發(fā)布時(shí)間：2020-11-21 01:09

　　 目的:構(gòu)建pCDNA3.1-MT2A真核表達(dá)載體并觀察其在293T和SMMC7721細(xì)胞株中的定位和表達(dá)情況。方法:使用基因合成法合成MT2A基因,在其N端添加Kozak序列及His標(biāo)簽序列,將擴(kuò)增后的目的基因雙酶切連接至pcDNA3.1(+)載體的BamHⅠ和NotⅠ之間。轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌后,挑取陽(yáng)性克隆子進(jìn)行質(zhì)粒抽提電泳及測(cè)序鑒定。將鑒定正確的pCDNA3.1-MT2A質(zhì)粒采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染293T和SMMC7721細(xì)胞株,激光共聚焦顯微鏡觀察其在真核細(xì)胞中的表達(dá)和定位情況。結(jié)果:pCDNA3.1-MT2A重組質(zhì)粒經(jīng)酶切電泳及DNA測(cè)序證實(shí),目的基因MT2A的序列完全正確,真核表達(dá)載體構(gòu)建成功,激光共聚焦觀察發(fā)現(xiàn)該重組質(zhì)粒表達(dá)于293T和SMMC7721細(xì)胞的胞質(zhì)中。結(jié)論:成功構(gòu)建pCDNA3.1-MT2A融合基因并進(jìn)行真核表達(dá),發(fā)現(xiàn)MT2A主要定位于293T和SMMC7721細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。本研究為探討MT2A在肝癌細(xì)胞內(nèi)的功能奠定了基礎(chǔ)。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 載體構(gòu)建
        1.2.2 細(xì)胞準(zhǔn)備
        1.2.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        1.2.4 激光共聚焦定位
2 結(jié)果
    2.1 真核表達(dá)載體的鑒定
    2.2 陽(yáng)性克隆測(cè)序及比對(duì)
    2.3 激光共聚焦顯微鏡觀察MT2A在細(xì)胞中的定位
3 討論

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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