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腺相關(guān)病毒增強(qiáng)型小鼠白介素10質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)

發(fā)布時(shí)間:2024-06-29 14:33
  一目的: 1 構(gòu)建腺相關(guān)病毒增強(qiáng)型小鼠白介素10質(zhì)粒(pORF-ITR-mIL-10)并進(jìn)一步證實(shí)ITR能增加mIL-10在心肌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá),為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供必要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 二方法: 1 利用分子克隆技術(shù),將AAV中的ITR插在pORF5-mIL-10質(zhì)粒啟動(dòng)子的上游,構(gòu)建pORF-ITR-mIL-10質(zhì)粒。 2 在陽(yáng)離子脂質(zhì)體Lipofectin介導(dǎo)下,pORF5-mIL-10和pORF-ITRS-mIL-10分別轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞。 3 Trizol一步法提取總RNA,RT-PCR檢測(cè)mIL-10的mRNA。 4 ELISA檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞上清中mIL-10的表達(dá)。 三結(jié)果: 1 用雙酶切方法證實(shí)成功構(gòu)建pORF-ITR-mIL-10。 2 分別在轉(zhuǎn)染24h、48h、72h、96h、120h后,用RT-PCR在心肌細(xì)胞中檢測(cè)到相應(yīng)的目的條帶。 3 ELISA檢測(cè)顯示pORF-ITR-mIL-10的表達(dá)量明顯高于pORF5-mIL-10。 四結(jié)論: 1 在陽(yáng)離子脂質(zhì)體Lipofectin介導(dǎo)...

【文章頁(yè)數(shù)】:33 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
一、 論文摘要
    前言
    中文摘要
    英文摘要
二、 論文
    材料
    腺相關(guān)病毒增強(qiáng)型mIL-10質(zhì)粒的構(gòu)建
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
三、 綜述
    正文
    參考文獻(xiàn)
四、 致謝



本文編號(hào):3997697

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