a国产,中文字幕久久波多野结衣AV,欧美粗大猛烈老熟妇,女人av天堂

當(dāng)前位置:主頁(yè) > 醫(yī)學(xué)論文 > 病理論文 >

人包皮成纖維細(xì)胞酵母雙雜交均一化cDNA文庫(kù)的構(gòu)建

發(fā)布時(shí)間:2020-12-09 17:23
  目的構(gòu)建人包皮成纖維細(xì)胞(HFF)酵母雙雜交均一化cDNA文庫(kù),為研究弓形蟲與宿主細(xì)胞間的相互作用及其入侵機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法復(fù)蘇、培養(yǎng)HFF細(xì)胞并提取細(xì)胞總RNA,采用SMART和LD-PCR合成ds cDNA,對(duì)其進(jìn)行均一化處理后,利用SfiI酶切,酶切后的ds cDNA連接pGADT7-SfiI三閱讀框表達(dá)載體,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌HST08,構(gòu)建cDNA初級(jí)文庫(kù),進(jìn)行庫(kù)容檢測(cè)和插入片段的PCR鑒定。提取文庫(kù)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至酵母Y187中,制備HFF細(xì)胞Y187酵母文庫(kù)。結(jié)果 HFF細(xì)胞總RNA的A260/A280值為2.02,1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)到28S和18S核糖體特異性條帶且二者亮度之比為2∶1,提取的RNA完整、質(zhì)量良好。3種讀碼框庫(kù)容分別為1.4×106 CFU/ml、1.8×106 CFU/ml和2.0×106 CFU/ml,重組率為99%。cDNA文庫(kù)外源基因插入片段長(zhǎng)度700~2 000bp。制備的HFF細(xì)胞酵母cDNA文庫(kù)庫(kù)容量為2.5×107 CFU/ml。結(jié)論構(gòu)建的HF... 

【文章來源】:中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2019年01期 第23-26頁(yè) 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】:4 頁(yè)

【部分圖文】:

人包皮成纖維細(xì)胞酵母雙雜交均一化cDNA文庫(kù)的構(gòu)建


圖1HFF細(xì)胞總RNA1.5%瓊脂糖凝膠電泳M250bpDNALadder1TotalRNAofHFFcellM250bpDNA標(biāo)志物1HFF細(xì)胞總RNA

標(biāo)志物,電泳圖,庫(kù)容,文庫(kù)


勻彌散,且濃度提高(圖2B)。M250bpDNA標(biāo)志物1HFF細(xì)胞總RNA圖1HFF細(xì)胞總RNA1.5%瓊脂糖凝膠電泳M250bpDNALadder1TotalRNAofHFFcellFig.1TotalRNAofHFFcellM250bpDNA標(biāo)志物1cDNA2均一化的cDNA圖2cDNA合成及均一化電泳圖M250bpDNALadder1cDNA2normalizedcDNAFig.2GelelectrophoresisresultsofcDNAandnormalizedcDNA3cDNASfiI酶切及純化cDNA經(jīng)過限制性內(nèi)切酶SfiI酶切處理后,使用CHROMASPIN-1000-TE對(duì)酶切cDNA進(jìn)行過柱處理,去除短片段,1.5%瓊脂糖凝膠電泳顯示彌散狀的cDNA均勻分布在500~3000bp處(圖3),短片段得到有效去除。M250bpDNA標(biāo)志物1CHROMASPIN-1000-TE純化后的cDNA圖3CHROMASPIN-1000-TE純化cDNA的電泳分析M250bpDNALadder1PurificationcDNAwithCHROMASPIN-1000-TEFig.3PurificationcDNAwithCHROMASPIN-1000-TE4初級(jí)文庫(kù)庫(kù)容檢測(cè)酶切、純化后的cDNA與pGADT7-SfiI三框表達(dá)載體連接、轉(zhuǎn)化后,計(jì)算文庫(kù)庫(kù)容,3種讀碼框庫(kù)容分別為1.4×106CFU/ml、1.8×106CFU/ml和2.0×1

標(biāo)志物,電泳分析,庫(kù)容,文庫(kù)


勻彌散,且濃度提高(圖2B)。M250bpDNA標(biāo)志物1HFF細(xì)胞總RNA圖1HFF細(xì)胞總RNA1.5%瓊脂糖凝膠電泳M250bpDNALadder1TotalRNAofHFFcellFig.1TotalRNAofHFFcellM250bpDNA標(biāo)志物1cDNA2均一化的cDNA圖2cDNA合成及均一化電泳圖M250bpDNALadder1cDNA2normalizedcDNAFig.2GelelectrophoresisresultsofcDNAandnormalizedcDNA3cDNASfiI酶切及純化cDNA經(jīng)過限制性內(nèi)切酶SfiI酶切處理后,使用CHROMASPIN-1000-TE對(duì)酶切cDNA進(jìn)行過柱處理,去除短片段,1.5%瓊脂糖凝膠電泳顯示彌散狀的cDNA均勻分布在500~3000bp處(圖3),短片段得到有效去除。M250bpDNA標(biāo)志物1CHROMASPIN-1000-TE純化后的cDNA圖3CHROMASPIN-1000-TE純化cDNA的電泳分析M250bpDNALadder1PurificationcDNAwithCHROMASPIN-1000-TEFig.3PurificationcDNAwithCHROMASPIN-1000-TE4初級(jí)文庫(kù)庫(kù)容檢測(cè)酶切、純化后的cDNA與pGADT7-SfiI三框表達(dá)載體連接、轉(zhuǎn)化后,計(jì)算文庫(kù)庫(kù)容,3種讀碼框庫(kù)容分別為1.4×106CFU/ml、1.8×106CFU/ml和2.0×1

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]白背飛虱酵母雙雜交cDNA文庫(kù)的構(gòu)建[J]. 薛進(jìn),李靜,羊健,唐彥,梁瑤,陳劍平,張恒木.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2017(12)
[2]滅蚊真菌-貴陽(yáng)腐霉Pythium sp.GY1938菌株cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及鑒定[J]. 楊平,李艷,張坤,余赟,楊亞瓊,黃世梅,李敏惠.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2017(03)

博士論文
[1]與弓形蟲微線體蛋白互作的宿主蛋白的篩選和鑒定[D]. 王一凡.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號(hào):2907211

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://www.wukwdryxk.cn/yixuelunwen/binglixuelunwen/2907211.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶24192***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要?jiǎng)h除請(qǐng)E-mail郵箱bigeng88@qq.com
美女张开腿黄网站免费| 日韩无码久久久久久齐齐| 国产精品水嫩水嫩| 久久久久久久精品成人热下载| 日韩一级大片| 久久久91精品一区二区| 国产SUV精品一区二区33| 久久久国产精品无码一区二区| 欧亚乱熟女一区二区在线| 天齐网| 米奇| 七月丁香试色排名| 黑人操亚洲女人| 麻豆成人91精品二区三区| av你懂的| 国产精品沙发午睡系列| 国产精品色内内在线播放| 成人午夜精品久久久久久久| 夜夜爽妓女8888888视频| 片多多免费观看高清电影| 国产精品久久久久这里只有精品| 亚洲国产综合无码一区| 无码aⅴ在线观看| 亚洲色自偷自拍另类小说| 性色AV一区二区三区| 麻豆精品久久久久久久99蜜桃| 无码专区一va亚洲v专区在线| 亚洲精品自偷自拍无码忘忧| 久久久99久久久国产自输拍| 天天天天做夜夜夜夜做无码| 国内精品视频一区二区三区八戒 | 国产a v无码专区亚洲av| 国产在线拍揄自揄拍无码| 人妻少妇看a偷人无码精品视频| 久久亚洲AV成人无码国产| 制服丝袜99在线不卡| 精品中文无码一区二区| 亚洲成a人片在线观看中文无码| 精品福利一区二区视频| 在线v片免费观看视频| av免费不卡国产观看|