發(fā)布時(shí)間：2018-03-10 14:01

  本文選題：鵝細(xì)小病毒　切入點(diǎn)：分離鑒定　出處：《中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：鵝細(xì)小病毒病是由鵝細(xì)小病毒(Goose parvovirus,GPV)引起的,該病是一種主要侵害4~20日齡雛鵝和雛番鴨的急性或亞急性敗血癥,具有高度傳染性,以發(fā)生滲出性腸炎為主要特征。該病傳播快,病死率高,5日齡以內(nèi)雛鵝感染,死亡率高達(dá)95%以上。鵝細(xì)小病毒病的傳播和流行對(duì)我國(guó)養(yǎng)鵝業(yè)造成了重大經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重制約著我國(guó)養(yǎng)鵝業(yè)的健康發(fā)展。本研究從小鵝瘟疑似病例中分離到一病原,經(jīng)過PCR鑒定、IFA鑒定和動(dòng)物回歸試驗(yàn),確定該病原為GPV并將其命名為GPV YG株。通過將GPV YG株在鵝胚成纖維細(xì)胞(GEF)和鴨胚成纖維細(xì)胞(DEF)上進(jìn)行交替?zhèn)鞔�培養(yǎng),當(dāng)病毒在GEF上傳至第12代時(shí),開始出現(xiàn)細(xì)胞病變;IFA檢測(cè)發(fā)現(xiàn),隨著病毒感染時(shí)間的延長(zhǎng),感染細(xì)胞數(shù)量呈現(xiàn)先增加隨后減少的變化趨勢(shì),感染后第96 h陽性細(xì)胞數(shù)量最多;病毒的滴度隨著傳代次數(shù)的增加而逐漸升高,當(dāng)病毒在GEF上傳至第50代時(shí),GPV YG株細(xì)胞適應(yīng)毒毒價(jià)為106.5 TCID50/m L。雛鵝致病性試驗(yàn)結(jié)果顯示,第50代病毒毒力明顯減弱,表現(xiàn)為感染雛鵝死亡和發(fā)病率降低,且死亡雛鵝無鵝細(xì)小病毒病的特征性病變及臨床表現(xiàn)。對(duì)接種了第50代病毒的雛鵝糞便進(jìn)行PCR檢測(cè)后發(fā)現(xiàn),接種后的第3天至第21天,雛鵝所排糞便內(nèi)均能檢測(cè)到GPV抗原,這表明GPV傳代致弱毒株能夠在雛鵝體內(nèi)持續(xù)增殖,并向外界環(huán)境排毒。易感雛鵝在接種GPV傳代致弱毒株后,體內(nèi)開始產(chǎn)生中和抗體,并且抗體滴度隨著時(shí)間的增長(zhǎng)而逐漸升高,在接種后第4周,中和抗體滴度可達(dá)10-2.55/0.2m L,之后抗體滴度有所下降。對(duì)F0代和F50代病毒的全基因組序列和推導(dǎo)氨基酸序列進(jìn)行比對(duì),結(jié)果顯示與F0代相比,F50代病毒共有89個(gè)核苷酸突變位點(diǎn),主要位于VP基因;以及19個(gè)氨基酸突變位點(diǎn),其中5個(gè)位于NS蛋白,14個(gè)位于VP蛋白。在F50代基因組5’端和3’端非編碼區(qū),分別有一段堿基的插入,大小都為9nt。此外,為建立一種快速、簡(jiǎn)便、靈敏的GPV膠體金免疫層析檢測(cè)方法,本研究采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金,將其標(biāo)記于純化的抗GPV VP3蛋白的單克隆抗體(m Ab)2D5,在硝酸纖維素膜上噴涂純化的抗GPV VP3蛋白m Ab 4A8和羊抗鼠Ig G抗體,分別作為檢測(cè)線和質(zhì)控線,制成檢測(cè)GPV的膠體金免疫層析試紙條。結(jié)果表明,所制備的GPV檢測(cè)試紙條的最低檢測(cè)限度為104.15TCID50/m L;用制備的試紙條檢測(cè)GPV為陽性,而檢測(cè)其他主要水禽病病原均為陰性;同一批次和不同批次的試紙條對(duì)GPV陽性樣品的檢測(cè)結(jié)果均無差異;使用試紙條對(duì)已知的80份糞便樣品進(jìn)行檢測(cè),陽性及陰性樣品的檢測(cè)符合率分別為96.49%和100%。本研究成功分離到了一株GPV,并將其命名為YG株。通過將YG株在GEF與DEF上交替?zhèn)鞔�培養(yǎng),得到了毒力明顯減弱的YG株細(xì)胞適應(yīng)毒,這為今后GPV弱毒苗的研制奠定了基礎(chǔ)。此外,本研究所制備的GPV膠體金免疫層析檢測(cè)試紙條具有良好的特異性、敏感性和重復(fù)性,為“小鵝瘟”的快速診斷提供了新的方法。
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【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.65

【引證文獻(xiàn)】

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉岳龍;孫志;李清;孫謙;秦愛建;金文杰;邵紅霞;;小鵝瘟強(qiáng)毒CZ株的細(xì)胞適應(yīng)毒的培育和部分生物學(xué)特性的測(cè)定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

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本文編號(hào)：1593649