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神經(jīng)源性尿路功能障礙大鼠輸尿管平滑肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與Skca表達(dá)研究

發(fā)布時(shí)間:2020-10-28 11:44
   目的:神經(jīng)源性尿路功能障礙(neurogenic urinary tract dysfunction,NUTD)是指與排尿相關(guān)神經(jīng)系統(tǒng)受到損傷,繼而出現(xiàn)的泌尿系功能障礙,其治療的目的和基本原則是保護(hù)尿路兼顧改善下尿路癥狀。然而,在長(zhǎng)期的臨床工作中發(fā)現(xiàn),下尿路功能障礙的部分患者在經(jīng)過(guò)降低膀胱儲(chǔ)尿壓力的治療后,仍然出現(xiàn)反流性上尿路損害。超微結(jié)構(gòu)改變,特別是線粒體變化在平滑肌收縮發(fā)生中扮演重要角色。小電導(dǎo)鈣激活鉀通道(small-conductance Ca2+-activated K+channels,SKca)在調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞興奮性中的作用也很關(guān)鍵。然而SKca和超微結(jié)構(gòu)在NUTD輸尿管平滑肌細(xì)胞中的變化情況尚不完全清楚,為全面掌握NUTD上尿路功能異常的機(jī)制,本研究通過(guò)對(duì)NUTD大鼠輸尿管平滑肌細(xì)胞Skca表達(dá)檢測(cè)及超微結(jié)構(gòu)變化的進(jìn)行觀察,為反流性尿路損害的早期預(yù)防提供新的方法。方法:1、建立動(dòng)物模型:選取體重200±20g的SD雌性大鼠45只,由鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,常規(guī)飼養(yǎng)20d,應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法分為實(shí)驗(yàn)組(即NUTD組)、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(即EC組)、空白對(duì)照組(即BC)組,每組15只。(1)空白對(duì)照組(BC組):不做任何處理,應(yīng)用影像尿動(dòng)力學(xué)檢查確認(rèn)其具有正常的尿路功能。(2)實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(NUTD組):于建模前12 h禁食禁水,將SD雌性大鼠按每100 g體重腹腔注射0.3ml體積分?jǐn)?shù)為10%的水合氯醛注射液,3-5 min后大鼠麻醉徹底,將大鼠固定在手術(shù)臺(tái)上,固定體位為俯臥位,手術(shù)區(qū)域定位于L1棘突,專用剃毛機(jī)剃去手術(shù)區(qū)域毛發(fā),消毒后鋪無(wú)菌洞巾。沿背部正中縱行切開(kāi)皮膚,切口長(zhǎng)約1.5cm,按層次分離皮下組織、淺筋膜、深筋膜、肌肉,暴露并剪去棘上韌帶,用血管鉗咬去L1棘突,暴露L1節(jié)段脊髓后完全離斷該段脊髓,并搗毀其以下節(jié)段的脊髓。后用生理鹽水沖洗傷口,填充明膠海綿,止血。局部涂抹青霉素以預(yù)防感染。后逐層關(guān)閉手術(shù)區(qū)域,縫合包扎。術(shù)后給予輔助排尿排便,并給予預(yù)防壓瘡措施。術(shù)后1周對(duì)大鼠進(jìn)行影像尿動(dòng)力學(xué)檢查,以存在逼尿肌無(wú)收縮(ACD),無(wú)膀胱輸尿管反流,為動(dòng)物模型建立標(biāo)準(zhǔn)。(3)實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(EC組):只咬除L1棘突,未破壞脊髓。術(shù)后1周行影像尿動(dòng)力學(xué)評(píng)估證實(shí)無(wú)明顯膀胱尿道功能障礙。2、模型建立后6周三組大鼠均行輸尿管功能評(píng)估、形態(tài)學(xué)觀察和標(biāo)本的制作。3、采用熒光定量PCR測(cè)定、蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)對(duì)輸尿管組織中SKca2、SKca3m RNA和蛋白進(jìn)行測(cè)定4、采用電鏡技術(shù)對(duì)輸尿管超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察結(jié)果:1、大鼠動(dòng)物模型建立后6周NUTD組大鼠膀胱均表現(xiàn)為無(wú)逼尿肌過(guò)度活動(dòng)、膀胱逼尿肌無(wú)收縮。2、30min內(nèi)NUTD組產(chǎn)生尿量為(0.90±0.17)ml,EC組為(0.86±0.18)ml,BC組為(0.94±0.15)ml三組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但NUTD組輸尿管蠕動(dòng)頻率(16.23±2.35)次/5min顯著低于EC組(21.80±1.97)次/5min和BC組(20.47±2.48)次/5min,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。NUTD組USMC中SKca2和SKca3 m RNA表達(dá)相對(duì)于BC組平均分別上調(diào)4.15和4.56倍(P0.01),蛋白表達(dá)也顯著上調(diào)(P0.01)。蛋白表達(dá)也顯著上調(diào)(P0.01)。3、光鏡下三組大鼠輸尿管肌層、固有層和上皮細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯差異,未見(jiàn)充血、水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。4、電鏡下可見(jiàn)NUTD組USMC排列散亂,線粒體體積增大水腫、數(shù)目明顯大于另外兩組,線粒體嵴增粗、髓樣變,部分細(xì)胞可見(jiàn)線粒體內(nèi)膜和嵴膜的大量破壞。結(jié)論:1.神經(jīng)源性尿路障礙大鼠輸尿管存在原發(fā)性功能障礙。2.SKca2、SKca3在神經(jīng)源性尿路功能障礙大鼠輸尿管平滑肌細(xì)胞中表達(dá)水平升高,可能是引起輸尿管蠕動(dòng)功能障礙的原因之一。3.輸尿管平滑肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變可能是造成其原發(fā)性功能障礙的直接因素。
【學(xué)位單位】:鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2016
【中圖分類】:R694.5
【文章目錄】:
中文摘要
Abstract
中英文縮略詞對(duì)照表
引言
材料和方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 神經(jīng)源性尿路功能障礙及其上尿路損害的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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2 李廣然,鐘先陽(yáng);腎臟的解剖結(jié)構(gòu)和生理功能[J];新醫(yī)學(xué);2005年07期

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4 王慶偉,文建國(guó);小兒神經(jīng)源性膀胱括約肌功能障礙治療現(xiàn)狀與進(jìn)展[J];中華小兒外科雜志;2005年04期



本文編號(hào):2860044

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