發(fā)布時(shí)間：2020-12-14 10:17

　　組織培養(yǎng)是玉米遺傳轉(zhuǎn)化的基礎(chǔ)。玉米幼胚因其容易誘導(dǎo)胚性愈傷組織、易于芽再生的特點(diǎn)成為玉米組織培養(yǎng)中主要使用的外植體。然而玉米幼胚的取材嚴(yán)重受到發(fā)育時(shí)期及生長(zhǎng)季節(jié)的限制。選取玉米成熟胚作外植體操作更為簡(jiǎn)單、取材時(shí)期不受限制,可以克服幼胚在獲取時(shí)間、氣候和環(huán)境上的局限,因而更具應(yīng)用前景。但是玉米成熟胚的芽再生困難,主要受到基因型、培養(yǎng)基類型、外植體的處理方式、植物激素等因素的影響。為了優(yōu)化玉米成熟胚芽再生的實(shí)驗(yàn)體系,本研究選取6份玉米自交系材料（CML493、CIMBL8、Cy72、JY01、Ye478和K12）,取其成熟胚為外植體,通過研究?jī)煞N不同類型培養(yǎng)基和三種不同切胚方式對(duì)初級(jí)愈傷組織誘導(dǎo)的影響,不同濃度植物激素在胚性愈傷組織誘導(dǎo)和再生過程的影響以及三種不同濃度甘露醇對(duì)玉米成熟胚培養(yǎng)中褐化的影響,優(yōu)化并建立了高效的玉米成熟胚再生體系。主要研究成果如下。以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基誘導(dǎo)形成愈傷組織的效率高于N6培養(yǎng)基;以胚軸為外植體更容易誘導(dǎo)形成愈傷組織,愈傷組織誘導(dǎo)率可以達(dá)到100%;在繼代培養(yǎng)基中添加1.5mg L^-12,4-D和6mg L^-1

【文章來源】： 殷榕 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同類型愈傷組織的組織細(xì)胞學(xué)觀察(魯旭東等,2004)

為了比較外植體在MS培養(yǎng)基和N6培養(yǎng)基上誘導(dǎo)初級(jí)愈傷組織的差異,我們將外植體分別接種到這兩種培養(yǎng)基上,觀察發(fā)現(xiàn)外植體在這兩種不同培養(yǎng)基上誘導(dǎo)初級(jí)愈傷組織的數(shù)量和狀態(tài)不一樣(如圖3-1-1所示),圖片為材料JY01的生長(zhǎng)情況,其余材料均在附錄中(圖4-1)展示。誘導(dǎo)培養(yǎng)3天時(shí),外植體在MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基上出現(xiàn)萌動(dòng)跡象(如圖3-1-1B所示),在胚軸與子葉連接處產(chǎn)生胚芽鞘和胚根。而外植體在N6誘導(dǎo)培養(yǎng)基上萌動(dòng)遲緩(如圖3-1-1E所示),在胚軸與子葉連接處只產(chǎn)生少許的胚芽鞘和胚根。誘導(dǎo)培養(yǎng)15天時(shí),外植體在MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基上產(chǎn)生大量乳白色的、較好的初級(jí)愈傷組織,少部分出現(xiàn)褐化現(xiàn)象(如圖3-1-1C所示),外植體在N6誘導(dǎo)培養(yǎng)基上產(chǎn)生少量的、濕潤(rùn)的初級(jí)愈傷組織(如圖3-1-1F所示)。對(duì)誘導(dǎo)培養(yǎng)15天的初級(jí)愈傷組織誘導(dǎo)率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)(如圖3-1-2和表3-1-1所示)發(fā)現(xiàn):外植體在MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的初級(jí)愈傷組織誘導(dǎo)率都高于在N6誘導(dǎo)培養(yǎng)基,在MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基上初級(jí)愈傷組織誘導(dǎo)率最高可達(dá)到88.76%,在N6誘導(dǎo)培養(yǎng)基上最高達(dá)到82.22%。方差分析(如表3-1-2所示)可知:外植體在不同培養(yǎng)基間的初級(jí)愈傷組織誘導(dǎo)率存在差異,但差異不顯著。通過比較外植體在兩種不同類型培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織的效率,可知當(dāng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS時(shí),愈傷組織誘導(dǎo)率相對(duì)較高,即MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基比N6誘導(dǎo)培養(yǎng)基更容易誘導(dǎo)出初級(jí)愈傷組織,后期研究均選用MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基作為誘導(dǎo)形成初級(jí)愈傷組織的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

對(duì)誘導(dǎo)培養(yǎng)15天的初級(jí)愈傷組織誘導(dǎo)率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)(如圖3-1-2和表3-1-1所示)發(fā)現(xiàn):外植體在MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的初級(jí)愈傷組織誘導(dǎo)率都高于在N6誘導(dǎo)培養(yǎng)基,在MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基上初級(jí)愈傷組織誘導(dǎo)率最高可達(dá)到88.76%,在N6誘導(dǎo)培養(yǎng)基上最高達(dá)到82.22%。方差分析(如表3-1-2所示)可知:外植體在不同培養(yǎng)基間的初級(jí)愈傷組織誘導(dǎo)率存在差異,但差異不顯著。通過比較外植體在兩種不同類型培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織的效率,可知當(dāng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS時(shí),愈傷組織誘導(dǎo)率相對(duì)較高,即MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基比N6誘導(dǎo)培養(yǎng)基更容易誘導(dǎo)出初級(jí)愈傷組織,后期研究均選用MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基作為誘導(dǎo)形成初級(jí)愈傷組織的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。3.2 切胚方式對(duì)玉米成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)的影響

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
[1]玉米成熟胚誘導(dǎo)愈傷組織體系的建立[D]. 劉萍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
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