發(fā)布時間：2020-12-09 03:14

　　雙峰駝作為一種古老而獨特的動物,有著不可估量的研究價值。雙峰駝屬于典型的精清誘導(dǎo)排卵型動物,有明顯的季節(jié)性發(fā)情特征。在繁殖季節(jié)與非繁殖季節(jié)不同的生活習(xí)性使的雙峰駝生殖生理存在一定差異。基于本研究團(tuán)隊前期利用蛋白組學(xué)技術(shù),發(fā)現(xiàn)肌肉生長發(fā)育相關(guān)差異原肌球蛋白2（TPM2）與原肌球蛋白3（TPM3）。原肌球蛋白2和原肌球蛋白3結(jié)構(gòu)功能既有相似性也有特異性,編碼平滑肌、骨骼肌等肌肉異構(gòu)體的同時,也編碼肌肉成纖維細(xì)胞異構(gòu)體,對細(xì)胞產(chǎn)生不同的影響。為了進(jìn)一步揭示TPM2基因和TPM3基因在不同繁殖期雙峰駝肌肉中的作用,本研究以繁殖季節(jié)雙峰母駝為研究對象,通過RT-PCR技術(shù)克隆雙峰駝TPM2和TPM3基因并進(jìn)行序列,分析TPM2基因和TPM3基因基本功能;應(yīng)用免疫熒光技術(shù)、免疫組織化學(xué)法、qRT-PCR、Western blot法驗證TPM2基因和TPM3基因在繁殖季節(jié)雙峰母駝肌肉具體表達(dá)情況,探究TPM2基因和TPM3基因在繁殖與非繁殖季節(jié)雙峰母駝肌肉組織中的表達(dá)模式;以雙峰駝肌纖維細(xì)胞為基礎(chǔ),通過轉(zhuǎn)染siRNA的方法,探索干擾序列對肌纖維細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):1.克隆得到雙峰駝CDS全長為... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Bcl-2家族成員間異型和同型二聚體結(jié)合調(diào)控細(xì)胞凋亡的原理圖

雙峰駝TPM2與TPM3基因表達(dá)模式及其功能探究13圖2-1雙峰駝TPM2和TPM3基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖Fig2-1BactriancamelTPM2andTPM3genePCRamplificationproductagarosegelelectrophoresis2.2雙峰駝TPM2、TPM3基因核苷酸及氨基酸序列分析根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中的ORFFinder軟件分析雙峰駝TPM2基因序列，開放閱讀框根據(jù)序列比對分析雙峰駝TPM2基因的序列，起始密碼子ATG位在109bp處，終止密碼子TAG位于963bp處。應(yīng)用ProtParam軟件預(yù)測TPM2理化性質(zhì)，分子式為C1400H2325N397O498S115，分子量為33.03988KD，理論等電點為（pI）4.65。而TPM3基因序列比對結(jié)果顯示起始密碼子ATG位在146bp處，終止密碼子TAG位于521bp處，預(yù)測TPM3理化性質(zhì)結(jié)果顯示，分子式為C927H1588N294O311S5，分子量為21.98889KD，理論等電點為（pI）5.40，兩蛋白都屬于酸性蛋白。TMHMM2.0Server程序進(jìn)行跨膜區(qū)預(yù)測，表明TPM2、TPM3蛋白都不存在跨膜區(qū)域。亞細(xì)胞定位分析雙峰駝TPM2、TPM3蛋白定位于細(xì)胞核，在線粒體、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞骨架、細(xì)胞膜以及胞質(zhì)中均有分布，主要在細(xì)胞核中大量分布。圖2-2雙峰駝TPM2二級結(jié)構(gòu)預(yù)測Fig2-2PredictionofsecondarystructureofBactriancamelTPM2

雙峰駝TPM2與TPM3基因表達(dá)模式及其功能探究13圖2-1雙峰駝TPM2和TPM3基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖Fig2-1BactriancamelTPM2andTPM3genePCRamplificationproductagarosegelelectrophoresis2.2雙峰駝TPM2、TPM3基因核苷酸及氨基酸序列分析根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中的ORFFinder軟件分析雙峰駝TPM2基因序列，開放閱讀框根據(jù)序列比對分析雙峰駝TPM2基因的序列，起始密碼子ATG位在109bp處，終止密碼子TAG位于963bp處。應(yīng)用ProtParam軟件預(yù)測TPM2理化性質(zhì)，分子式為C1400H2325N397O498S115，分子量為33.03988KD，理論等電點為（pI）4.65。而TPM3基因序列比對結(jié)果顯示起始密碼子ATG位在146bp處，終止密碼子TAG位于521bp處，預(yù)測TPM3理化性質(zhì)結(jié)果顯示，分子式為C927H1588N294O311S5，分子量為21.98889KD，理論等電點為（pI）5.40，兩蛋白都屬于酸性蛋白。TMHMM2.0Server程序進(jìn)行跨膜區(qū)預(yù)測，表明TPM2、TPM3蛋白都不存在跨膜區(qū)域。亞細(xì)胞定位分析雙峰駝TPM2、TPM3蛋白定位于細(xì)胞核，在線粒體、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞骨架、細(xì)胞膜以及胞質(zhì)中均有分布，主要在細(xì)胞核中大量分布。圖2-2雙峰駝TPM2二級結(jié)構(gòu)預(yù)測Fig2-2PredictionofsecondarystructureofBactriancamelTPM2

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：2906159