發(fā)布時(shí)間：2020-12-05 21:16

　　乙酰輔酶A羧化酶α（acetyl-CoA carboxylases alpha,ACACA）是脂肪酸從頭合成的關(guān)鍵限速酶,在脂肪酸生物合成中起重要調(diào)控作用。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和重亞硫酸鹽測(cè)序方法,檢測(cè)0.5和4.5歲天祝白牦牛（Bos grunniens）ACACA基因組織表達(dá)及PI啟動(dòng)子區(qū)CpG島在皮下脂肪組織中的甲基化水平,研究該基因組織表達(dá)規(guī)律及皮下脂肪組織中的表觀遺傳機(jī)制;采用PCR-SSCP方法檢測(cè)甘南牦牛、天祝白牦牛、青海牦牛、西藏牦牛和野血牦牛ACACA基因PI、PIA啟動(dòng)子區(qū)和intron5-intron6區(qū)突變位點(diǎn),分析基因突變對(duì)甘南牦牛乳、肉品質(zhì)性狀和乳中脂肪酸含量的影響。結(jié)果表明:1.ACACA基因在天祝白牦牛13個(gè)組織中表達(dá)量存在組織和年齡差異,0.5歲牦牛肝臟、腦、背最長(zhǎng)肌和腎臟中高度表達(dá)且肝臟中表達(dá)量顯著高于其他組織（P<0.05）,4.5歲牦牛皮下脂肪和肝臟中表達(dá)量極顯著高于其他組織（P<0.01）;0.5歲牦牛腎臟中表達(dá)量極顯著高于4.5歲牦牛（P<0.01）,而在皮下脂肪、肝臟和睪丸中表達(dá)量顯著或極顯著低于4.5歲牦牛（P&... 

【文章來(lái)源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

普通牛ACACA基因結(jié)構(gòu)圖

牦牛ACACA基因遺傳特征及其對(duì)乳、肉品質(zhì)的影響9圖1-2普通牛ACACA基因PI啟動(dòng)子區(qū)CpG島分布圖Figure1-2DistributionofCpGislandinPIpromoterregionofACACAgeneincattle3.2ACACA基因功能乙酰輔酶A羧化酶(acetyl-coenzymeAcarboxylase,ACC)屬于分子間羧化轉(zhuǎn)移家族成員，包含α和β兩種同工酶，將乙酰輔酶A(acetyl-CoA)羧化為丙二酸單酰輔酶A(malonyl-CoA)，在脂肪酸代謝過(guò)程中起著重要作用[92]。乙酰輔酶A羧化酶α由乙酰輔酶A羧化酶α基因(acetyl-CoAcarboxylasealpha，ACACA)編碼，參與脂肪酸合成的第一步反應(yīng)，催化乙酰輔酶A生成丙二酸單酰輔酶A，后者是長(zhǎng)鏈脂肪酸碳鏈延長(zhǎng)的C2供體，參與三酰甘油和磷脂的合成，從而生成長(zhǎng)鏈脂肪酸并形成細(xì)胞膜[93]，ACACA是長(zhǎng)鏈脂肪酸生物合成過(guò)程中的重要限速酶[94]。ACACA基因缺失小鼠在胚胎期發(fā)生死亡，表明ACACA對(duì)胚胎的早期發(fā)育至關(guān)重要[82]。ACACA基因雖然在動(dòng)物體細(xì)胞中均有表達(dá)，但脂肪酸生成活躍組織(如肝臟、脂肪和乳腺組織)中高表達(dá)[95]。乙酰輔酶A羧化為丙二酸單酰輔酶A有兩步反應(yīng):第一步：ATP+HCO3ˉ+BCCPBCCP.CO2ˉ+ADP+Pi第二步：BCCP.CO2ˉ+acetyl-CoABCCP+malonyl-CoA其中，BCCP為生物素羧化酶，BC為生物素羧化酶，CT為羧基轉(zhuǎn)移酶。3.3ACACA基因突變與乳、肉品質(zhì)及乳脂肪酸組成相關(guān)性研究ACACA基因突變影響畜禽乳、肉品質(zhì)性狀及乳中脂肪酸組成。嶗山奶山羊ACACA基因PIII啟動(dòng)子區(qū)突變影響乳蛋白率、乳糖率、乳密度、300d產(chǎn)奶量[96]。荷斯坦奶牛和綿羊ACACA基因突變影響乳中脂肪酸組成[97,98]。韓牛ACACA基因g.2274G>A突變與眼肌面積顯著相關(guān)[99]。西班牙Churr綿羊ACACA基因15個(gè)SNPs顯著影響乳中脂肪酸的組成，4個(gè)SNPs顯著影響乳蛋白率和乳脂率[100]。豬ACACA基因S

牦牛ACACA基因遺傳特征及其對(duì)乳、肉品質(zhì)的影響192.1.1牦牛ACACA基因核心啟動(dòng)子區(qū)預(yù)測(cè)牦牛ACACA基因g.-1000～+1000區(qū)域預(yù)測(cè)結(jié)果表明有6處可能的核心區(qū)(表3-1)，其中核心區(qū)1和2、2和3、4和5分別有重疊，第3和第4核心區(qū)的評(píng)分最高，說(shuō)明這兩個(gè)重疊區(qū)域最有可能成為該基因的核心啟動(dòng)子區(qū)。表3-1牦牛ACACA基因核心啟動(dòng)子區(qū)預(yù)測(cè)Table3-1PredictionofcorepromoterregionofyakACACAgene核心區(qū)Coreregion起始位點(diǎn)Startsite終止位點(diǎn)Endsite分值Score啟動(dòng)子序列（5"→3"）PromoterSequence1-625-5750.83CGAGGCGGGGACCCAGCGGACCGTTCAGGGGGCGGGGCGCGGCCCCAGG2-596-5460.87GGGCGGGGCGCGGCCCCAGGGCTCAGTCCCGGCCCGCGGCGCCCTCCCCC3-574-5240.93GCCCGCGGCGCCCTCCCCCACCGCGCGGCGTGGCCCGTGCCTCACGCCCG4-338-2880.90TGCGGGCGGCGCAGGCGCGAGCGGGCCGCGCGCCCGCCGCCTCCGCCCAG5-314-2640.84GCCGCGCGCCCGCCGCCTCCGCCCAGTCCCCGCCCCGGCCGTCGAAGCCC6-240-1900.84TGGCTCGGCCCCCGTCCGGGGCTCTCGCCGCGCGCCCGCCGCCGGCCTCT2.1.2牦牛ACACA基因CpG島區(qū)預(yù)測(cè)牦牛ACACA基因g.-1000bp～+1000bp區(qū)域CpG島預(yù)測(cè)結(jié)果表明，該區(qū)域存在2個(gè)CpG島(圖3-4)，第1個(gè)CpG島位于g.-795～-193區(qū)域，全長(zhǎng)603bp；第2個(gè)CpG島位于g.-183～+117區(qū)域，全長(zhǎng)300bp。且第3和第4核心區(qū)重疊區(qū)正好位于第1個(gè)CpG島區(qū)內(nèi)。因此設(shè)計(jì)兩對(duì)特異性引物BSP-1和BSP-2擴(kuò)增g.-795～-193區(qū)域。圖3-4牦牛ACACA基因5"側(cè)翼序列CpG島預(yù)測(cè)Figure3-4PredictionofCpGislandin5"flankingsequenceofyakACACAgene2.2牦牛ACACA基因PCR產(chǎn)物瓊脂糖電泳檢測(cè)牦牛ACACA基因啟動(dòng)子區(qū)引物BSP-1和BSP-2的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3-5。目的條帶清晰，可用于克隆檢測(cè)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]申扎牦牛產(chǎn)肉性能和肉營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)分析研究[J]. 張成福,姜輝,張強(qiáng),朱勇,陳曉英,曹涵文,孫光明,次旦央吉,洛桑頓珠,達(dá)娃央拉,平措占堆,姬秋梅,信金偉.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020(06)
[2]共軛亞油酸的生物學(xué)功能及其在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 楊媚,馬杰,楊泰,閆昭明,陳清華.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2019(11)
[3]麥洼牦牛PRL基因多態(tài)與產(chǎn)奶性狀的關(guān)聯(lián)分析[J]. 李鑄,何世明,吳錦波,艾鷖,蹇尚林,劉建,雍軍.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(18)
[4]牦牛ACTA1基因啟動(dòng)子區(qū)克隆、DNA甲基化與組織表達(dá)相關(guān)性分析[J]. 楊勤,柴志欣,王吉坤,王會(huì),鐘金城.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2020(01)
[5]牦牛ACSL1基因啟動(dòng)子多態(tài)性及其與乳品質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)分析[J]. 趙志東,田宏山,蔣艷艷,石斌剛,劉秀,李旭鵬,王登哲,陳金林,胡江.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2019(09)
[6]牦牛FABP3基因組織表達(dá)、多態(tài)性及其對(duì)胴體和肉質(zhì)性狀的影響[J]. 胡江,曹健,張麗,趙志東,王繼卿,劉秀,李少斌,陳金林,羅玉柱.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2019(06)
[7]牦牛LPL基因組織表達(dá)及其突變與乳質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)分析[J]. 蔣艷艷,石斌剛,陳彥麗,張海龍,丁考仁青,劉秀,王繼卿,趙志東,胡江.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2019(12)
[8]蛋雞脂肪代謝相關(guān)基因ACACA和FASN表達(dá)及調(diào)控特性[J]. 田衛(wèi)華,楊麗玉,李紅,韓瑞麗,王彥彬,田亞?wèn)|,康相濤,劉小軍.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2019(02)
[9]DNA甲基化在牛遺傳育種中的應(yīng)用[J]. 楊勤,柴志欣,王會(huì),王吉坤,鐘金城.  青海畜牧獸醫(yī)雜志. 2018(06)
[10]牦牛DGAT1基因多態(tài)性及其與乳質(zhì)性狀關(guān)聯(lián)分析[J]. 高小莉,胡江,郭淑珍,石斌剛,謝建鵬,羅玉柱,王繼卿,牟永娟.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(16)

博士論文
[1]基于轉(zhuǎn)錄組和全基因組甲基化聯(lián)合分析的牛肉質(zhì)性狀候選基因的鑒定與功能驗(yàn)證[D]. 房希碧.吉林大學(xué) 2017
[2]肉牛脂代謝相關(guān)基因遺傳多態(tài)性及其與延邊牛肉質(zhì)性狀相關(guān)分析[D]. 馮健.延邊大學(xué) 2017

碩士論文
[1]雷州黑鴨卵巢組織發(fā)育及LRRTM3基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化探究[D]. 張少偉.廣東海洋大學(xué) 2019
[2]牦牛STAT5A和THRSP基因組織表達(dá)及其突變對(duì)乳、肉品質(zhì)的影響[D]. 陳彥麗.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[3]綿羊乳腺組織RNA-Seq及STAT5a基因遺傳特征分析[D]. 郝志云.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[4]牛EL0VL5基因核心啟動(dòng)子的確定及其啟動(dòng)子多態(tài)性影響乳質(zhì)性狀的分子機(jī)制[D]. 郭鵬程.吉林大學(xué) 2017
[5]中國(guó)荷斯坦牛CSN3、ACACA基因多態(tài)性及其與泌乳性狀的關(guān)聯(lián)性分析[D]. 胡言.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[6]牦牛CAPN1基因多態(tài)性及與胴體和肉質(zhì)性狀關(guān)聯(lián)研究[D]. 陳杰.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[7]秦川牛LCORL基因的多態(tài)性、mRNA表達(dá)及啟動(dòng)子區(qū)甲基化研究[D]. 韓玉嬌.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[8]奶山羊PITX1、PITX2基因的遺傳變異、mRNA表達(dá)及DNA甲基化修飾對(duì)泌乳性能的影響[D]. 趙海諭.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[9]荷斯坦牛K-酪蛋白不同外顯子基因多態(tài)性與生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)性研究[D]. 鄖亞寧.寧夏大學(xué) 2013
[10]牦牛CAPN3基因克隆、多態(tài)性及胴體和肉質(zhì)性狀關(guān)聯(lián)分析[D]. 潘紅梅.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號(hào)：2900106