發(fā)布時間：2020-12-05 20:36

　　研究目的硫酸軟骨素（chondroitin sulfate, CS）是一類硫酸化的糖胺聚糖,存在于細胞表面和哺乳動物的細胞外基質中,主要分布于軟骨、骨、肌腱、神經組織和血管壁中。CS的基本結構是由D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖以1,3糖苷鍵連接形成的二糖,二糖之間以β-1,4糖苷鍵連接而成。CS具有抗炎、免疫調節(jié)、心腦血管保護、神經保護、抗氧化、細胞黏附調節(jié)等多種藥理生理學活性與功能,且長期服用毒副作用小或無毒副作用。在歐洲、美國、東南亞、澳大利亞等國家,CS主要作為膳食補充劑或藥品,用于心腦血管疾病、骨關節(jié)炎等疾病的預防與治療。但是,由于其分子量大、親水基團多、脂溶性差,體內吸收不完全,口服生物利用度低；在CS治療心腦血管疾病的研究中,其降脂、抗動脈粥樣硬化（AS）的療效和量效關系以及其抑制斑塊性的分子機制都尚不明確。為了解決這些問題,本研究擬對CS結構進行修飾改造,采用降低分子量、增加親脂基團、構建兩親性納米粒子等方法來改善其口服吸收效果,然后通過整體動物法篩選出腸道吸收效果好的CS衍生物,并采用Caco-2細胞模型對其促腸道吸收作用機制進行探討；構建ApoE-/-小鼠AS... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：160 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號說明
第一章 前言
    1. 硫酸軟骨素概述
        1.1 CS在治療炎癥疾病方面的研究應用
        1.2 CS在抗氧化方面的應用
        1.3 CS在免疫調節(jié)方面的研究應用
        1.4 CS在治療心腦血管疾病方面的研究應用
    2. 硫酸軟骨素存在的問題及改進方法
        2.1 多糖類藥物口服給藥運載體系的構建
        2.2 多糖類藥物化學結構改造
    3. 兩親性多糖口服給藥系統(tǒng)的研究現(xiàn)狀
    4 課題的提出和研究思路
第二章 兩親性α-亞麻酸-低分子量硫酸軟骨素的合成及性能表征
    1 實驗材料
        1.1 試劑與材料
        1.2 儀器設備
        1.3 細胞
        1.4 溶液配制
    2 實驗方法
        2.1 α-LNA-LMCS的制備
        2.2 α-LNA-LMCS納米膠束的制備
        2.3 紅外光譜（FT-IR）表征
1HNMR）">        2.4 核磁共振氫譜表征（¹HNMR）
        2.5 熱分析表征（TGA/DSC）
        2.6 粒徑分布和Zeta電勢測定
        2.7 α-LNA-LMCS納米膠束表面形態(tài)觀察
        2.8 臨界聚集濃度的測定
        2.9 納米膠束的Caco-2細胞及HT29細胞毒性試驗
    3 實驗結果
        3.1 CS的純化
        3.2 α-LNA-LMCS的制備
        3.3 α-LNA取代度（DS）的測定
        3.4 熱差-熱重分析（TGA/DSC）
        3.5 α-LNA-LMCS膠束的粒徑和Zeta電位
        3.6 α-LNA-LMCS膠束的形態(tài)觀察
        3.7 α-LNA-LMCS膠束的臨界膠束濃度（CMC）
        3.8 CS及其衍生物的Caco-2細胞及HT29細胞毒性試驗
    4 討論
    5 結論
第三章 大鼠血漿中硫酸軟骨素含量測定方法的建立
    1 實驗材料
        1.1 試劑與材料
        1.2 儀器設備
        1.3 實驗動物
        1.4 溶液配制
    2 實驗方法
        2.1 標準曲線的繪制
        2.2 DMMB法測定血漿中CS的含量
        2.3 精密度實驗
        2.4 回收率實驗
        2.5 提取回收率實驗
        2.6 LMCS及α-LNA-LMCS提取回收率實驗
    3 實驗結果
        3.1 標準曲線的繪制
        3.2 精密度
        3.3 回收率
        3.4 提取回收率
        3.5 LMCS及α-LNA-LMCS的提取回收率
    4 討論
    5 結論
第四章 α-LNA-LMCS腸道吸收效果及作用機制研究
    1 實驗材料
        1.1 試劑與材料
        1.2 儀器設備
        1.3 實驗動物及細胞
        1.4 溶液配制
    2 實驗方法
        2.1 CS及其衍生物的大鼠體內藥物動力學研究
        2.2 CS及其衍生物在Caco-2細胞模型上的攝取、轉運及其機制探討
        2.3 CS及其衍生物對Caco-2單層細胞膜電阻的影響
        2.4 α-LNA-LMCS跨膜轉運機制研究
    3 實驗結果
        3.1 CS及其衍生物的大鼠體內藥物動力學研究
        3.2 CS及其衍生物的跨膜轉運實驗
        3.3 CS及其衍生物對Caco-2細胞模型跨膜電阻TEER的影響
        3.4 α-LNA-LMCS跨膜轉運機制研究
    4 討論
    5 結論
-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊形成的實驗研究">第五章 LNA-LMCS2抑制ApoE^-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊形成的實驗研究
    1 實驗材料
        1.1 試劑與材料
        1.2 儀器設備
        1.3 實驗動物
        1.4 溶液配制
    2 實驗方法
        2.1 實驗動物的飼養(yǎng)、分組以及標本的留取
        2.2 血脂水平的檢測
        2.3 ELISA法測定血漿中TNF-α、CRP、IL-6水平
        2.4 real-time PCR步驟
        2.5 主動脈表面AS病變大體油紅O染色
        2.6 主動脈根部AS病灶分析
-/-小鼠主動脈ERK1/2、p-ERK1/2、t-JNK、p-JNK、NF-κB、p-NF-κB、VCAM-1、MCP-1和ICAM-1的表達">        2.7 Western blot測定ApoE^-/-小鼠主動脈ERK1/2、p-ERK1/2、t-JNK、p-JNK、NF-κB、p-NF-κB、VCAM-1、MCP-1和ICAM-1的表達
    3 實驗結果
        3.1 體重及血液生化指標檢測
        3.3 AS病變嚴重程度分析
        3.4 熒光定量PCR技術分析各組小鼠主動脈炎性因子mRNA的表達變化
        3.5 Western blot法分析各組小鼠主動脈炎癥相關蛋白表達的變化
    4 討論
    5 結論
總結與展望
    1. 全文總結
    2. 創(chuàng)新點
    3. 論文的不足之處
    4. 展望
參考文獻
致謝
博士期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：2900053