SARS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)、抗原性鑒定和DNA免疫研究
發(fā)布時間：2020-12-04 10:41
2002年底，在我國廣東省最先出現(xiàn)的嚴(yán)重急性呼吸綜合征（severe acute respiratory syndrome，SARS），也被稱為非典型肺炎，隨后在全球30多個國家和地區(qū)爆發(fā)流行，其致病因子于2003年4月被鑒定為一種新的冠狀病毒，命名為SARS冠狀病毒（SARS-CoV），屬于套病毒目（Nidovirales）、冠狀病毒科（Coronaviridae）、冠狀病毒屬（Coronvirus），是一種球形、有包膜的單正鏈RNA病毒，主要引起人和動物的呼吸道和腸道疾病，其基因組長約30kb、結(jié)構(gòu)為：5’-帽狀結(jié)構(gòu)-復(fù)制酶（rep）-刺突糖蛋白（S）-小包膜蛋白（E）-膜糖蛋白（M）-核衣殼蛋白（N）-polyA尾3’。N蛋白包繞著基因組RNA形成核衣殼，核衣殼外是含S、M、E蛋白的脂質(zhì)包膜。本研究在大腸桿菌表達(dá)出了SARS-CoV的結(jié)構(gòu)蛋白和3CLpro蛋白酶，并對其抗原性進(jìn)行了鑒定；檢測了30份SARS患者恢復(fù)期血清抗體情況；構(gòu)建了全長S和N基因DNA疫苗，進(jìn)行了小鼠免疫試驗；還進(jìn)行了N基因與綠色熒光蛋白的融合表達(dá)質(zhì)粒在COS1細(xì)胞和小鼠肌肉細(xì)胞的表達(dá)試...
【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校
【文章頁數(shù)】：83 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
SARS~Cov各基因片段PCR產(chǎn)物及表達(dá)質(zhì)粒的酶切鑒定
Marker對照MMarker對!獄3eL，’R‘，3CL，’RU3CL，”‘U圖2.SARS一COV結(jié)構(gòu)蛋白及3C已R()蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)(SDS一PAGE分析)SARS一Cov結(jié)構(gòu)蛋白及3CL’’陽蛋白的抗原性分析:兩份抗SARS一CoVIgG強(qiáng)陽性的SARS恢復(fù)期血清等體積混合，作為檢測抗對大腸桿菌表達(dá)的SARS一CoV各蛋白進(jìn)行WesternBlot分析，結(jié)果表明，S蛋白個片段5300、5240、5338與5324均有較好的抗原性，且位于氨基端的5300、S和中間位置的5338的抗原性似乎比梭基端的5324強(qiáng)。M蛋白的抗原性較弱，而白與3CLPRO未見可見的反應(yīng)條帶(圖3A，對照分別為空載體pGEX一4T一l、pE’l’一轉(zhuǎn)化的宿主菌誘導(dǎo)樣品)。N蛋白的3種分子量產(chǎn)物均可與SARS恢復(fù)期血清發(fā)生(圖3B，對照為空載體pPROExHTa轉(zhuǎn)化的宿主菌誘導(dǎo)樣品)。N蛋白的抗原性明強(qiáng)，當(dāng)靶蛋白電泳上樣量相似時，可以發(fā)現(xiàn)N蛋白與血清的反應(yīng)明顯強(qiáng)于S蛋白3C)。A
第二軍醫(yī)大學(xué)碩士論文對照圖3NMarkerN5300SARS一CoV結(jié)構(gòu)蛋白及3CL，’RO蛋白的Westernblot分析4.SARS患者恢復(fù)期血清中抗SARS一CoVS、NIgG抗體ELISA檢測結(jié)果:包被的抗原N42253005240檢出陽性例數(shù)檢出率(敏感性)83.3%50%40%用Ni一Nl人樹脂以親和層析法純化在大腸桿菌中表達(dá)的N422、5300和5240蛋白，包被酶聯(lián)板，用ELISA法檢測經(jīng)SARS一CoV全病毒裂解液抗原檢測為抗SARS一CoVIgG陽性的30份SARS患者的恢復(fù)期血清，其中25份血清抗N蛋白IgG陽性，巧份血清抗5300蛋白IgG陽性，12份血清抗5240蛋白IgG陽性(12份為三者均陽性，15份為前二者均陽性)。結(jié)果提示N蛋白對于SARS一CoV感染的特異性診斷具有較高的敏感性。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]DNA Vaccine of SARS-Cov S Gene Induces Antibody Response in Mice[J]. Ping ZHAO, Jin-Shan KE, Zhao-Lin QIN, Hao REN, Lan-Juan ZHAO, Jian-Guo YU, Jun GAO, Shi-Ying ZHU, and Zhong-Tian QI(Department of Microbiology, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China; Department of Infectious Diseases, PLA Hospital No.88, Tai’an 271000, China ). Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2004(01)
[2]Severe acute respiratory syndrome and its lesions in digestive system[J]. Jian-Zhong Zhang Department of Pathology,306 Hospital of PLA, Beijing 100101,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(06)
[3]Advances in clinical diagnosis and treatment of severe acute respiratory syndrome[J]. Qing-He Nie Xin-Dong Luo Wu-Li Hui The Chinese PLA Center of Diagnosis and Treatment for Infectious Diseases,Tangdu Hospital,Fourth Military Medical University,Xi’an 710038,Shaanxi Province,China Department of Epidemiology,Chinese People’s Armed Police Force Medical College,Tianjin 300162,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(06)
[4]電鏡觀察從非典型肺炎患者尸檢標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)衣原體樣和冠狀病毒樣顆粒[J]. 洪濤,王健偉,孫異臨,段淑敏,陳良標(biāo),屈建國,倪安平,梁國棟,任麗麗,楊仁全,郭嵐,周為民,陳杰,李德新,許文波,徐紅,郭元吉,戴淑玲,畢勝利,董小平,阮力. 中華醫(yī)學(xué)雜志. 2003(08)
[5]表達(dá)HCV核心蛋白的重組減毒鼠傷寒沙門菌口服免疫小鼠的研究[J]. 趙平,曹潔,曹明媚,朱詩應(yīng),戚中田. 自然科學(xué)進(jìn)展. 2002(09)
[6]HBV包膜-核心蛋白融合基因DNA疫苗誘導(dǎo)小鼠持久的細(xì)胞免疫應(yīng)答[J]. 趙平,姜春鵬,趙蘭娟,溫新宇,戚中田. 生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2002(04)
本文編號：2897454
【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校
【文章頁數(shù)】：83 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
SARS~Cov各基因片段PCR產(chǎn)物及表達(dá)質(zhì)粒的酶切鑒定
Marker對照MMarker對!獄3eL，’R‘，3CL，’RU3CL，”‘U圖2.SARS一COV結(jié)構(gòu)蛋白及3C已R()蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)(SDS一PAGE分析)SARS一Cov結(jié)構(gòu)蛋白及3CL’’陽蛋白的抗原性分析:兩份抗SARS一CoVIgG強(qiáng)陽性的SARS恢復(fù)期血清等體積混合，作為檢測抗對大腸桿菌表達(dá)的SARS一CoV各蛋白進(jìn)行WesternBlot分析，結(jié)果表明，S蛋白個片段5300、5240、5338與5324均有較好的抗原性，且位于氨基端的5300、S和中間位置的5338的抗原性似乎比梭基端的5324強(qiáng)。M蛋白的抗原性較弱，而白與3CLPRO未見可見的反應(yīng)條帶(圖3A，對照分別為空載體pGEX一4T一l、pE’l’一轉(zhuǎn)化的宿主菌誘導(dǎo)樣品)。N蛋白的3種分子量產(chǎn)物均可與SARS恢復(fù)期血清發(fā)生(圖3B，對照為空載體pPROExHTa轉(zhuǎn)化的宿主菌誘導(dǎo)樣品)。N蛋白的抗原性明強(qiáng)，當(dāng)靶蛋白電泳上樣量相似時，可以發(fā)現(xiàn)N蛋白與血清的反應(yīng)明顯強(qiáng)于S蛋白3C)。A
第二軍醫(yī)大學(xué)碩士論文對照圖3NMarkerN5300SARS一CoV結(jié)構(gòu)蛋白及3CL，’RO蛋白的Westernblot分析4.SARS患者恢復(fù)期血清中抗SARS一CoVS、NIgG抗體ELISA檢測結(jié)果:包被的抗原N42253005240檢出陽性例數(shù)檢出率(敏感性)83.3%50%40%用Ni一Nl人樹脂以親和層析法純化在大腸桿菌中表達(dá)的N422、5300和5240蛋白，包被酶聯(lián)板，用ELISA法檢測經(jīng)SARS一CoV全病毒裂解液抗原檢測為抗SARS一CoVIgG陽性的30份SARS患者的恢復(fù)期血清，其中25份血清抗N蛋白IgG陽性，巧份血清抗5300蛋白IgG陽性，12份血清抗5240蛋白IgG陽性(12份為三者均陽性，15份為前二者均陽性)。結(jié)果提示N蛋白對于SARS一CoV感染的特異性診斷具有較高的敏感性。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]DNA Vaccine of SARS-Cov S Gene Induces Antibody Response in Mice[J]. Ping ZHAO, Jin-Shan KE, Zhao-Lin QIN, Hao REN, Lan-Juan ZHAO, Jian-Guo YU, Jun GAO, Shi-Ying ZHU, and Zhong-Tian QI(Department of Microbiology, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China; Department of Infectious Diseases, PLA Hospital No.88, Tai’an 271000, China ). Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2004(01)
[2]Severe acute respiratory syndrome and its lesions in digestive system[J]. Jian-Zhong Zhang Department of Pathology,306 Hospital of PLA, Beijing 100101,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(06)
[3]Advances in clinical diagnosis and treatment of severe acute respiratory syndrome[J]. Qing-He Nie Xin-Dong Luo Wu-Li Hui The Chinese PLA Center of Diagnosis and Treatment for Infectious Diseases,Tangdu Hospital,Fourth Military Medical University,Xi’an 710038,Shaanxi Province,China Department of Epidemiology,Chinese People’s Armed Police Force Medical College,Tianjin 300162,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(06)
[4]電鏡觀察從非典型肺炎患者尸檢標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)衣原體樣和冠狀病毒樣顆粒[J]. 洪濤,王健偉,孫異臨,段淑敏,陳良標(biāo),屈建國,倪安平,梁國棟,任麗麗,楊仁全,郭嵐,周為民,陳杰,李德新,許文波,徐紅,郭元吉,戴淑玲,畢勝利,董小平,阮力. 中華醫(yī)學(xué)雜志. 2003(08)
[5]表達(dá)HCV核心蛋白的重組減毒鼠傷寒沙門菌口服免疫小鼠的研究[J]. 趙平,曹潔,曹明媚,朱詩應(yīng),戚中田. 自然科學(xué)進(jìn)展. 2002(09)
[6]HBV包膜-核心蛋白融合基因DNA疫苗誘導(dǎo)小鼠持久的細(xì)胞免疫應(yīng)答[J]. 趙平,姜春鵬,趙蘭娟,溫新宇,戚中田. 生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2002(04)
本文編號：2897454
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