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SARS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)、抗原性鑒定和DNA免疫研究

發(fā)布時間:2020-12-04 10:41
  2002年底,在我國廣東省最先出現(xiàn)的嚴(yán)重急性呼吸綜合征(severe acute respiratory syndrome,SARS),也被稱為非典型肺炎,隨后在全球30多個國家和地區(qū)爆發(fā)流行,其致病因子于2003年4月被鑒定為一種新的冠狀病毒,命名為SARS冠狀病毒(SARS-CoV),屬于套病毒目(Nidovirales)、冠狀病毒科(Coronaviridae)、冠狀病毒屬(Coronvirus),是一種球形、有包膜的單正鏈RNA病毒,主要引起人和動物的呼吸道和腸道疾病,其基因組長約30kb、結(jié)構(gòu)為:5’-帽狀結(jié)構(gòu)-復(fù)制酶(rep)-刺突糖蛋白(S)-小包膜蛋白(E)-膜糖蛋白(M)-核衣殼蛋白(N)-polyA尾3’。N蛋白包繞著基因組RNA形成核衣殼,核衣殼外是含S、M、E蛋白的脂質(zhì)包膜。本研究在大腸桿菌表達(dá)出了SARS-CoV的結(jié)構(gòu)蛋白和3CLpro蛋白酶,并對其抗原性進(jìn)行了鑒定;檢測了30份SARS患者恢復(fù)期血清抗體情況;構(gòu)建了全長S和N基因DNA疫苗,進(jìn)行了小鼠免疫試驗;還進(jìn)行了N基因與綠色熒光蛋白的融合表達(dá)質(zhì)粒在COS1細(xì)胞和小鼠肌肉細(xì)胞的表達(dá)試... 

【文章來源】:中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】:83 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

SARS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)、抗原性鑒定和DNA免疫研究


SARS~Cov各基因片段PCR產(chǎn)物及表達(dá)質(zhì)粒的酶切鑒定

結(jié)構(gòu)蛋白,蛋白,抗原性


Marker對照MMarker對!獄3eL,’R‘,3CL,’RU3CL,”‘U圖2.SARS一COV結(jié)構(gòu)蛋白及3C已R()蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)(SDS一PAGE分析)SARS一Cov結(jié)構(gòu)蛋白及3CL’’陽蛋白的抗原性分析:兩份抗SARS一CoVIgG強(qiáng)陽性的SARS恢復(fù)期血清等體積混合,作為檢測抗對大腸桿菌表達(dá)的SARS一CoV各蛋白進(jìn)行WesternBlot分析,結(jié)果表明,S蛋白個片段5300、5240、5338與5324均有較好的抗原性,且位于氨基端的5300、S和中間位置的5338的抗原性似乎比梭基端的5324強(qiáng)。M蛋白的抗原性較弱,而白與3CLPRO未見可見的反應(yīng)條帶(圖3A,對照分別為空載體pGEX一4T一l、pE’l’一轉(zhuǎn)化的宿主菌誘導(dǎo)樣品)。N蛋白的3種分子量產(chǎn)物均可與SARS恢復(fù)期血清發(fā)生(圖3B,對照為空載體pPROExHTa轉(zhuǎn)化的宿主菌誘導(dǎo)樣品)。N蛋白的抗原性明強(qiáng),當(dāng)靶蛋白電泳上樣量相似時,可以發(fā)現(xiàn)N蛋白與血清的反應(yīng)明顯強(qiáng)于S蛋白3C)。A

結(jié)構(gòu)蛋白,恢復(fù)期血清,血清


第二軍醫(yī)大學(xué)碩士論文對照圖3NMarkerN5300SARS一CoV結(jié)構(gòu)蛋白及3CL,’RO蛋白的Westernblot分析4.SARS患者恢復(fù)期血清中抗SARS一CoVS、NIgG抗體ELISA檢測結(jié)果:包被的抗原N42253005240檢出陽性例數(shù)檢出率(敏感性)83.3%50%40%用Ni一Nl人樹脂以親和層析法純化在大腸桿菌中表達(dá)的N422、5300和5240蛋白,包被酶聯(lián)板,用ELISA法檢測經(jīng)SARS一CoV全病毒裂解液抗原檢測為抗SARS一CoVIgG陽性的30份SARS患者的恢復(fù)期血清,其中25份血清抗N蛋白IgG陽性,巧份血清抗5300蛋白IgG陽性,12份血清抗5240蛋白IgG陽性(12份為三者均陽性,15份為前二者均陽性)。結(jié)果提示N蛋白對于SARS一CoV感染的特異性診斷具有較高的敏感性。

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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本文編號:2897454

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