發(fā)布時間：2020-12-02 16:03

　　睪丸支持細(xì)胞（Sertoli cells,SCs）是生精上皮中唯一的體細(xì)胞,主要為生精細(xì)胞提供支持和營養(yǎng),同時還具有調(diào)控精子發(fā)生的功能。SCs的分離培養(yǎng)對體外探討精子發(fā)生機理至關(guān)重要。目前,人和小鼠SCs的相關(guān)研究已取得顯著進(jìn)展,有關(guān)豬、牛SCs的分離培養(yǎng)、緊密連接形成及發(fā)育、分化相關(guān)功能基因克隆及分析等研究已有報道。但因牛新鮮睪丸取材不便、價格昂貴及取材時間不確定等因素,使牛SCs相關(guān)研究進(jìn)展緩慢。為解決以上問題,本研究在前期基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討了從冷凍保存的新生牛睪丸組織中分離純化SCs的可行性。將凍存的1日齡牛睪丸組織復(fù)蘇,進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢查和SCs的分離培養(yǎng)。石蠟切片蘇木精-伊紅（HE）染色顯示,曲細(xì)精索及睪丸間質(zhì)保存完好。二步酶消化結(jié)果顯示,生精上皮解離良好。利用差異貼壁法將原代細(xì)胞純化后擴大培養(yǎng),絕大多數(shù)細(xì)胞呈不規(guī)則多邊形,3 d即可生長至匯合。RT-PCR分析顯示,貼壁細(xì)胞表達(dá)SCs陽性分子標(biāo)記（Gdnf、Abp）而不表達(dá)精原細(xì)胞分子標(biāo)記PLZF。免疫熒光染色顯示,貼壁細(xì)胞表達(dá)SCs的蛋白標(biāo)記GDNF和ABP。流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示,所獲細(xì)胞純度可達(dá)90%以上。上述結(jié)果表明,從凍存的... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

牛SCs表面標(biāo)記檢測牛SCs表達(dá)ABP、GDNF，且其純度分別為96.8%和99.7%

圖 2.1 四因子病毒包裝和感染A. Oct4、Sox2、Klf4、C-myc 四種慢病毒的包裝；B. Oct4、Sox2、Klf4、C-myc四種慢病毒侵染牛 SCsFigure 2.1 The packaging and infection of four factors.A. The packaging of Oct4、Sox2、Klf4、C-myc four viruses. B. The infection ofOct4、Sox2、Klf4、C-myc in bovine SCs.2.3.2 不同濃度絲裂霉素處理 MEF 的增殖曲線選用 8 μg/mL、20 μg/mL 的絲裂霉素 C 來處理 MEF 6 h，換新鮮培養(yǎng)基后，第 4 天飼養(yǎng)層細(xì)胞的形態(tài)（圖 2.2A），用 CCK-8 處理飼養(yǎng)層細(xì)胞，并對其增殖曲線進(jìn)行分析（圖 2.2 B），由此發(fā)現(xiàn) 8 μg/mL 的絲裂霉素 C 較為合適，以不用絲裂霉素 C 處理的 MEF 為對照組。

圖 2.2 絲裂霉素 C 的濃度篩選。不同濃度的絲裂霉素 C 處理 MEF 第 4 天的細(xì)胞形態(tài)觀察 B. 不同濃度裂霉素 C 對 MEF 增殖曲線的影響。Fig 2.2 The concentration screening of mitomycin-C.A. Observation of the cell morphology of MEF treated with mitomycin-C adifferent concentrations on day 4. B. The effects of different concentrations mitomycin-C on the proliferation curve of MEF.3 SCs 向 iPSCs 誘導(dǎo)過程中形態(tài)學(xué)的變化將慢病毒感染的牛 SCs 消化并接種于飼養(yǎng)層上，更換誘導(dǎo)培養(yǎng)基，5 SCs 回縮逐漸變?yōu)槎噙呅�，更加類似于上皮樣�?xì)胞形態(tài)，逐漸聚集為

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞技術(shù)的研究進(jìn)展及應(yīng)用前景[J]. 閆益波,張艷麗,齊巍巍,萬永杰,樊懿萱,王鋒.  遺傳. 2011(04)



本文編號：2895542