發(fā)布時間：2020-12-09 03:14

　　雙峰駝作為一種古老而獨特的動物,有著不可估量的研究價值。雙峰駝屬于典型的精清誘導排卵型動物,有明顯的季節(jié)性發(fā)情特征。在繁殖季節(jié)與非繁殖季節(jié)不同的生活習性使的雙峰駝生殖生理存在一定差異。基于本研究團隊前期利用蛋白組學技術,發(fā)現(xiàn)肌肉生長發(fā)育相關差異原肌球蛋白2（TPM2）與原肌球蛋白3（TPM3）。原肌球蛋白2和原肌球蛋白3結構功能既有相似性也有特異性,編碼平滑肌、骨骼肌等肌肉異構體的同時,也編碼肌肉成纖維細胞異構體,對細胞產生不同的影響。為了進一步揭示TPM2基因和TPM3基因在不同繁殖期雙峰駝肌肉中的作用,本研究以繁殖季節(jié)雙峰母駝為研究對象,通過RT-PCR技術克隆雙峰駝TPM2和TPM3基因并進行序列,分析TPM2基因和TPM3基因基本功能;應用免疫熒光技術、免疫組織化學法、qRT-PCR、Western blot法驗證TPM2基因和TPM3基因在繁殖季節(jié)雙峰母駝肌肉具體表達情況,探究TPM2基因和TPM3基因在繁殖與非繁殖季節(jié)雙峰母駝肌肉組織中的表達模式;以雙峰駝肌纖維細胞為基礎,通過轉染siRNA的方法,探索干擾序列對肌纖維細胞凋亡的影響。結果發(fā)現(xiàn):1.克隆得到雙峰駝CDS全長為... 

【文章來源】：甘肅農業(yè)大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Bcl-2家族成員間異型和同型二聚體結合調控細胞凋亡的原理圖

雙峰駝TPM2與TPM3基因表達模式及其功能探究13圖2-1雙峰駝TPM2和TPM3基因PCR擴增產物瓊脂糖凝膠電泳圖Fig2-1BactriancamelTPM2andTPM3genePCRamplificationproductagarosegelelectrophoresis2.2雙峰駝TPM2、TPM3基因核苷酸及氨基酸序列分析根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中的ORFFinder軟件分析雙峰駝TPM2基因序列，開放閱讀框根據(jù)序列比對分析雙峰駝TPM2基因的序列，起始密碼子ATG位在109bp處，終止密碼子TAG位于963bp處。應用ProtParam軟件預測TPM2理化性質，分子式為C1400H2325N397O498S115，分子量為33.03988KD，理論等電點為（pI）4.65。而TPM3基因序列比對結果顯示起始密碼子ATG位在146bp處，終止密碼子TAG位于521bp處，預測TPM3理化性質結果顯示，分子式為C927H1588N294O311S5，分子量為21.98889KD，理論等電點為（pI）5.40，兩蛋白都屬于酸性蛋白。TMHMM2.0Server程序進行跨膜區(qū)預測，表明TPM2、TPM3蛋白都不存在跨膜區(qū)域。亞細胞定位分析雙峰駝TPM2、TPM3蛋白定位于細胞核，在線粒體、細胞質、細胞骨架、細胞膜以及胞質中均有分布，主要在細胞核中大量分布。圖2-2雙峰駝TPM2二級結構預測Fig2-2PredictionofsecondarystructureofBactriancamelTPM2

雙峰駝TPM2與TPM3基因表達模式及其功能探究13圖2-1雙峰駝TPM2和TPM3基因PCR擴增產物瓊脂糖凝膠電泳圖Fig2-1BactriancamelTPM2andTPM3genePCRamplificationproductagarosegelelectrophoresis2.2雙峰駝TPM2、TPM3基因核苷酸及氨基酸序列分析根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中的ORFFinder軟件分析雙峰駝TPM2基因序列，開放閱讀框根據(jù)序列比對分析雙峰駝TPM2基因的序列，起始密碼子ATG位在109bp處，終止密碼子TAG位于963bp處。應用ProtParam軟件預測TPM2理化性質，分子式為C1400H2325N397O498S115，分子量為33.03988KD，理論等電點為（pI）4.65。而TPM3基因序列比對結果顯示起始密碼子ATG位在146bp處，終止密碼子TAG位于521bp處，預測TPM3理化性質結果顯示，分子式為C927H1588N294O311S5，分子量為21.98889KD，理論等電點為（pI）5.40，兩蛋白都屬于酸性蛋白。TMHMM2.0Server程序進行跨膜區(qū)預測，表明TPM2、TPM3蛋白都不存在跨膜區(qū)域。亞細胞定位分析雙峰駝TPM2、TPM3蛋白定位于細胞核，在線粒體、細胞質、細胞骨架、細胞膜以及胞質中均有分布，主要在細胞核中大量分布。圖2-2雙峰駝TPM2二級結構預測Fig2-2PredictionofsecondarystructureofBactriancamelTPM2

【參考文獻】：
期刊論文
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[4]GLP-1對骨骼肌肌球蛋白重鏈表達的影響及機制研究[D]. 王麗娜.南京農業(yè)大學 2009
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碩士論文
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[4]Bcl-2抑制劑的合成與抗腫瘤細胞活性篩選及抗結核菌核苷類化合物的合成[D]. 李靜.蘇州大學 2010
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本文編號：2906159