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群體感應(yīng)淬滅酶克隆表達(dá)及其對(duì)銅綠假單胞菌的影響

發(fā)布時(shí)間:2020-11-21 03:00
   【背景】由于抗生素的大量使用,導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性越來(lái)越強(qiáng),尋找新的抗細(xì)菌感染藥物成為研究熱點(diǎn)!灸康摹靠寺”磉_(dá)群體感應(yīng)淬滅酶,探究其對(duì)銅綠假單胞菌毒力及致病性的影響。【方法】利用PCR技術(shù)從產(chǎn)群體感應(yīng)淬滅酶的芽孢桿菌QSI-1基因組DNA中克隆出aiiA基因,將其克隆到表達(dá)載體pET30a并導(dǎo)入大腸桿菌E.coliBL21(DE3)中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),通過(guò)鎳柱親和層析獲得純化的N-;呓z氨酸內(nèi)酯酶。用不同濃度的淬滅酶作用于銅綠假單胞菌,檢測(cè)其對(duì)銅綠假單胞菌毒力因子產(chǎn)生以及生物膜形成能力的影響;以秀麗隱桿線蟲為模型,考察其對(duì)線蟲感染銅綠假單胞菌存活率的影響!窘Y(jié)果】克隆表達(dá)出群體感應(yīng)淬滅酶,該酶能顯著抑制銅綠假單胞菌毒力因子產(chǎn)生和生物膜的形成,并能降低銅綠假單胞菌對(duì)感染線蟲的致死率!窘Y(jié)論】群體感應(yīng)淬滅酶可作為一種能高效抑制細(xì)菌致病性的物質(zhì),為臨床治療細(xì)菌性感染提供新的策略。
【部分圖文】:

電泳圖,電泳,淬滅,群體感應(yīng)


2930微生物學(xué)通報(bào)Microbiol.ChinaTel:010-64807511;E-mail:tongbao@im.ac.cn;http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn圖1PCR產(chǎn)物電泳Figure1PCRproductsofaiiAgene圖2表達(dá)的AiiA蛋白SDS-PAGE圖Figure2SDS-PAGEanalysisofAiiAprotein圖3AiiA群體感應(yīng)淬滅活性測(cè)定Figure3CharacterizationofthequorumquenchingactivityofAiiA時(shí)稍有減弱,仍達(dá)到42.40%,如圖4A所示。淬滅酶對(duì)鼠李糖脂也有顯著的抑制作用,實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)生鼠李糖脂的水平降到對(duì)照組的40%以下,如圖4B所示。為了更好地檢測(cè)總蛋白酶生成的變化,采用脫脂奶平板法,實(shí)驗(yàn)組溶蛋白圈大小明顯小于對(duì)照組,說(shuō)明淬滅酶抑制了銅綠假單胞菌蛋白酶的產(chǎn)生,如圖4C所示。2.3群體感應(yīng)淬滅酶對(duì)銅綠假單胞菌生物膜產(chǎn)生的影響采用結(jié)晶紫染色法測(cè)定淬滅酶對(duì)PA生物膜形圖4群體感應(yīng)淬滅酶對(duì)銅綠假單胞菌毒力因子產(chǎn)生的影響Figure4EffectsofAiiAonvirulencefactorsproductionofPseudomonasaeruginosa注:A:綠膿菌素;B:鼠李糖脂;C:蛋白酶.*:P<0.05.Note:A:Pyocyanin;B:Rhamnolipid;C:Protease.*:P<0.05.

蛋白S,淬滅,群體感應(yīng),鼠李糖脂


2930微生物學(xué)通報(bào)Microbiol.ChinaTel:010-64807511;E-mail:tongbao@im.ac.cn;http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn圖1PCR產(chǎn)物電泳Figure1PCRproductsofaiiAgene圖2表達(dá)的AiiA蛋白SDS-PAGE圖Figure2SDS-PAGEanalysisofAiiAprotein圖3AiiA群體感應(yīng)淬滅活性測(cè)定Figure3CharacterizationofthequorumquenchingactivityofAiiA時(shí)稍有減弱,仍達(dá)到42.40%,如圖4A所示。淬滅酶對(duì)鼠李糖脂也有顯著的抑制作用,實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)生鼠李糖脂的水平降到對(duì)照組的40%以下,如圖4B所示。為了更好地檢測(cè)總蛋白酶生成的變化,采用脫脂奶平板法,實(shí)驗(yàn)組溶蛋白圈大小明顯小于對(duì)照組,說(shuō)明淬滅酶抑制了銅綠假單胞菌蛋白酶的產(chǎn)生,如圖4C所示。2.3群體感應(yīng)淬滅酶對(duì)銅綠假單胞菌生物膜產(chǎn)生的影響采用結(jié)晶紫染色法測(cè)定淬滅酶對(duì)PA生物膜形圖4群體感應(yīng)淬滅酶對(duì)銅綠假單胞菌毒力因子產(chǎn)生的影響Figure4EffectsofAiiAonvirulencefactorsproductionofPseudomonasaeruginosa注:A:綠膿菌素;B:鼠李糖脂;C:蛋白酶.*:P<0.05.Note:A:Pyocyanin;B:Rhamnolipid;C:Protease.*:P<0.05.

群體感應(yīng),淬滅,鼠李糖脂


2930微生物學(xué)通報(bào)Microbiol.ChinaTel:010-64807511;E-mail:tongbao@im.ac.cn;http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn圖1PCR產(chǎn)物電泳Figure1PCRproductsofaiiAgene圖2表達(dá)的AiiA蛋白SDS-PAGE圖Figure2SDS-PAGEanalysisofAiiAprotein圖3AiiA群體感應(yīng)淬滅活性測(cè)定Figure3CharacterizationofthequorumquenchingactivityofAiiA時(shí)稍有減弱,仍達(dá)到42.40%,如圖4A所示。淬滅酶對(duì)鼠李糖脂也有顯著的抑制作用,實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)生鼠李糖脂的水平降到對(duì)照組的40%以下,如圖4B所示。為了更好地檢測(cè)總蛋白酶生成的變化,采用脫脂奶平板法,實(shí)驗(yàn)組溶蛋白圈大小明顯小于對(duì)照組,說(shuō)明淬滅酶抑制了銅綠假單胞菌蛋白酶的產(chǎn)生,如圖4C所示。2.3群體感應(yīng)淬滅酶對(duì)銅綠假單胞菌生物膜產(chǎn)生的影響采用結(jié)晶紫染色法測(cè)定淬滅酶對(duì)PA生物膜形圖4群體感應(yīng)淬滅酶對(duì)銅綠假單胞菌毒力因子產(chǎn)生的影響Figure4EffectsofAiiAonvirulencefactorsproductionofPseudomonasaeruginosa注:A:綠膿菌素;B:鼠李糖脂;C:蛋白酶.*:P<0.05.Note:A:Pyocyanin;B:Rhamnolipid;C:Protease.*:P<0.05.
【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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4 王茹;群體感應(yīng)對(duì)信號(hào)分子濃度調(diào)節(jié)非連續(xù)模型的定性研究[D];西安科技大學(xué);2019年

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7 趙曉曼;大腸桿菌群體感應(yīng)基因ydiV在噬菌體感染中的作用研究[D];昆明理工大學(xué);2016年

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10 閆潞鋒;根際特異微生物的篩選及對(duì)連作太子參致害的初步研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年



本文編號(hào):2892420

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