發(fā)布時間：2018-09-09 08:56

【摘要】：目的:利用順鉑經(jīng)腎臟排泄的特性,建立雞胚胎腎臟損傷模型,將胚胎時期腎臟的發(fā)育與骨骼系統(tǒng)發(fā)育之間聯(lián)系起來進行分析,以雞胚為實驗?zāi)Ｐ统醪疥U述胚胎時期腎臟與骨骼系統(tǒng)發(fā)育之間的關(guān)系。方法:將新鮮種雞蛋48只,使用恒溫培養(yǎng)箱孵化4d,在蛋殼上開窗,并隨機分為4組進行空白對照和順鉑暴露:25μg/egg、50μlg/egg、100μg/egg組;繼續(xù)孵化至12d時取胚胎進行評價;雞胚發(fā)育到4.5d,分離胚胎肢芽組織,進行體外胚胎骨細胞培養(yǎng);H.E及阿利新藍-茜素紅雙染進行形態(tài)學觀察;測定鈣含量、25(OH)D及組織切片的堿性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)表達水平。結(jié)果:PBS和順鉑暴露隨暴露劑量的增加,腎的發(fā)育在順鉑暴露組與PBS組之間存在顯著性的差異,且呈現(xiàn)出劑量相關(guān)性(P0.01);Col 2al、ALP、Runx2、SOX9、MMP13、GADPH的RT-PCR結(jié)果顯示,骨發(fā)生相關(guān)基因的表達降低(P0.05);25(OH)D及組織切片的ALP和TRAP隨著順鉑暴露劑量的增加呈現(xiàn)相應(yīng)的降低(P0.05)。結(jié)論:1)利用順鉑建立雞胚胎腎損傷模型是可行的,腎損傷程度與劑量呈正相關(guān)關(guān)系;2)順鉑對雞胚胎時期的骨骼發(fā)育沒有直接影響;3)證實胚胎時期腎臟損傷影響骨骼發(fā)育,主要影響到成骨細胞和破骨細胞的功能;4)為部分先天性骨發(fā)育不良的發(fā)生提供一定的理論支持。
[Abstract]:Aim: to establish a chicken embryonic kidney injury model by using the characteristics of cisplatin excretion through the kidney, and to analyze the relationship between kidney development and skeletal system development in embryonic stage. Using chicken embryo as experimental model, the relationship between kidney and skeletal system development during embryonic period was discussed. Methods: 48 fresh chicken eggs were incubated in constant temperature incubator for 4 days. The eggs were randomly divided into 4 groups: blank control group and cisplatin exposure 25 渭 g / eggshell 50 渭 lg/egg,100 渭 g/egg group. The embryonic limb bud tissue was isolated from the chicken embryo at 4.5 days. The embryo bone cells were cultured in vitro with H. E and Alicin-alizarin red double staining for morphological observation. The expression levels of alkaline phosphatase (ALP) and tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) in tissue sections and calcium content of 25 (OH) D were determined. Results with the increase of exposure dose, there was a significant difference in renal development between cisplatin exposure group and Cisplatin exposure group (P0.01), and there was a dose-dependent (P0.01) RT-PCR result of Col _ 2AlPPA-Runx _ (2) and SOX9 MMP13GADPH, showing that there was no significant difference in renal development between cisplatin exposure group and Cisplatin exposure group (P0.01). The expression of osteogenesis related genes decreased (P0.05) and the ALP and TRAP of tissue sections decreased with the increase of cisplatin exposure dose (P0.05). Conclusion: it is feasible to establish chicken embryo kidney injury model by using cisplatin. 2) there is no direct effect of cisplatin on the bone development of chicken embryo. It mainly affects the function of osteoblasts and osteoclasts.
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692

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本文編號：2231911