌株的粘附能力顯著增加（圖3-3.b）。以上結(jié)果顯示Vvrr1無論是高表達還是敲除，都會對溶藻弧菌的粘附能力產(chǎn)生一定影響，這說明Vvrr1在調(diào)控溶藻弧菌的粘附機制中扮演著重要角色。圖3-3Vvrr1表達水平的驗證及粘附能力的檢測注：（a）Vvrr1敲除菌株的構(gòu)建與驗證，其中WT及△Vvrr1都使用Vvrr1敲除的上下游引物進行擴增；（b）對WT及V△vrr1菌株粘附能力的比較（**P<0.01）。
集美大學(xué)碩士學(xué)位論文新型非編碼RNAVvrr1參與溶藻弧菌毒力調(diào)控的機制研究34離子及低pH脅迫的菌株中，Vvrr1的表達水平顯著增加，該結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果相一致（圖3-2）。圖3-2Vvrr1在脅迫條件下的表達水平注：由溴化乙錠染色的核糖體(r)RNA帶作為負(fù)載對照（上排泳道）。3.1.3Vvrr1敲除菌株的構(gòu)建以及粘附能力的檢驗根據(jù)轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果可知，Vvrr1表達水平的升高伴隨著菌株粘附能力的減弱，因此我們認(rèn)為在脅迫條件下，Vvrr1可能介導(dǎo)溶藻弧菌的粘附能力調(diào)控。為了證實該猜想，我們構(gòu)建了Vvrr1敲除菌株并進行PCR驗證（圖3-3.a）。同時我們在同等脅迫條件下，對溶藻弧菌野生菌株和Vvrr1敲除菌株進行粘附能力的檢測，發(fā)現(xiàn)與野生菌株相比，敲除菌株的粘附能力顯著增加（圖3-3.b）。以上結(jié)果顯示Vvrr1無論是高表達還是敲除，都會對溶藻弧菌的粘附能力產(chǎn)生一定影響，這說明Vvrr1在調(diào)控溶藻弧菌的粘附機制中扮演著重要角色。圖3-3Vvrr1表達水平的驗證及粘附能力的檢測注：（a）Vvrr1敲除菌株的構(gòu)建與驗證，其中WT及△Vvrr1都使用Vvrr1敲除的上下游引物進行擴增；（b）對WT及V△vrr1菌株粘附能力的比較（**P<0.01）。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]海洋性弧菌致病機制研究進展[J]. 丁淑妍,侯麗艷,于成勇,張劍,解潔,黃忠義,曲業(yè)敏,李文曉,王明義. 職業(yè)與健康. 2019(07)
[2]海水養(yǎng)殖中水產(chǎn)動物主要致病弧菌研究進展[J]. 王鳳青,孫玉增,任利華,姜向陽,姜芳,崔艷梅,劉麗娟. 中國漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn). 2018(02)
[3]黃姑魚源溶藻弧菌的分離鑒定[J]. 鄭晨暉. 北京農(nóng)業(yè). 2014(27)
[4]溶藻弧菌對水產(chǎn)動物致病性及其防治的研究進展[J]. 苑淑賓,朱愛意. 浙江海洋學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版). 2012(03)
[5]不同毒力溶藻弧菌脂多糖的多態(tài)性研究[J]. 宣雄智,謝珍玉,周永燦,王世鋒,吳學(xué)貴. 漁業(yè)科學(xué)進展. 2011(01)
[6]致病溶藻弧菌脂多糖對點帶石斑魚毒性和免疫原性的影響[J]. 徐先棟,謝珍玉,王世鋒,宣雄智,周永燦. 海洋科學(xué). 2010(03)
[7]副溶血弧菌毒力因子及其致病機理研究進展[J]. 楊振泉,焦新安. 中國人獸共患病學(xué)報. 2008(11)
[8]病原性溶藻弧菌對大黃魚鰓黏液黏附作用研究[J]. 鄢慶枇,陳強,馬甡,莊峙廈,王小如. 海洋學(xué)報(中文版). 2007(06)
[9]霍亂弧菌TCP研究最新進展綜述[J]. 胡守奎. 安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2007(04)
[10]魚源溶藻弧菌胞外產(chǎn)物的特性研究[J]. 左鳳琴,簡紀(jì)常,吳灶和. 水生生物學(xué)報. 2006(05)
博士論文
[1]溶藻弧菌主要毒力相關(guān)基因的克隆、表達及其免疫原性研究[D]. 錢榮華.浙江大學(xué) 2007
碩士論文
[1]溶藻弧菌攝鐵系統(tǒng)相關(guān)基因的克隆、表達及功能分析[D]. 薛麗麗.廣東海洋大學(xué) 2014
[2]6種水產(chǎn)養(yǎng)殖魚類常見弧菌抗原芯片檢測技術(shù)的建立[D]. 王欣欣.中國海洋大學(xué) 2012
[3]溶藻弧菌毒力相關(guān)基因的檢測與保藏方法的研究[D]. 韓佳麗.廣東海洋大學(xué) 2011
[4]細菌生物膜的形成和研究注射用雙黃連對細菌生物膜的影響[D]. 王坤.長春中醫(yī)藥大學(xué) 2009
[5]致病性溶藻弧菌對大黃魚粘液的粘附研究[D]. 陳強.中國海洋大學(xué) 2006
本文編號：2899421
【文章來源】：集美大學(xué)福建省
【文章頁數(shù)】：106 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
Vvrr1的結(jié)構(gòu)與序列
集美大學(xué)碩士學(xué)位論文新型非編碼RNAVvrr1參與溶藻弧菌毒力調(diào)控的機制研究34離子及低pH脅迫的菌株中，Vvrr1的表達水平顯著增加，該結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果相一致（圖3-2）。圖3-2Vvrr1在脅迫條件下的表達水平注：由溴化乙錠染色的核糖體(r)RNA帶作為負(fù)載對照（上排泳道）。3.1.3Vvrr1敲除菌株的構(gòu)建以及粘附能力的檢驗根據(jù)轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果可知，Vvrr1表達水平的升高伴隨著菌株粘附能力的減弱，因此我們認(rèn)為在脅迫條件下，Vvrr1可能介導(dǎo)溶藻弧菌的粘附能力調(diào)控。為了證實該猜想，我們構(gòu)建了Vvrr1敲除菌株并進行PCR驗證（圖3-3.a）。同時我們在同等脅迫條件下，對溶藻弧菌野生菌株和Vvrr1敲除菌株進行粘附能力的檢測，發(fā)現(xiàn)與野生菌株相比，敲除菌株的粘附能力顯著增加（圖3-3.b）。以上結(jié)果顯示Vvrr1無論是高表達還是敲除，都會對溶藻弧菌的粘附能力產(chǎn)生一定影響，這說明Vvrr1在調(diào)控溶藻弧菌的粘附機制中扮演著重要角色。圖3-3Vvrr1表達水平的驗證及粘附能力的檢測注：（a）Vvrr1敲除菌株的構(gòu)建與驗證，其中WT及△Vvrr1都使用Vvrr1敲除的上下游引物進行擴增；（b）對WT及V△vrr1菌株粘附能力的比較（**P<0.01）。
集美大學(xué)碩士學(xué)位論文新型非編碼RNAVvrr1參與溶藻弧菌毒力調(diào)控的機制研究34離子及低pH脅迫的菌株中，Vvrr1的表達水平顯著增加，該結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果相一致（圖3-2）。圖3-2Vvrr1在脅迫條件下的表達水平注：由溴化乙錠染色的核糖體(r)RNA帶作為負(fù)載對照（上排泳道）。3.1.3Vvrr1敲除菌株的構(gòu)建以及粘附能力的檢驗根據(jù)轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果可知，Vvrr1表達水平的升高伴隨著菌株粘附能力的減弱，因此我們認(rèn)為在脅迫條件下，Vvrr1可能介導(dǎo)溶藻弧菌的粘附能力調(diào)控。為了證實該猜想，我們構(gòu)建了Vvrr1敲除菌株并進行PCR驗證（圖3-3.a）。同時我們在同等脅迫條件下，對溶藻弧菌野生菌株和Vvrr1敲除菌株進行粘附能力的檢測，發(fā)現(xiàn)與野生菌株相比，敲除菌株的粘附能力顯著增加（圖3-3.b）。以上結(jié)果顯示Vvrr1無論是高表達還是敲除，都會對溶藻弧菌的粘附能力產(chǎn)生一定影響，這說明Vvrr1在調(diào)控溶藻弧菌的粘附機制中扮演著重要角色。圖3-3Vvrr1表達水平的驗證及粘附能力的檢測注：（a）Vvrr1敲除菌株的構(gòu)建與驗證，其中WT及△Vvrr1都使用Vvrr1敲除的上下游引物進行擴增；（b）對WT及V△vrr1菌株粘附能力的比較（**P<0.01）。
【參考文獻】：
期刊論文
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[2]海水養(yǎng)殖中水產(chǎn)動物主要致病弧菌研究進展[J]. 王鳳青,孫玉增,任利華,姜向陽,姜芳,崔艷梅,劉麗娟. 中國漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn). 2018(02)
[3]黃姑魚源溶藻弧菌的分離鑒定[J]. 鄭晨暉. 北京農(nóng)業(yè). 2014(27)
[4]溶藻弧菌對水產(chǎn)動物致病性及其防治的研究進展[J]. 苑淑賓,朱愛意. 浙江海洋學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版). 2012(03)
[5]不同毒力溶藻弧菌脂多糖的多態(tài)性研究[J]. 宣雄智,謝珍玉,周永燦,王世鋒,吳學(xué)貴. 漁業(yè)科學(xué)進展. 2011(01)
[6]致病溶藻弧菌脂多糖對點帶石斑魚毒性和免疫原性的影響[J]. 徐先棟,謝珍玉,王世鋒,宣雄智,周永燦. 海洋科學(xué). 2010(03)
[7]副溶血弧菌毒力因子及其致病機理研究進展[J]. 楊振泉,焦新安. 中國人獸共患病學(xué)報. 2008(11)
[8]病原性溶藻弧菌對大黃魚鰓黏液黏附作用研究[J]. 鄢慶枇,陳強,馬甡,莊峙廈,王小如. 海洋學(xué)報(中文版). 2007(06)
[9]霍亂弧菌TCP研究最新進展綜述[J]. 胡守奎. 安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2007(04)
[10]魚源溶藻弧菌胞外產(chǎn)物的特性研究[J]. 左鳳琴,簡紀(jì)常,吳灶和. 水生生物學(xué)報. 2006(05)
博士論文
[1]溶藻弧菌主要毒力相關(guān)基因的克隆、表達及其免疫原性研究[D]. 錢榮華.浙江大學(xué) 2007
碩士論文
[1]溶藻弧菌攝鐵系統(tǒng)相關(guān)基因的克隆、表達及功能分析[D]. 薛麗麗.廣東海洋大學(xué) 2014
[2]6種水產(chǎn)養(yǎng)殖魚類常見弧菌抗原芯片檢測技術(shù)的建立[D]. 王欣欣.中國海洋大學(xué) 2012
[3]溶藻弧菌毒力相關(guān)基因的檢測與保藏方法的研究[D]. 韓佳麗.廣東海洋大學(xué) 2011
[4]細菌生物膜的形成和研究注射用雙黃連對細菌生物膜的影響[D]. 王坤.長春中醫(yī)藥大學(xué) 2009
[5]致病性溶藻弧菌對大黃魚粘液的粘附研究[D]. 陳強.中國海洋大學(xué) 2006
本文編號：2899421
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