發(fā)布時間：2020-10-28 12:02

　　 研究背景:長期未控制的高血壓患者腦血管對急性失血調(diào)節(jié)能力降低,其腦組織對急性缺血缺氧更加敏感。大量研究發(fā)現(xiàn)貧血與腦功能存在密切聯(lián)系,長期高血壓個體對貧血的耐受閾值尚未達成共識。急性大量失血后,立即進行容量復蘇可以維持腦灌注壓,但急性等容性血液稀釋及稀釋程度對這類個體腦是否產(chǎn)生損傷?損傷程度如何?立即糾正貧血或延遲糾正貧血是否能改善腦損傷無研究報道?自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneous Hypertension Rats,SHR)是一種理想的實驗動物。基于SHR建立等容性血液稀釋模型后,應用腦損傷(Traumatic Brain Injury,TBI)標記物對SHR進行輕～中度腦損傷的評估將闡明何種程度的急性等容性時血液稀釋會產(chǎn)生何種程度的腦損傷,并為預防和治療該類可逆性腦損傷提供基礎。研究目的:1、應用SHR建立等比例的急性、等容性、失血性血液稀釋動物模型;2、研究不同程度的急性等容性血液稀釋對高血壓大鼠認知功能的影響;3、應用TBI標記物闡述血液稀釋后早期中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損部位及程度,探討術(shù)后譫妄和認知功能障礙的病因靶點。研究方法:60只成年SHR隨機分為A組(失血0%)、B組(20%)和C組(40%)。術(shù)前進行水迷宮訓練和空間記憶的基線測試。七氟烷全身麻醉后實施左右腹股溝手術(shù)并完成股動脈和股靜脈置管,以實施體重依賴性的等比例失血(動脈端)。失血同時給予3倍失血量的晶體液輸注維持容量平衡(股靜脈)。手術(shù)結(jié)束后24小時,每組3只SHR實施安樂死,福爾馬林灌注后取腦組織,石蠟包埋后行TBI標記物(膠質(zhì)細胞酸性蛋白GFAP,淀粉樣前蛋白APP,iBA1和神經(jīng)纖維絲蛋白NF)的免疫組化分析;每組另取3只SHR大腦,分離額顳葉皮質(zhì)及海馬區(qū),比較低氧誘導因子(HIF-α)和神經(jīng)元損傷標記物神經(jīng)元性一氧化氮合酶(n-NOS)。各組其余14只SHR繼續(xù)完成空間記憶和工作記憶測試。結(jié)果:三組SHR術(shù)前和術(shù)后的血紅蛋白(HB)和平均動脈壓(MAP)的變化符合實驗設計的等比例失血梯度的血液稀釋模型,術(shù)后各組HB與設計的急性等容性失血量成線性關(guān)系,(p0.000)。三組間平均逃逸潛伏期(Escape lantent,EL)術(shù)前無統(tǒng)計學差異,術(shù)后隨著失血程度增加,平均EL呈上升趨勢,但各組間無統(tǒng)計學意義(p=0.233);C組EL較術(shù)前明顯增加(26.689±8.65 vs 18.13±10.06,F=6.164,p=0.015)。工作記憶:C組大鼠在第一次尋找平臺所需要的次數(shù)顯著高于A組大鼠(p=0.05,95%CI-6.552～0.001),而探針實驗陰性。失血后,C組HIF-α較A組明顯上調(diào)(皮質(zhì):p=0.023;海馬:p=0.001);在海馬區(qū),B組較A組也存在明顯上調(diào)(p=0.012)。在海馬和皮質(zhì),C組和B組n-NOS較A組顯著增高(C組:皮質(zhì)P= 0.025,海馬P0.001;B組皮質(zhì):p=0.018,海馬p=0.001)。腦損傷免疫組化:尼氏染色顯示C組海馬區(qū)部分胞核縮小且胞體不規(guī)則,可能存在神經(jīng)元損傷;GFAP隨著失血程度的增加,表達GFAP細胞的數(shù)量和強度均顯著增加。APP在三組中表達差異不明顯;IBA1在A組無表達,在B組和C組少量表達;NF在A組和B組中無表達,C組出現(xiàn)少量表達。結(jié)論:本研究成功地建立了等比例的急性等容性血液稀釋的動物模型。該模型的行為學研究發(fā)現(xiàn)大量失血(40%全身血量)對空間參考記憶有顯著損害且失血后早期學習能力受損,對長期學習能力和工作記憶無影響。20%和40%失血后24小時,高血壓大鼠的腦皮質(zhì)和海馬區(qū)出現(xiàn)失血程度相關(guān)的低氧保護反應;嚴重失血后24小時神經(jīng)元形態(tài)發(fā)生變化,但神經(jīng)元數(shù)目無明顯變化。隨著血液稀釋程度的增加,成年高血壓大鼠腦皮質(zhì)膠質(zhì)細胞GFAP表達顯著增加伴有小膠質(zhì)細胞IBA1表達輕微增加,神經(jīng)軸突蛋白NF在B組和C組偶有表達。代表阿爾海默茲病的淀粉樣變性蛋白APP表達在各組無差異。表明急性血液稀釋后神經(jīng)功能的改變可能通過星型膠質(zhì)細胞廣泛受損、部分小膠質(zhì)細胞介導炎癥反應、少量的神經(jīng)元軸突損傷和低氧導致酶類異常表達等綜合因素誘發(fā)。綜上所述,成年長期高血壓大鼠在容量復蘇后,急性失血(40%)較少量失血(20%)和無失血出現(xiàn)低氧性分子上調(diào)保護機制,其中海馬區(qū)域最明顯;嚴重失血早期,膠質(zhì)細胞骨架蛋白、膠質(zhì)細胞內(nèi)蛋白合成、神經(jīng)元胞漿內(nèi)蛋白表達和神經(jīng)軸索出現(xiàn)損傷,從而影響短期內(nèi)的空間參考記憶,和早期學習能力,但不影響遠期學習能力和工作記憶且發(fā)病機制不同于阿爾海默茲病公認的淀粉樣變性途徑。
【學位單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R614
【部分圖文】：

博士學位論文??腦損傷的長期隨訪，以期明確損傷后大腦發(fā)生的可能改變。如果在急診科能同??時進行ＣＴ和血清腦損傷標記物的檢測，如圖１－１所示，可以對腦損傷標記物的??檢驗效能進行評估。最終的理想結(jié)果是，能夠通過簡單的血清學腦損傷標記物??檢測，為輕微？中度腦損傷患者提供篩查的依據(jù)，并指導初期處理，如留院觀??察或返回社區(qū)隨訪等。此外，血清腦損傷標記物還可以評估患者預后以及治療??的恢復程度。輕度腦損傷患者尤其適用，可以反復進行病情評估而減少多次ＣＴ??檢查和減少住院觀察時間。如在兒童的ＴＢＩ研究中發(fā)現(xiàn)血清Ｓ１００ｐ，ＮＳＥ和ＩＬ－６，??在輕微腦損傷１周后下降，在入院時Ｓ１?ＯＯｐ和ＮＳＥ的水平與最初ＧＣＳ評分相關(guān)，??而１周后這些血漿標記物的水平則與６個月后的ＧＣＳ評分相關(guān)，因此Ｓ１００Ｐ和??ＮＳＥ可用于兒童ＴＢＩ損害和臨床預后的評估［１１］。新型科技己將檢驗所需要的時??間壓縮至抽血后３０ｍｉｎ以內(nèi)［１２

?第三章研究背景、研究目的、實驗設計、實驗資料和方法???方法或成分輸血。本研宄的目標是認知功能的改變，因此麻醉相關(guān)的因素要盡??可能排除。Ａ組代表經(jīng)過麻醉和手術(shù)但并未出現(xiàn)失血的高血壓大鼠相關(guān)改變；Ｂ??組和Ｃ組則分別代表不需要輸血處理和需要輸血處理的高血壓大鼠在失血后認??知能力和腦損傷程度。對于臨床實際情況下，高血壓患者在行可能出血的大型??手術(shù)是否要及時糾正貧血有指導意義。??

組和Ｃ組的ＳＨＲ手術(shù)前后的ＭＡＰ和血紅蛋白濃度差異顯著（ｐ＜０．０００），三組??ＨＢ?和變化率均值分別為?１５０ｇ／ｄＬ，１．７％?（Ａ?組?０％），１１８．８ｇ／ｄＬ，２３．８％（Ｂ?組?２０％）??和９３．８ｇ／ｄＬ，３８．１％（Ｃ組４０％），見圖４－１；圖４－３顯示各組ＳＨＲ血紅蛋白濃度變??化值的散點圖，結(jié)果顯示血紅蛋白濃度與設計的急性等容性失血量成線性關(guān)系，??各組間變化率接近實驗設計的分組模型。圖４－２和圖４－４分別顯示三組ＳＨＲ的??ＭＡＰ及ＭＡＰ變化率在術(shù)前和術(shù)后的對比，三組術(shù)后ＭＡＰ均較術(shù)前出現(xiàn)明顯下??降，而相應的變化率見表４－１。其中Ａ組ＭＡＰ下降的原因認為與２小時的麻醉??有關(guān)，因此在Ｂ組和Ｃ組根據(jù)Ａ組校正后（排除麻醉因素），三組受失血和液??體復蘇對ＭＡＰ的變化率相對應為：０％，０．３％和８．７％，遠低于血紅蛋白的下降??率。說明等容性液體復蘇成功，該動物模型符合實驗預期。無論術(shù)前還是術(shù)后，??三組ＳＨＲ間的ＭＡＰ差異無顯著性，而在每組ＳＨＲ中術(shù)前和術(shù)后ＭＡＰ差異顯??著
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本文編號：2860065