發(fā)布時間：2020-12-03 03:12

　　研究背景:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs）是骨髓中一種非造血類的干細(xì)胞。近些年來的研究發(fā)現(xiàn),間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSCs）由于具有多向分化潛能、低免疫原性和易于體外擴(kuò)增等特點(diǎn),受到醫(yī)學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域的廣泛關(guān)注。應(yīng)用骨髓MSCs移植進(jìn)行細(xì)胞替代治療,目前已被廣泛應(yīng)用于缺血或損傷性疾病以及器官移植、抗免疫排斥反應(yīng)等研究領(lǐng)域,并取得了初步效果。因此,干細(xì)胞替代治療有望成為臨床上一種新的治療手段。目的:體外培養(yǎng)和擴(kuò)增的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對損傷胃黏膜的修復(fù)作用及其機(jī)制研究。方法:1、分別采用全骨髓貼壁法和密度梯度離心法體外培養(yǎng)和擴(kuò)增Wistar大鼠的骨髓MSCs,應(yīng)用MTT方法比較兩種方法下骨髓MSCs的自然生長曲線,流式細(xì)胞儀檢測骨髓MSCs表面標(biāo)志物,對培養(yǎng)、純化的骨髓MSCs進(jìn)行鑒定。2、以活體染料羥基熒光素乙酰乙酸（5,6-carboxyfluoresceindiacetate succinimidyl ester,CFDA SE）體外標(biāo)記骨髓MSCs,熒光顯微鏡下、488nm波長激發(fā)光... 

【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

胃，髓MSCs第2代(X200)

軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博十學(xué)位論文結(jié)果一、原代和傳代培養(yǎng)的大鼠骨髓MSCs的形態(tài)學(xué)觀察(見圖1.1一L3)(一)全骨髓貼壁法分離大鼠骨髓MSCs從大鼠抽取骨髓制成細(xì)胞懸液，剛開始接種于培養(yǎng)瓶時，夾雜大量的造血干細(xì)胞、紅細(xì)胞，由于造血干細(xì)胞、紅細(xì)胞不貼壁，因此可以根據(jù)此特性通過換液逐漸將其清除。于細(xì)胞生長48小時后可見細(xì)胞30%貼壁，貼壁的細(xì)胞形態(tài)各異，呈圓形、短棒形或多角形，經(jīng)第一次換液后，細(xì)胞增殖加快，其增殖速度明顯快于密度梯度離心法。5天時可見有50%細(xì)胞貼壁，7一10天細(xì)胞達(dá)70%一80%融合，逐漸舒展呈現(xiàn)多種形態(tài)，并可見細(xì)胞克隆的形成。細(xì)胞以多角和長梭形為主

髓MSCS第3代(x100)骨髓MSC，生長曲線髓貼壁法和密度梯度離心法兩者在細(xì)胞接種后第1一3天細(xì)，為細(xì)胞生長的潛伏期，3天后細(xì)胞生長加速，有一快速生生長期，于7一9天時，細(xì)胞數(shù)達(dá)最高值，為細(xì)胞生長平臺期速度減慢。全骨髓貼壁法所獲骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞第1天OD梯度離心法;細(xì)胞從第3天起增殖加快，進(jìn)入指數(shù)增長期，度梯度離心法;至第9天，細(xì)胞增殖明顯減慢進(jìn)入平臺期。培養(yǎng)開始3天時，密度梯度離心法生長速度明顯高于全骨髓1)，此后兩種方法下細(xì)胞生長速度無明顯差異(P>0.05)。(見表1.1MTT法骨髓MSCs生長曲線測定結(jié)果(OD值)(萬士S)


本文編號：2895898