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RhD-缺失型母兒血型不合新生兒溶血病的臨床和實驗研究

發(fā)布時間:2020-11-21 22:27
   研究目的RhD--缺失型是Rh血型系統(tǒng)一種極為罕見的變異體,血清學(xué)特征表現(xiàn)為紅細(xì)胞上RhC/c、E/e抗原的完全缺乏和(或)D抗原的過量表達。目前RhD--缺失型的分子生物學(xué)機制尚不明確,國外的研究發(fā)現(xiàn)了兩種情況:一種是RHCE基因完整但無表達活性,另一種是RHCE基因部分缺失。前者考慮是由于mRNA的轉(zhuǎn)錄活性降低所致,后者考慮是外顯子部分缺失和基因重組兩種機制。國內(nèi)還沒有相關(guān)報道。RhD--缺失型個體極易由輸血或妊娠免疫,產(chǎn)生高效價的抗C/c、E/e的聯(lián)合抗體(即抗Hro抗體),這種抗體除了不與RhD--、Rhnull、Rhmod細(xì)胞反應(yīng)外,與一般紅細(xì)胞都發(fā)生強烈的凝集反應(yīng)。該抗體可以通過胎盤進入胎兒體內(nèi)致敏胎兒紅細(xì)胞,引起嚴(yán)重的胎兒或新生兒溶血病。本研究發(fā)現(xiàn)了兩例RhD--缺失型個體,均為女性,都發(fā)生了嚴(yán)重的胎兒新生兒溶血病。本研究通過對兩例RhD--缺失型胎兒新生兒溶血病的臨床特征和治療措施進行系統(tǒng)研究,探討母體意外抗體效價動態(tài)監(jiān)測和宮內(nèi)B超的臨床意義以及采用最小不相容血液對RhD--缺失型HDN換血治療的臨床應(yīng)用價值。由于同一種血型表型,可以對應(yīng)多種基因型,而且在不同種族和同一種族的不同群體中,同一種表型所對應(yīng)的基因型也不盡相同。目前有關(guān)血型基因結(jié)構(gòu)的資料,大多數(shù)來源于白人,不符合我國的種族群體特點。中國人群民族多,數(shù)量大,遺傳雜合性大。本研究通過對兩例確證為RhD--缺失型個體的血清學(xué)特征、基因結(jié)構(gòu)和表達的深入研究,明確中國部分漢族人群的RhD--缺失型個體可能存在的新的發(fā)生機制。這對搞清中華民族的血型基因結(jié)構(gòu),廣泛開展血型基因分型技術(shù)是十分必要的,還可能發(fā)現(xiàn)新的RH等位基因。 研究方法(1)采用經(jīng)典的血細(xì)胞凝集法,對兩位RhD--缺失型個體進行ABO和Rh血型鑒定、RhD--缺失型確認(rèn)試驗、直接和間接抗人球蛋白試驗、意外抗體篩選與鑒定試驗、母體意外抗體效價動態(tài)監(jiān)測、胎兒和新生兒溶血病全套檢測等,并對兩個家系所有成員進行ABO和Rh血型調(diào)查。(2)對一例發(fā)生RhD--缺失型母兒血型不合HDN的新生兒進行常規(guī)內(nèi)科治療,監(jiān)測溶血指標(biāo)變化。在無法找到相合血源的情況下,采用最小不相容的血液為該新生兒換血。對另一例RhD--缺失型母兒血型不合HDFN,通過開展自體血儲備、孕期監(jiān)測、孕母服用中藥治療、孕母淋巴血漿置換、胎兒宮內(nèi)輸血、產(chǎn)后新生兒換血等綜合救治方案進行干預(yù)和治療。(3)采用序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSP)的方法,對兩例RhD--缺失型個體以及家系成員RHD與RHCE基因多個外顯子與內(nèi)含子進行Rh血型基因定型;對兩例RhD--缺失型個體采用HindⅢ和SphⅠ內(nèi)切酶酶切血液基因組DNA并與特異性探針進行Southern blot,并采用PCR-SSP方法擴增兩個體RHCE基因多個外顯子和內(nèi)含子,采用RT-PCR方法檢測兩例RhD--缺失型個體是否有RHCE剪接體轉(zhuǎn)錄。 研究結(jié)果(1)兩個體紅細(xì)胞上RhC/c、E/e抗原完全缺乏,血清中均存在抗Hro抗體。兩個體分別來自近親和非近親婚配的家系,親代成員Rh表型均為純合子,親代成員中沒有再次發(fā)現(xiàn)RhD--缺失型個體。(2)例1 RhD--缺失型個體的新生兒嚴(yán)重溶血,內(nèi)科治療無效,用最小不相容換血法為新生兒換血獲得成功,及時挽救了患兒生命,經(jīng)4年隨訪,患兒生長發(fā)育良好。例2 RhD--缺失型個體孕中期監(jiān)測發(fā)現(xiàn)抗Hro抗體效價增高,經(jīng)孕期綜合治療改善了胎兒宮內(nèi)的貧血狀況,有效延長了孕期。于孕32~(+2)周剖宮產(chǎn)下一女嬰,雖經(jīng)換血等積極治療,患兒始終無自主呼吸,并存在腸道畸形,家屬放棄治療。(3)Southernblot發(fā)現(xiàn)兩例RhD--缺失型個體RHCE基因均存在exon1,但存在中間段缺失(exon4-7缺失),進一步采用PCR-SSP方法特異性擴增RHCE基因多個外顯子及內(nèi)含子,證實RhD--缺失型個體RHCE intro4、exon4-7基因片段丟失,但exon3、exon9及3′端基因序列均存在。 研究結(jié)論(1)兩個體均為RhD--缺失型血型,RhD--缺失型既可發(fā)生于近親家系,也可發(fā)生于非近親家系。(2)RhD--缺失型個體妊娠極易發(fā)生嚴(yán)重的HDFN,最小不相容換血法是治療RhD--缺失型HDN的一種有效的手段。加強孕期監(jiān)測及孕期綜合治療是預(yù)防和控制由RhD--缺失型導(dǎo)致的HDFN的重要手段。(3)中國部分漢族人群的RhD--缺失型個體的產(chǎn)生原因是RHCE基因exon4-7缺失,其截短的RHCE基因不表達相關(guān)活性產(chǎn)物,這與國外學(xué)者對白人、黑人RhD--缺失型個體發(fā)生的分子機制研究結(jié)果不同。
【學(xué)位單位】:中南大學(xué)
【學(xué)位級別】:博士
【學(xué)位年份】:2009
【中圖分類】:R722.1
【部分圖文】:

示意圖,效價,先證者,示意圖


1.2.1.4抗體效價檢測先證者l:抗一Hro抗體效價64先證者2:工gG抗A效價64,抗一Hr?贵w效價變化見圖1一3﹃琳咖州l’t剮琳14.以川協(xié)““如”,’。盆攝臉悠基‘:t皿.盆,盆.幻二之抽翻腸腸之寧加扮腸臺!勸之孕周抗體效價高峰出現(xiàn)在孕30+,天,為256。妊娠在孕31穆終止。圖1一3例2孕期杭體效價變化示意圖 1.2.1.5HDN全套先證者1的新生兒血型:0型,D祀+c一E一e+;DAT4+,放散試驗4+,放散出工gG抗一Hro抗體,游離抗一Hro抗體4+

示意圖,效價,母體,宮內(nèi)


2.2.2病例2母體淋巴血漿置換和宮內(nèi)輸血例2診斷為RhD一缺失型母兒血型不合HDFN的同時,還合并ABO血型不合HDFN。孕期綜合治療見圖2一3,母體淋巴血漿置換歷時80分鐘,輸入AB型新鮮冰凍血漿1300ml,去除1345ml,母體抗Hr。效價降到32。用母體血行胎兒宮內(nèi)輸血兩次,第一次宮內(nèi)臍靜脈輸血6ml,腹腔內(nèi)輸血2ml。第二次宮內(nèi)臍靜脈輸血3ml時,出現(xiàn)胎心減慢至60次/分

基因定型,先證者,條帶,表型


先證者1及家系成員Rh基因定型
【相似文獻】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李碧娟;RhD-缺失型母兒血型不合新生兒溶血病的臨床和實驗研究[D];中南大學(xué);2009年


相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 王巖;Ni改性體相MoS_2的HDS和HDN反應(yīng)性能研究[D];大連理工大學(xué);2011年

2 袁芬;RhD-缺失型的實驗研究及2家系調(diào)查[D];中南大學(xué);2008年



本文編號:2893693

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