海南橡膠樹棒孢霉落葉病菌毒素基因鑒定及基因組學分析
發(fā)布時間：2020-12-16 17:28
由多主棒孢霉（Corynespora cassiicola）引起的橡膠樹棒孢霉落葉病是橡膠樹上一種重要的病害,在國際上被公認為為害橡膠樹的毀滅性病害。目前關(guān)于該病害的研究主要集中在病原菌生物學、病害流行學、防治技術(shù)和毒素蛋白致病機理等方面,并根據(jù)該病原菌毒素蛋白可以劃分7種不同類型菌株。據(jù)報道國內(nèi)橡膠樹棒孢霉落葉病菌主要存在Cas2和Cas5兩種類型的菌株,但是近幾年發(fā)現(xiàn)海南橡膠樹棒孢霉落葉病在苗圃和幼齡樹上的為害有加重的趨勢,可能有新的毒素蛋白類型的菌株出現(xiàn)。因此,本研究于2017年512月在海南省五指山市、儋州市、白沙黎族自治縣、樂東黎族自治縣和保亭黎族苗族自治縣主要橡膠產(chǎn)區(qū)進行了橡膠樹棒孢霉落葉病樣品采集、分離與鑒定,對毒素類型鑒定與表達分析,并對主要種群進行了基因組學分析,以期明確海南橡膠樹棒孢霉落葉病菌的毒素蛋白類型及優(yōu)勢種群的基因組信息,為該病害的防控和后續(xù)的功能基因研究提供依據(jù)和信息。其取得具體結(jié)果如下:1.通過分離鑒定共獲得35株橡膠樹棒孢霉落葉病菌菌株,菌株菌落黑灰色,邊緣灰白色,菌絲生長速度緩慢,產(chǎn)孢數(shù)量較少,個別菌株背面有紅褐色同心輪紋。通過...
【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學黑龍江省
【文章頁數(shù)】：68 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
橡膠樹棒孢霉落葉病病葉采集地點分布圖
結(jié)果與分析213結(jié)果與分析3.1橡膠樹棒孢霉落葉病菌鑒定3.1.1橡膠樹棒孢霉落葉病菌的分離與純化參照《真菌鑒定手冊》[75]橡膠樹棒孢霉落葉病癥狀（圖3-1）在海南省儋州市（DZ）、白沙黎族自治縣（BS）、五指山市（WZS）、保亭黎族苗族自治縣（BT）、樂東黎族自治縣（LD）橡膠林采集了疑似橡膠樹棒孢霉落葉病病葉372片。圖3-1三種不同病斑類型的橡膠病葉Fig.3-1Threekindsofrubberdiseasedleaves注：A魚骨狀（鐵軌型）病斑；B圓斑型病斑；C葉緣回枯型病斑Note:A:Railwaytracksymptoms;B:Circular/irregularspots;C:Shrivelingofleaftip對采集的所有病葉進行病原菌分離，經(jīng)過分離與純化獲得63株病原菌。根據(jù)63株病原菌采集的地點及葉片的采集順序進行編號，分別為DZ-11、DZ-12、DZ-13、DZ-14、DZ-15、DZ-16、DZ-17、DZ-18、DZ-19、DZ-20、DZ-21、DZ-22、DZ-23、DZ-24、DZ-25、DZ-26、DZ-27、DZ-28、DZ-29、DZ-30、DZ-31、DZ-32、DZ-33、DZ-34、DZ-123、DZ-127、DZ-129、DZ-131、DZ-134、DZ-135、DZ-137、DZ-138、BS-35、BS-36、BS-37、BS-38、BS-39、A:魚骨狀B:圓斑形C:葉緣回枯
海南橡膠樹棒孢霉落葉病菌毒素基因鑒定及基因組學分析22BS-40、BS-41、BS-42、BS-43、BS-44、BS-45、WZS-64、WZS-65、WZS-67、WZS-68、WZS-69、WZS-71、WZS-72、BT-104、BT-105、BT-106、BT-108、BT-110、BT-111、LD-112、LD-113、LD-114、LD-115、LD-116，LD-117和LD-119。3.1.2菌株形態(tài)鑒定63株病原菌中，有28株病原菌在分離第二天產(chǎn)生大量氣生菌絲，菌絲稀疏，無明顯基生菌絲，PDA培養(yǎng)第四天，氣生菌絲生長滿皿，培養(yǎng)基表面有明顯孢子堆形成，部分孢子堆呈紅色（表3-1）。對28株生長較快的病原菌的分生孢子進行孢子形態(tài)觀察，發(fā)現(xiàn)28株病原菌孢子呈長圓筒形，兩端鈍圓，無色，大小5~12μm×2~4μm，無隔膜或有一個隔膜（圖3-2），與《真菌鑒定手冊》[75]描述的膠孢炭疽菌的形態(tài)相同，初步鑒定這28株病原菌為膠孢炭疽菌。圖3-2膠孢炭疽菌菌落和分生孢子形態(tài)Fig.3-2ThecolonymorphologyandconidiamorphologyofcopyColletotrichumgloeosporioides注：A為生長4d膠孢炭疽菌的菌落形態(tài)；B為膠孢炭疽菌的分生孢子形態(tài)Note:A:ColonymorphologyofColletotrichumgloeosporioidesaftergrowfor4days;B:ConidiamorphologyofColletotrichumgloeosporioides對其余的35株病原菌進行形態(tài)鑒定，結(jié)果顯示35株病原菌第3d可以產(chǎn)生大量氣生菌絲，菌絲叢生，呈絨毛狀；隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，基生菌絲逐漸變成褐色或黑色，氣生菌絲呈灰色或白色絨毛狀，菌落邊緣呈灰色或白色菌圈，部分菌落產(chǎn)生紅褐色色素（表3-1）。AB
【參考文獻】：
期刊論文
[1]全基因組測序在結(jié)核病研究中的應(yīng)用進展[J]. 陳昕昶,張文宏. 中國防癆雜志. 2018 (02)
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[4]黃瓜棒孢葉斑病菌的毒力分化及AFLP分析[J]. 張艷菊,劉奇,劉東,秦智偉,周秀艷,劉大偉. 北方園藝. 2016(16)
[5]中國橡膠樹棒孢霉落葉病疫情調(diào)查及其發(fā)生規(guī)律初探[J]. 李博勛,劉先寶,蔡吉苗,黃貴修. 熱帶作物學報. 2015(11)
[6]我國天然橡膠產(chǎn)業(yè)政策演變特點及發(fā)展趨勢分析[J]. 許能銳,李隆偉,李均立. 中國熱帶農(nóng)業(yè). 2014(05)
[7]國內(nèi)橡膠樹主要種質(zhì)對棒孢霉落葉病的抗性評價[J]. 李博勛,劉先寶,林春花,時濤,黃貴修. 植物保護. 2014(05)
[8]土壤中黃瓜棒孢葉斑病病原菌實時熒光定量PCR檢測技術(shù)研究[J]. 高葦,李寶聚,王萬立,郝永娟,石延霞. 華北農(nóng)學報. 2014(02)
[9]黃瓜棒孢葉斑病菌PCR檢測方法的建立[J]. 陳璐,石延霞,謝學文,柴阿麗,李寶聚. 園藝學報. 2014(03)
[10]黃瓜棒孢葉斑病種子帶菌PCR分子檢測[J]. 王偉青,岳瑾,董杰. 中國植保導刊. 2013(08)
博士論文
[1]巴西橡膠樹棒孢霉落葉病病菌MAPK基因（CCK1）和毒素基因（ct）克隆與功能鑒定[D]. 劉曉妹.海南大學 2012
碩士論文
[1]我國蔬菜棒孢葉斑病病原菌多樣性研究[D]. 楊苗.中國農(nóng)業(yè)科學院 2013
[2]中國棒孢菌屬分類研究[D]. 王承海.山東農(nóng)業(yè)大學 2006
本文編號：2920509
【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學黑龍江省
【文章頁數(shù)】：68 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
橡膠樹棒孢霉落葉病病葉采集地點分布圖
結(jié)果與分析213結(jié)果與分析3.1橡膠樹棒孢霉落葉病菌鑒定3.1.1橡膠樹棒孢霉落葉病菌的分離與純化參照《真菌鑒定手冊》[75]橡膠樹棒孢霉落葉病癥狀（圖3-1）在海南省儋州市（DZ）、白沙黎族自治縣（BS）、五指山市（WZS）、保亭黎族苗族自治縣（BT）、樂東黎族自治縣（LD）橡膠林采集了疑似橡膠樹棒孢霉落葉病病葉372片。圖3-1三種不同病斑類型的橡膠病葉Fig.3-1Threekindsofrubberdiseasedleaves注：A魚骨狀（鐵軌型）病斑；B圓斑型病斑；C葉緣回枯型病斑Note:A:Railwaytracksymptoms;B:Circular/irregularspots;C:Shrivelingofleaftip對采集的所有病葉進行病原菌分離，經(jīng)過分離與純化獲得63株病原菌。根據(jù)63株病原菌采集的地點及葉片的采集順序進行編號，分別為DZ-11、DZ-12、DZ-13、DZ-14、DZ-15、DZ-16、DZ-17、DZ-18、DZ-19、DZ-20、DZ-21、DZ-22、DZ-23、DZ-24、DZ-25、DZ-26、DZ-27、DZ-28、DZ-29、DZ-30、DZ-31、DZ-32、DZ-33、DZ-34、DZ-123、DZ-127、DZ-129、DZ-131、DZ-134、DZ-135、DZ-137、DZ-138、BS-35、BS-36、BS-37、BS-38、BS-39、A:魚骨狀B:圓斑形C:葉緣回枯
海南橡膠樹棒孢霉落葉病菌毒素基因鑒定及基因組學分析22BS-40、BS-41、BS-42、BS-43、BS-44、BS-45、WZS-64、WZS-65、WZS-67、WZS-68、WZS-69、WZS-71、WZS-72、BT-104、BT-105、BT-106、BT-108、BT-110、BT-111、LD-112、LD-113、LD-114、LD-115、LD-116，LD-117和LD-119。3.1.2菌株形態(tài)鑒定63株病原菌中，有28株病原菌在分離第二天產(chǎn)生大量氣生菌絲，菌絲稀疏，無明顯基生菌絲，PDA培養(yǎng)第四天，氣生菌絲生長滿皿，培養(yǎng)基表面有明顯孢子堆形成，部分孢子堆呈紅色（表3-1）。對28株生長較快的病原菌的分生孢子進行孢子形態(tài)觀察，發(fā)現(xiàn)28株病原菌孢子呈長圓筒形，兩端鈍圓，無色，大小5~12μm×2~4μm，無隔膜或有一個隔膜（圖3-2），與《真菌鑒定手冊》[75]描述的膠孢炭疽菌的形態(tài)相同，初步鑒定這28株病原菌為膠孢炭疽菌。圖3-2膠孢炭疽菌菌落和分生孢子形態(tài)Fig.3-2ThecolonymorphologyandconidiamorphologyofcopyColletotrichumgloeosporioides注：A為生長4d膠孢炭疽菌的菌落形態(tài)；B為膠孢炭疽菌的分生孢子形態(tài)Note:A:ColonymorphologyofColletotrichumgloeosporioidesaftergrowfor4days;B:ConidiamorphologyofColletotrichumgloeosporioides對其余的35株病原菌進行形態(tài)鑒定，結(jié)果顯示35株病原菌第3d可以產(chǎn)生大量氣生菌絲，菌絲叢生，呈絨毛狀；隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，基生菌絲逐漸變成褐色或黑色，氣生菌絲呈灰色或白色絨毛狀，菌落邊緣呈灰色或白色菌圈，部分菌落產(chǎn)生紅褐色色素（表3-1）。AB
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[7]國內(nèi)橡膠樹主要種質(zhì)對棒孢霉落葉病的抗性評價[J]. 李博勛,劉先寶,林春花,時濤,黃貴修. 植物保護. 2014(05)
[8]土壤中黃瓜棒孢葉斑病病原菌實時熒光定量PCR檢測技術(shù)研究[J]. 高葦,李寶聚,王萬立,郝永娟,石延霞. 華北農(nóng)學報. 2014(02)
[9]黃瓜棒孢葉斑病菌PCR檢測方法的建立[J]. 陳璐,石延霞,謝學文,柴阿麗,李寶聚. 園藝學報. 2014(03)
[10]黃瓜棒孢葉斑病種子帶菌PCR分子檢測[J]. 王偉青,岳瑾,董杰. 中國植保導刊. 2013(08)
博士論文
[1]巴西橡膠樹棒孢霉落葉病病菌MAPK基因（CCK1）和毒素基因（ct）克隆與功能鑒定[D]. 劉曉妹.海南大學 2012
碩士論文
[1]我國蔬菜棒孢葉斑病病原菌多樣性研究[D]. 楊苗.中國農(nóng)業(yè)科學院 2013
[2]中國棒孢菌屬分類研究[D]. 王承海.山東農(nóng)業(yè)大學 2006
本文編號：2920509
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