發(fā)布時(shí)間：2020-12-16 17:54

　　研究目的:構(gòu)建流感/禽流感及禽流感/流感血凝素融合蛋白的原核表達(dá)載體,并在E.coli JM109中表達(dá),檢測融合蛋白的生物學(xué)活性。實(shí)驗(yàn)方法:從H1N1流感病毒接種10日齡的雞胚尿囊液中以RT-PCR法獲得特異性H1基因,以H1基因?yàn)槟０褰?jīng)PCR反應(yīng)獲得特異性H1A1及H1A2基因,再從質(zhì)粒pMD18-T/H5中經(jīng)PCR法獲得特異性H5A1及H5A2基因,經(jīng)重疊延伸PCR（SOE PCR）法連接,構(gòu)建重組基因H1A1H5A2及H5A1H1A2,分別以T4 DNA連接酶連接7ZTS原核表達(dá)載體構(gòu)建重組質(zhì)粒7ZTS/H1A1H5A2及7ZTS/H5A1H1A2。將二者轉(zhuǎn)染E.coli JM109感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)IPTG于37℃下誘導(dǎo)4小時(shí),經(jīng)超聲波破碎收獲包涵體蛋白。以12%SDS-PAGE電泳及Western blot實(shí)驗(yàn)檢測,分析表達(dá)產(chǎn)物的抗原性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:測序結(jié)果顯示獲得的H1A1 H5A2、H5A1H1A2基因序列正確,重組載體7ZTS/H1A1H5A2及7ZTS/H5A1H1A2酶切鑒定結(jié)果正確,12%SDS-PAGE電泳顯示蛋白表達(dá)正確,Western blot檢測中重組流感/禽... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
第一章 緒論
    1. 流感血凝素蛋白簡介
    2. 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)
    3. 目標(biāo)蛋白的表達(dá)形式和表達(dá)部位
    4. 7ZTS 表達(dá)載體簡介
    5.重疊延伸 PCR（SOE PCR）技術(shù)
    6. 表達(dá)融合蛋白的意義
    7. 本課題的設(shè)計(jì)
第二章 儀器和材料
    1. 流感病毒血凝素蛋白全長基因（H1 基因）
    2. 禽流感病毒血凝素蛋白全長基因（H5 基因）
    3. 引物
    4.載體與菌株
    5. 主要分子生物學(xué)試劑
    6. 主要生化及化學(xué)試劑
    7. 試劑盒
    8.主要儀器和設(shè)備
第三章 方法
    1. 人流感/禽流感血凝素融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)
    2 禽流感/人流感血凝素融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)
第四章 結(jié)果
    1.人流感/禽流感血凝素重組蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)
    2 禽流感/人流感血凝素融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)
第五章 討論
    1.大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)
    2.本實(shí)驗(yàn) PCR 及 SOE PCR 法獲取目的基因的過程中的一些問題
    3.融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)部位和表達(dá)形式
    4.血凝素蛋白抗原決定簇的位置
    5.表達(dá)條件優(yōu)化
    6. 本實(shí)驗(yàn)對(duì)于研究人/禽流感基因工程亞單位雜合疫苗的重要意義
    7. 本實(shí)驗(yàn)表達(dá)之融合蛋白的其他應(yīng)用價(jià)值
下一步工作
展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
中文摘要
Abstract
致謝
導(dǎo)師簡介
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[6]禽流感疫苗研究進(jìn)展[J]. 霍惠玲,王增利,高豐,米振杰.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2005(05)
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[10]禽流感病毒H5HA、H7HA基因共表達(dá)核酸疫苗質(zhì)粒的構(gòu)建及其在體外的表達(dá)[J]. 張芳芳,劉光亮,姜永萍,陳化蘭,陳懷濤.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2004(04)



本文編號(hào)：2920543