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腎缺血再灌注后腦血管對血管緊張素Ⅱ反應(yīng)增強的作用機制研究

發(fā)布時間:2020-11-19 00:12
   目的:急性腎損傷(Acute kidney injury,AKI)是臨床上常見的并發(fā)癥,具有高發(fā)病率和死亡率的特點。近年來研究揭示了 AKI引發(fā)的多器官功能衰竭是其死亡率高居不下的重要原因。本研究目的是探究AKI小鼠腦血管對Ang Ⅱ反應(yīng)性變化以及成纖維細胞生長因子2(fibroblast growth factor2,FGF2)在這一過程中的作用機制。方法:本實驗用雄性C57BL/6小鼠雙腎動脈夾閉30 min后恢復(fù)血流灌注24 h構(gòu)建急性腎損傷模型,并在復(fù)灌第20 h給予成纖維細胞生長因子受體(fibroblast growth factor receptor,FGFR)1/2/3 抑制劑 BGJ398(10 mg/kg)進行灌胃處理。實驗分為三組:假手術(shù)組(Sham組)、急性腎損傷組(AKI組)以及急性腎損傷并BGJ398治療組(AKI+BGJ398組)。缺血復(fù)灌24h后,采用眼球球后取血,檢測血清肌酐和血尿素氮水平,并取腎臟組織固定切片進行蘇木精-伊紅染色后觀察腎臟病理變化。分離腦基底動脈和腦后交通動脈,運用多通道血管張力測定系統(tǒng)(DMT)檢測腦血管張力,研究腦血管對AngⅡ等血管活性藥物的反應(yīng)和張力變化。采用實時熒光定量PCR方法檢測腎、腦血管組織的FGF2、成纖維細胞生長因子結(jié)合蛋白1(FGFBP1)、成纖維細胞生長因子受體(FGFR)、血管緊張素受體(AT1R,AT2R)、胞內(nèi)信號分子PLCγ和PLCβ的mRNA水平變化。結(jié)果:本研究結(jié)果表明,AKI條件下,腦血管對Ang Ⅱ收縮性反應(yīng)特異性增強,體外孵育FGF 2和FGFBP1可以進一步增強這種反應(yīng)。分別在在體和離體條件下給予FGFR下游特異的酪氨酸激酶抑制劑能有效抑制這種腦血管Ang Ⅱ收縮反應(yīng)。AKI組與Sham組相比,其血清中FGF2mRNA水平明顯升高。Real-time PCR結(jié)果證實了腦血管中FGFR和部分胞內(nèi)信號通路PLC亞型mRNA水平升高。結(jié)論:FGF2增強AKI的小鼠腦血管AngⅡ反應(yīng)性,這種作用是通過FGFR和酪氨酸激酶通路PLC等多因素介導(dǎo)產(chǎn)生,FGF2與AngⅡ在血管收縮上的協(xié)同作用是AKI導(dǎo)致腦損傷的重要原因之一。
【學(xué)位單位】:浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位年份】:2018
【中圖分類】:R692
【文章目錄】:
致謝
摘要
ABSTRACT
縮寫、符號清單、術(shù)語表
1 前言
2 實驗材料
    2.1 主要藥品與試劑
    2.2 主要儀器和設(shè)備
3 實驗用相關(guān)溶液配制
    3.1 生理實驗相關(guān)緩沖液配制
    3.2 血管張力檢測相關(guān)試劑配制
4 實驗對象和實驗方法
    4.1 實驗動物
    4.2 實驗設(shè)計和分組
    4.3 腎功能指標
    4.4 腎臟切片蘇木精-伊紅染色
    4.5 小鼠腦血管的分離
    4.6 血管標準化及血管活性檢測
    4.7 小鼠腦血管給藥方案及張力測定
    4.8 血清FGF 2濃度檢測
    4.9 鐵灌注法分離提取小鼠腎小球球前動脈和腦動脈
    4.10 RNA提取
    4.11 反轉(zhuǎn)成CDNA
    4.12 實時定量PCR
5 統(tǒng)計學(xué)處理
6 結(jié)果
    6.1 小鼠腎缺血再灌注24 H后腎功能變化
    6.2 小鼠腎缺血再灌注24 H后腎臟組織結(jié)構(gòu)變化
    6.3 小鼠腎缺血再灌注24 H后腦基底動脈和后交通動脈對ANGⅡ,NE和ET-1的反應(yīng)性變化
    6.4 小鼠腎缺血再灌注24 H后血清中FGF 2濃度水平升高
    6.5 FGF 2和FGFBP 1增強腦血管對ANGⅡ的反應(yīng)性
    6.6 體外給予FGFR酪氨酸激酶特異性抑制劑顯著降低腦血管對ANGⅡ的反應(yīng)性
    6.7 體內(nèi)給予FGFR酪氨酸激酶特異性抑制劑BGJ398預(yù)處理后,抑制AKI小鼠腦血管對ANGⅡ的反應(yīng)性
    6.8 AT1R特異性受體拮抗劑ZD1755抑制腦血管對ANGⅡ的反應(yīng)性
    6.9 實時熒光定量PCR檢測腎臟和腦血管及組織中FGF 2,FGFBP 1,AT1R和AT2R MRNA水平變化
    6.10 實時熒光定量PCR檢測腎小球球前動脈和腦動脈FGFRs受體家族及其下游PLCB和PLCr的MRNA水平變化
7 討論
參考文獻
綜述
    參考文獻
個人概況
學(xué)習(xí)經(jīng)歷
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本文編號:2889410

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