【摘要】：目的:胃腸積熱是無形熱邪或有形熱結(jié)壅于胃腸,而致胃腸氣分熱盛的證態(tài),其形成的主要原因是飲食積滯,蘊(yùn)而化熱。胃腸積熱常見于小兒,與小兒肺炎的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。小兒肺炎患者也多有胃腸積熱表現(xiàn),故臨床應(yīng)予以肺胃同治法治療。銀萊湯以肺胃同治法組方,由金銀花、連翹、黃芩、魚腥草、前胡、萊菔子和全瓜蔞組成,全方在上可清宣太陰肺經(jīng)之熱邪,在下可清泄陽明胃腸之積滯,共奏肺胃同治之效,臨床用于治療小兒肺炎兼有胃腸積熱者,療效顯著。小兒肺炎是由不同病原體或其他因素所致的肺部炎癥,是兒童呼吸系統(tǒng)常見疾病。引起小兒肺炎的病原體主要有細(xì)菌、病毒、支原體、衣原體等,但各種病原體所致的肺炎均以發(fā)熱、咳嗽、氣促、肺部固定濕Up音等為典型表現(xiàn),可參考中醫(yī)的小兒肺炎喘嗽辨證治療。脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)是革蘭陰性菌內(nèi)毒素的主要成分,可介導(dǎo)機(jī)體的炎癥反應(yīng),且因其毒性較弱,各菌間LPS產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)類似,無明顯特異性,可用于非特異性肺炎模型的制備。前期研究運(yùn)用病因?qū)W造模方法,成功復(fù)制了以高熱量高蛋白飲食為特點(diǎn)的胃腸積熱小鼠模型,并在此基礎(chǔ)上研究胃腸積熱對(duì)肺炎小鼠的影響,以及銀萊湯的干預(yù)作用,發(fā)現(xiàn)胃腸積熱可導(dǎo)致肺炎小鼠肺指數(shù)增加,肺損傷加重,而銀萊湯可明顯減輕胃腸積熱復(fù)合肺炎模型小鼠的肺損傷情況。之后分別從炎癥、免疫和腸黏膜屏障等方面對(duì)胃腸積熱的致病機(jī)制和銀萊湯的作用機(jī)制進(jìn)行了探討。但相關(guān)研究仍缺乏系統(tǒng)性的評(píng)價(jià),其有關(guān)機(jī)制仍有待進(jìn)一步明確。本課題在前期研究基礎(chǔ)上,擬運(yùn)用同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量(iTRAQ)蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),觀察肺炎模型小鼠和胃腸積熱復(fù)合肺炎模型小鼠肺組織蛋白質(zhì)組學(xué)特征,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步比較分析胃腸積熱對(duì)肺炎小鼠肺組織蛋白表達(dá)的影響,以及銀萊湯對(duì)胃腸積熱復(fù)合肺炎小鼠肺組織蛋白表達(dá)的影響,以期從肺組織蛋白質(zhì)組學(xué)層面部分闡明胃腸積熱影響小兒肺炎發(fā)生發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ),以及銀萊湯治療胃腸積熱復(fù)合肺炎的作用機(jī)制,從而為小兒肺炎的預(yù)防和治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:通過LPS霧化吸入誘導(dǎo)小鼠肺炎模型(M1組),通過高熱量高蛋白飲食復(fù)合LPS霧化吸入誘導(dǎo)小鼠胃腸積熱復(fù)合肺炎模型(M2組),以銀萊湯為胃腸積熱復(fù)合肺炎模型的干預(yù)藥物(Y組),觀察三組小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)、肺指數(shù)和肺組織病理變化情況,之后運(yùn)用iTRAQ標(biāo)記蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),觀察各組小鼠肺組織蛋白表達(dá)情況,并進(jìn)一步分析各組間蛋白差異表達(dá)情況。結(jié)果:1.肺指數(shù)、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的變化與正常組比較,M1組和M2組的肺指數(shù)明顯升高(p0.05);與M1組比較,M2組肺指數(shù)明顯升高(p0.05);與M2組比較,Y組肺指數(shù)降低,但差異不明顯(p=0.458)。與正常組比較,M2組脾指數(shù)明顯升高(p0.05),M1組脾指數(shù)升高,但差異不明顯(p=0.39)。與M1組相比,M2組脾指數(shù)升高,但差異不明顯(p=0.204)。與M2組比較,Y組脾指數(shù)明顯升高(p0.05)。與正常組比較,M1組和M2組胸腺指數(shù)降低,但差異不明顯(p0.05)。與M1組比較,M2組胸腺指數(shù)降低,但差異不明顯(p0.05)。與M2組比較,Y組胸腺指數(shù)升高,但差異不明顯(p0.05)2.肺組織病理變化M1組小鼠肺組織出現(xiàn)肺泡結(jié)構(gòu)破壞,肺間隔增寬,存在肺泡融合并伴有炎性細(xì)胞浸潤。M2組小鼠肺組織病變程度較M1組重,有明顯肺實(shí)變,有大量炎癥細(xì)胞浸潤。Y組小鼠肺組織病變程度較M2組減輕,肺間隔增厚減少,周圍間質(zhì)內(nèi)炎性浸潤減少。3.肺組織蛋白表達(dá)情況本次實(shí)驗(yàn)共鑒定出2626個(gè)可信蛋白(peptides≥1,且在三次實(shí)驗(yàn)中可重復(fù)出現(xiàn))。以p0.05,差異變化倍數(shù)(Fold Change, FC)大于1.5為標(biāo)準(zhǔn)篩選各組間差異蛋白。與正常組相比,M1組小鼠肺組織中有344種差異表達(dá)蛋白,其中224種表達(dá)上調(diào),120種表達(dá)下調(diào);其涉及有顯著變化(p0.05)的生物學(xué)過程有1287個(gè),細(xì)胞組分有197個(gè),分子功能有234個(gè),KEGG通路有26個(gè)。其中生物學(xué)過程主要有機(jī)體對(duì)有機(jī)物的反應(yīng)、細(xì)胞因子響應(yīng)、細(xì)胞對(duì)化學(xué)刺激的反應(yīng)、機(jī)體對(duì)化學(xué)物質(zhì)的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)細(xì)胞因子刺激的反應(yīng)、機(jī)體對(duì)外部刺激的反應(yīng)、防御反應(yīng)和免疫系統(tǒng)進(jìn)程等;相關(guān)的信號(hào)通路主要有細(xì)胞外基質(zhì)相互作用、白細(xì)胞遷移、FcγR介導(dǎo)的吞噬作用、補(bǔ)體系統(tǒng)、抗原提呈和加工、核糖體、氨基酰轉(zhuǎn)運(yùn)RNA合成、蛋白質(zhì)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的加工、氨基酸合成、碳代謝、糖酵解/糖異生和磷酸戊糖途徑等。與正常組相比,M2組小鼠肺組織中有521種差異表達(dá)蛋白,其中273種表達(dá)上調(diào),248種表達(dá)下調(diào);其涉及有顯著變化(p0.05)的生物學(xué)過程有1158個(gè),細(xì)胞組分有242個(gè),分子功能有234個(gè),KEGG通路有39個(gè)。其中生物學(xué)過程主要有生物附著、細(xì)胞粘附、機(jī)體對(duì)有機(jī)物的反應(yīng)、機(jī)體對(duì)化學(xué)物質(zhì)的反應(yīng)、免疫系統(tǒng)進(jìn)程、防御反應(yīng)、細(xì)胞因子響應(yīng)、有機(jī)氮化合物代謝過程、肽代謝過程、氣體運(yùn)輸、小分子代謝和氧化還原反應(yīng)等;而相關(guān)的信號(hào)通路主要有細(xì)胞外基質(zhì)相互作用、黏著斑、細(xì)菌入侵上皮細(xì)胞、白細(xì)胞遷移、吞噬體、核糖體、碳代謝和三羧酸循環(huán)等。與M1組比較,M2組小鼠肺組織中有164種差異表達(dá)蛋白,其中14種表達(dá)上調(diào),150種表達(dá)下調(diào),其涉及有顯著變化(p0.05)的生物學(xué)過程有588個(gè),細(xì)胞組分有131個(gè),分子功能有144個(gè),KEGG通路有20個(gè)。其中生物學(xué)過程主要有小分子代謝過程、氣體運(yùn)輸、嘌呤核糖核苷酸代謝過程、核糖核苷酸代謝過程、磷酸核糖代謝、細(xì)胞粘附和生物附著等。而相關(guān)信號(hào)通路主要有氧化磷酸化、三羧酸循環(huán)、丁酸甲酯代謝、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解、核糖體、細(xì)胞外基質(zhì)相互作用、黏著斑、補(bǔ)體系統(tǒng)和血管平滑肌收縮等。與M2組比較,Y組肺組織中有87種差異表達(dá)蛋白,其中73種表達(dá)上調(diào),14種表達(dá)下調(diào),其涉及有顯著變化(p0.05)的生物功能有403個(gè),細(xì)胞組分有112個(gè),分子功能有114個(gè),KEGG通路有21個(gè)。其中生物過程主要有檸檬酸代謝過程、細(xì)胞呼吸、三羧酸代謝過程、三羧酸循環(huán)、有機(jī)化合物氧化供能以及前體代謝物和能量的產(chǎn)生等。而相關(guān)的信號(hào)通路主要有三羧酸循環(huán)、氧化磷酸化、脂肪酸代謝、色氨酸代謝、賴氨酸降解、纈氨酸亮氨酸異亮氨酸降解和核糖體等。結(jié)論:1.胃腸積熱能夠加重LPS所誘導(dǎo)的肺炎模型小鼠肺部炎癥損傷,而銀萊湯能夠減輕胃腸積熱復(fù)合肺炎模型小鼠的肺部炎癥損傷。2.LPS霧化吸入不僅能夠引起肺組織炎癥,還可以影響蛋白質(zhì)的合成和碳水化合物的代謝。3.胃腸積熱可能通過影響小鼠的物質(zhì)能量代謝,進(jìn)一步影響其免疫功能,進(jìn)而加重LPS所致的炎癥損傷。4.銀萊湯可能通過調(diào)節(jié)胃腸積熱復(fù)合肺炎小鼠的物質(zhì)能量代謝,達(dá)到其治療作用。5.三羧酸循環(huán)功能的改變可能是胃腸積熱致病作用和銀萊湯治療作用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。
【圖文】：
基十蛋ｄ質(zhì)組學(xué)對(duì)胃腸積熱復(fù)合肺炎小鼠生物學(xué)特征及銀萊湯干預(yù)作用的研宄逡逑表１．１各組小鼠肺指數(shù)、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)（ｘ土ｓ）逡逑Ｄ邐Ｍｌ邐Ｍ２逡逑肺指數(shù)邐７．２８７邋＋邋０．４５１邐９．７４２邋±０．７４４＊￣１０．８９１＋０．９７８＊＃￣￣逡逑脾指數(shù)邐３．６３６±０．３８２邐３．８４５邋±０．４３５邋４．１５７邋＋邋０．６６０＊逡逑胸腺指數(shù)邐４．７０２邋＋邋０．８６３邐４．５９９邋＋邋０．５８４邋４．４７０邋＋邋０．６９８逡逑注：＊與Ｄ組比較，Ｐ＜０．０５；邋＃與Ｍｌ組比較，，ｐ＜０．０５。逡逑－邐邐邐逡逑
圖ｉ．ｉ各組小鼠肺指數(shù)、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)柱狀圖逡逑１．３肺＿病理改變逡逑肺組織病理顯示（圖１．３），正常組小鼠肺組織肺泡結(jié)構(gòu)一致，肺泡壁薄，肺泡腔及逡逑管腔內(nèi)無炎性浸潤，細(xì)支氣管結(jié)構(gòu)完整清晰，單層柱狀或立方上皮細(xì)胞排列緊密，上皮逡逑外平滑肌呈完整環(huán)形。胃腸積熱合并肺炎組和肺炎組小鼠肺組織均出現(xiàn)肺泡結(jié)構(gòu)破壞不逡逑清，肺間隔顯著增寬，存在肺泡融合甚至消失，血管擴(kuò)張充血，并伴有大量炎性細(xì)胞浸逡逑潤。單層柱狀上皮細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞脫落明顯，管腔及其周圍肺間質(zhì)內(nèi)存在大量炎性逡逑細(xì)胞浸潤。肺炎組小鼠肺組織病變程度較胃腸積熱合并肺炎組輕，肺泡邊界相對(duì)清楚，逡逑肺泡壁較薄，肺間隔增厚，伴血管充血，肺泡腔及管腔內(nèi)少量炎性細(xì)胞漫潤，周圍間質(zhì)逡逑內(nèi)炎性浸潤較少，單層柱狀上皮細(xì)胞排列相對(duì)整齊緊密。逡逑４７逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【參考文獻(xiàn)】
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本文編號(hào)：
2594031
