發(fā)布時間：2020-10-28 13:43

　　 目的:壬基酚(Nonylphenol,NP)是一種持久性有機(jī)污染物(Persistent Organic Pollutants,POPs),它被廣泛應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)產(chǎn)品中。進(jìn)入環(huán)境中的NP難降解,易蓄積于生物體內(nèi)。人們在日常生活中可通過飲水和飲食等途徑暴露于NP,造成內(nèi)分泌、免疫、生殖、神經(jīng)等系統(tǒng)損傷,孕哺期是神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的關(guān)鍵時期,對外部因素的刺激更加敏感,胎兒在此時期暴露于NP可引起子代學(xué)習(xí)記憶功能的損傷。海馬是學(xué)習(xí)記憶的關(guān)鍵腦區(qū),海馬神經(jīng)元的異常凋亡會影響學(xué)習(xí)記憶。而持續(xù)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可引起細(xì)胞凋亡。PERK/ATF4/CHOP和Calpain2/Cleaved Caspase-12通路與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)凋亡密切相關(guān)。本研究通過建立孕哺期NP暴露模型,探討孕哺期母體NP暴露后,子代大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生情況及其相關(guān)機(jī)制。研究方法:本研究對懷孕母鼠進(jìn)行NP灌胃染毒,建立孕哺期母體NP暴露模型。在第21天對子代海馬進(jìn)行尼氏染色實(shí)驗(yàn);TUNEL實(shí)驗(yàn);Western blot和免疫熒光實(shí)驗(yàn)測定凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-Caspase-3和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78的表達(dá)水平,Western blot法檢測PERK/ATF4/CHOP通路和Calpain2/Cleaved Caspase-12通路中各蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:1.孕哺期NP暴露使仔鼠海馬存活神經(jīng)元數(shù)量減少:仔鼠海馬CA1區(qū)和CA3區(qū)的神經(jīng)元計數(shù)結(jié)果顯示,與對照組相比,NP暴露組中平均存活神經(jīng)元數(shù)量顯著減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.孕哺期NP暴露使仔鼠海馬神經(jīng)元凋亡水平升高:在仔鼠海馬中的CA1和CA3區(qū),NP暴露組中的TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)顯著高于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.孕哺期NP暴露使仔鼠海馬區(qū)Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)水平升高:Western blot結(jié)果顯示,在仔鼠海馬中,與對照組相比,NP暴露組中Cleaved Caspase-3蛋白的表達(dá)水平均升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。免疫熒光結(jié)果顯示,仔鼠海馬CA1和CA3區(qū)中,NP暴露組中的Cleaved Caspase-3表達(dá)水平顯著高于對照組。4.孕哺期NP暴露使仔鼠海馬神經(jīng)元GRP78蛋白表達(dá)水平升高:Western blot結(jié)果顯示,在仔鼠海馬中,NP暴露組神經(jīng)元中GRP78水平高于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。免疫熒光結(jié)果顯示,仔鼠海馬CA1和CA3區(qū)中,NP暴露組神經(jīng)元中的GRP78表達(dá)水平顯著高于對照組。5.孕哺期NP暴露使仔鼠海馬PERK/ATF4/CHOP通路激活:與對照組相比,NP暴露組中p-PERK,PERK,ATF4,CHOP蛋白的表達(dá)顯著增加,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)6.孕哺期NP暴露使仔鼠海馬Calpain2/Cleaved Caspase-12通路激活:在仔鼠海馬中,NP暴露組與對照組相比Cailpain2表達(dá)量顯著增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。NP暴露組的Cleaved Caspase-12蛋白表達(dá)的水平高于對照組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.孕哺期NP暴露導(dǎo)致子代大鼠海馬神經(jīng)元凋亡增加。2.孕哺期NP暴露導(dǎo)致子代大鼠海馬神經(jīng)元發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。3.孕哺期NP暴露導(dǎo)致子代大鼠海馬神經(jīng)元凋亡可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R114
【部分圖文】：

NP各劑量組仔鼠海馬神經(jīng)元CA1、CA3區(qū)尼氏染色結(jié)果（*表示與對照組相比，P<

13圖 4. 仔鼠海馬 CA1、CA3 區(qū) Cleaved Caspase-3 蛋白的免疫熒光檢測結(jié)果（x 200）圖中 MAP2（綠色）是神經(jīng)樹突骨架蛋白（作為神經(jīng)元標(biāo)記）。

NP各劑量組仔鼠海馬p-PERK、PERK、ATF4、CHOP蛋白的表達(dá)情況（*表示與對照組相比，P<0.05）
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本文編號：2860166