發(fā)布時間：2018-03-12 07:14

  本文選題：羊口瘡病毒　切入點：ORFV　出處：《生物技術(shù)通報》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：克隆表達羊口瘡病毒蛋白ORFV035,并制備其多克隆抗體,為后續(xù)對病毒復(fù)制、裝配、形態(tài)發(fā)生和成熟過程的研究奠定基礎(chǔ)。PCR擴增羊口瘡病毒ORFV035基因,將其與質(zhì)粒pET-30a(+)經(jīng)Bam HⅠ和HindⅢ雙酶切后連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET30a-035。重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切和測序鑒定,轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌BL21,IPTG誘導(dǎo)表達,SDS-PAGE鑒定蛋白表達情況。表達產(chǎn)物進行超聲破碎和Ni柱純化,純化后目的蛋白免疫小鼠,制備多克隆抗體并對其進行鑒定。成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET30a-035,在大腸桿菌BL21中以包涵體形式高效表達。包涵體洗滌、溶解后進行Ni柱純化,得到純度較高的ORFV035-his融合蛋白。以純化蛋白免疫小鼠獲得多克隆抗體。Western blot檢測顯示該多抗可以識別天然ORFV035蛋白。成功誘導(dǎo)表達、純化ORFV035蛋白并制備ORFV035多克隆抗體。
[Abstract]:Sheep mouth sore virus protein ORFV035 was cloned and expressed, and its polyclonal antibody was prepared, which laid a foundation for further study on virus replication, assembly, morphogenesis and maturation. The recombinant plasmid pET30a-035was ligated with pET-30a () by Bam H 鈪，

本文編號：1600529