HCV E2蛋白經(jīng)DC-SIGN受體對Raf-MEK1/2信號轉(zhuǎn)導途徑的調(diào)控
發(fā)布時間：2020-12-15 11:54
病毒受體是位于細胞表面、由宿主細胞基因所編碼、參與病毒感染宿主細胞的分子或分子復合物,決定病毒的宿主細胞特異性、組織嗜性及致病性的主要因素之一。病毒可以與一個或一個以上的細胞表面受體結(jié)合,在不同類型細胞可共用相同受體,而同種病毒在不同類型細胞所結(jié)合的受體也有可能不同。 目前,對于丙型肝炎病毒（HCV）進入宿主細胞的確切機制仍不十分清楚,但一般認為病毒表面包膜蛋白與其特異性受體的結(jié)合是病毒感染細胞的關鍵環(huán)節(jié)。研究人員應用真核細胞表達的HCV主要包膜蛋白E2、E1/E2異二聚體、類病毒顆粒為工具,在體外模擬天然病毒體與靶細胞的相互作用。相繼發(fā)現(xiàn)了人細胞表面CD81、低密度脂蛋白受體（LDLR）、B型清道夫受體I（SRBI）、樹突狀細胞特異性細胞粘附分子-3-結(jié)合非整合素分子（DC-SIGN）和肝/淋巴細胞特異性細胞間粘附分子-3-結(jié)合整合素分子（L-SIGN）等,認為上述分子可作為HCV受體而介導HCV與靶細胞的結(jié)合。近期的研究表明,HCV和HCVE2蛋白可以與樹突狀細胞表面的DC-SIGN或肝竇內(nèi)皮細胞表面的L-SIGN結(jié)合,該復合物進入早期內(nèi)質(zhì)體以逃避溶酶體對HCV的降解,從而利于其在...
【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校
【文章頁數(shù)】：60 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
HCVEZ蛋白刺激時間對MH3刀瓜X一DC一sIGN細胞內(nèi)Ra-fMEKI/2的影響
樣品條帶呈色最深，即其相應的磷酸化反應最強。由上可見，終濃度為2館m/1HcvEZ蛋白刺激30mni可作為刺激細胞，研究Raf及MEKI/2磷酸化水平的適宜條件，之后的實驗即采用此條件進行研究(圖1一8)。圖1一8HCVEZ蛋白刺激時間對MH3刀瓜X一DC一sIGN細胞內(nèi)Ra-fMEKI/2的影響2.MEKI/2激酶抑制劑U0126對NIH3T3觸X·DC一SIGN細胞內(nèi)MEKI/2的影響比較HCVEZ蛋白刺激組和U0126預處理組的NIH3T3月吸X一DC一SIGN細胞中MEKI/2磷酸化水平(圖1一9)。各份樣品內(nèi)非磷酸化的MEKI/2量相近，表現(xiàn)為條帶呈色深淺一致。磷酸化phoPsho一MEKI/2檢測則表明，HcvEZ蛋白處理樣品條帶呈色最深，即其相應磷酸化反應最強，提示UO126可明顯抑制HCVEZ蛋白刺激所致MEKI/2磷酸化水平的提高。圖1一9MEKI/2激酶抑制劑U0126對MEKI/2磷酸化水平的影響A:未處理B:HCVEZC:U0126一HCVEZ3.DC一sIGN單抗及-L1sGN單抗對NIH3T3細胞內(nèi)Raf及MEKI/2的影響NIH3T3細胞被選擇作為對照細胞，分別用EZ蛋白、EZ蛋白和DC一SIGN單抗、EZ蛋自和LSIGN單抗處理NIH3T3細胞，之后檢測其細胞內(nèi)Raf和MEKI/2的磷酸化情況。各份樣品內(nèi)非磷酸化的Raf和MEKI/2量均相近，條帶呈色深淺均一致，保證體系的可比性。由圖1一10可見
度DC一sIGN單抗(終濃度分別為4腳歲ml、8呵ml、10呵ml和12戶9/1111)與EZ蛋白處理NIH3刃刀以X一DC一SIGN細胞，比較其Raf、MEKI/2磷酸化變化情況。此外，設置DC一SIGN單抗單獨處理細胞組作為對照。如圖1一n所示，同未處理的細胞對照組相比，E2蛋白刺激后，細胞內(nèi)Raf、MEK磷酸化水平明顯升高，但以不同濃度DC一SIGN單抗預處理細胞再用EZ蛋白刺激，則細胞內(nèi)Raf、MEK磷酸化水平降低。此結(jié)果高度提示，EZ蛋白經(jīng)DC一SIGN受體上調(diào)Raf、MEK激酶的磷酸化反應。圖l一11HCVEZ與DC一SIGN單抗對NIH3竹M/X一DC一SIGN細胞內(nèi)Raf及MEKI/2的影響A:未處理:BHCVEZC:4協(xié)歲m1DC一SIGNmAb一HCVEZD:spg/nIlDC·SIGNmAb一HCVEZE:10尸留m1DC一SIGNmAb一HCVEZF:12Pg/m1DC一SIGNmAb一HCVEZG:4叼m1DC一SIGNmAb進一步研究-LSIGN單抗對HCVEZ蛋自上調(diào)Raf、MEK磷酸化的影響，先以不同濃度-LsloN單抗(終濃度分別為4呵ml、s呵ml、10乒官ml不[112卜宮ml)處理
【參考文獻】：
期刊論文
[1]丙型肝炎病毒致病新模式:包膜蛋白2對MAPK/ERK途徑的激活[J]. 趙蘭娟,劉厚奇,朱詩應,戚中田,馮根生. 中國科學(C輯:生命科學). 2003(03)
本文編號：2918222
【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校
【文章頁數(shù)】：60 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
HCVEZ蛋白刺激時間對MH3刀瓜X一DC一sIGN細胞內(nèi)Ra-fMEKI/2的影響
樣品條帶呈色最深，即其相應的磷酸化反應最強。由上可見，終濃度為2館m/1HcvEZ蛋白刺激30mni可作為刺激細胞，研究Raf及MEKI/2磷酸化水平的適宜條件，之后的實驗即采用此條件進行研究(圖1一8)。圖1一8HCVEZ蛋白刺激時間對MH3刀瓜X一DC一sIGN細胞內(nèi)Ra-fMEKI/2的影響2.MEKI/2激酶抑制劑U0126對NIH3T3觸X·DC一SIGN細胞內(nèi)MEKI/2的影響比較HCVEZ蛋白刺激組和U0126預處理組的NIH3T3月吸X一DC一SIGN細胞中MEKI/2磷酸化水平(圖1一9)。各份樣品內(nèi)非磷酸化的MEKI/2量相近，表現(xiàn)為條帶呈色深淺一致。磷酸化phoPsho一MEKI/2檢測則表明，HcvEZ蛋白處理樣品條帶呈色最深，即其相應磷酸化反應最強，提示UO126可明顯抑制HCVEZ蛋白刺激所致MEKI/2磷酸化水平的提高。圖1一9MEKI/2激酶抑制劑U0126對MEKI/2磷酸化水平的影響A:未處理B:HCVEZC:U0126一HCVEZ3.DC一sIGN單抗及-L1sGN單抗對NIH3T3細胞內(nèi)Raf及MEKI/2的影響NIH3T3細胞被選擇作為對照細胞，分別用EZ蛋白、EZ蛋白和DC一SIGN單抗、EZ蛋自和LSIGN單抗處理NIH3T3細胞，之后檢測其細胞內(nèi)Raf和MEKI/2的磷酸化情況。各份樣品內(nèi)非磷酸化的Raf和MEKI/2量均相近，條帶呈色深淺均一致，保證體系的可比性。由圖1一10可見
度DC一sIGN單抗(終濃度分別為4腳歲ml、8呵ml、10呵ml和12戶9/1111)與EZ蛋白處理NIH3刃刀以X一DC一SIGN細胞，比較其Raf、MEKI/2磷酸化變化情況。此外，設置DC一SIGN單抗單獨處理細胞組作為對照。如圖1一n所示，同未處理的細胞對照組相比，E2蛋白刺激后，細胞內(nèi)Raf、MEK磷酸化水平明顯升高，但以不同濃度DC一SIGN單抗預處理細胞再用EZ蛋白刺激，則細胞內(nèi)Raf、MEK磷酸化水平降低。此結(jié)果高度提示，EZ蛋白經(jīng)DC一SIGN受體上調(diào)Raf、MEK激酶的磷酸化反應。圖l一11HCVEZ與DC一SIGN單抗對NIH3竹M/X一DC一SIGN細胞內(nèi)Raf及MEKI/2的影響A:未處理:BHCVEZC:4協(xié)歲m1DC一SIGNmAb一HCVEZD:spg/nIlDC·SIGNmAb一HCVEZE:10尸留m1DC一SIGNmAb一HCVEZF:12Pg/m1DC一SIGNmAb一HCVEZG:4叼m1DC一SIGNmAb進一步研究-LSIGN單抗對HCVEZ蛋自上調(diào)Raf、MEK磷酸化的影響，先以不同濃度-LsloN單抗(終濃度分別為4呵ml、s呵ml、10乒官ml不[112卜宮ml)處理
【參考文獻】：
期刊論文
[1]丙型肝炎病毒致病新模式:包膜蛋白2對MAPK/ERK途徑的激活[J]. 趙蘭娟,劉厚奇,朱詩應,戚中田,馮根生. 中國科學(C輯:生命科學). 2003(03)
本文編號：2918222
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