發(fā)布時(shí)間：2020-03-22 05:04

【摘要】：硫氧化蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,Txnip)是一個(gè)受到糖濃度和AMP依賴的蛋白激酶(AMP-dependent protein kinase,AMPK)調(diào)節(jié)的氧化還原蛋白,其表達(dá)異常與胰島素抵抗(insulin resistance,IR)以及2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)形成有著密切聯(lián)系。課題組前期研究證實(shí),京尼平苷可加速高糖誘導(dǎo)的Txnip降解抑制胰腺β細(xì)胞分泌胰島素,且能明顯降低糖尿病小鼠空腹血糖、改善胰島素抵抗。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),在高糖條件下,京尼平苷能明顯下調(diào)脂肪細(xì)胞內(nèi)Txnip的蛋白水平,但是,京尼平苷降低脂肪細(xì)胞內(nèi)Txnip的意義和分子機(jī)制還不清楚。結(jié)合文獻(xiàn)和過去的研究基礎(chǔ),我們提出科學(xué)猜想:京尼平苷可能通過調(diào)節(jié)Txnip的蛋白水平影響胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo),從而改善脂肪細(xì)胞胰島素抵抗。本文首先考察了京尼平苷對脂肪細(xì)胞胰島素抵抗的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在高糖/胰島素誘導(dǎo)的脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型中,京尼平苷可顯著改善脂肪細(xì)胞胰島素抵抗,促進(jìn)脂肪細(xì)胞對葡萄糖的攝取,上調(diào)脂肪細(xì)胞內(nèi)的胰島素底物受體-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(glucose transporter 1,GLUT 1)表達(dá),抑制IRS-1絲氨酸307位點(diǎn)的磷酸化。緊接著,我們探究了京尼平苷下調(diào)Txnip的分子機(jī)制。Western blot和qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,高糖條件下京尼平苷對脂肪細(xì)胞中Txnip的轉(zhuǎn)錄無明顯影響,其可能是通過蛋白酶體途徑促進(jìn)Txnip降解。為進(jìn)一步明確京尼平苷促進(jìn)Txnip降解與其改善脂肪細(xì)胞胰島素抵抗的相關(guān)性。利用RNA干擾的方法,在Txnip干擾的脂肪細(xì)胞中分析京尼平苷對胰島素抵抗的脂肪細(xì)胞葡萄糖吸收和胰島素信號相關(guān)分子的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),Txnip基因干擾后,京尼平苷改善脂肪細(xì)胞葡萄糖吸收和對胰島素信號分子的調(diào)節(jié)作用被明顯抑制。由此可以看出,Txnip在京尼平苷調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞胰島素抵抗和胰島素信號分子中可能具有重要作用。最后,采用AMPK激活劑和拮抗劑,探討AMPK在京尼平苷改善脂肪細(xì)胞胰島素抵抗中的作用。結(jié)果表明,AMPK激活劑能增強(qiáng)京尼平苷促進(jìn)Txnip降解的作用,而AMPK拮抗劑抑制了京尼平苷對Txnip降解的影響。并且AMPK激活劑還能顯著增強(qiáng)京尼平苷對胰島素信號相關(guān)分子的調(diào)節(jié)作用,但AMPK拮抗劑明顯抑制了京尼平苷的這些功能。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,AMPK在京尼平苷改善脂肪細(xì)胞胰島素抵抗中也有重要的調(diào)節(jié)作用。本文的研究結(jié)果初步明確:(1)京尼平苷可以明顯改善脂肪細(xì)胞胰島素抵抗;(2)京尼平苷能夠通過蛋白酶體途徑促進(jìn)脂肪細(xì)胞內(nèi)Txnip降解;(3)京尼平苷促進(jìn)Txnip降解對于改善脂肪細(xì)胞胰島素抵抗有重要的意義;(4)AMPK在京尼平苷改善脂肪細(xì)胞胰島素抵抗過程中具有重要的作用。
【圖文】：

圖 2.1 3T3-L1 前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化及鑒定 (×200)Fig 2.1 Oil red staining on differentiated 3T3-L1 cells (×200)2.4.2 高糖/胰島素構(gòu)建脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型將 3T3-L1 細(xì)胞誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞后，先更換無血清培養(yǎng)基饑餓 12 h，然后在換成含有 33 mM 葡萄糖和 10-7mM 胰島素的培養(yǎng)基分別處理 12、24、48 h，最后收集培養(yǎng)基上清，并采用葡萄糖氧化酶法 (GOP-POD 法)測定其葡萄糖消耗量。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，胰島素抵抗組細(xì)胞的葡萄糖消耗量均明顯低于正常組，，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，48h 組葡萄糖消耗量約降低至正常組的 70%，結(jié)果如圖 2.2 所示。此時(shí)的兩組之間差異最大，胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)最明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，選擇高糖/胰島素建立脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型的最佳時(shí)間是 48 h。建模成功后，更換正常培養(yǎng)基，分別檢測 12、24 h 上清液中正常組與胰島素抵抗組細(xì)胞的葡萄糖消耗量。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，胰島素抵抗組細(xì)胞的葡萄糖消耗量均明顯低于正常組，結(jié)果如圖 2.3 所示。因此，高糖/胰島素建立的脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型是穩(wěn)

島素誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型. 數(shù)據(jù)為平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)偏差組相比, *, p < 0.05, **, p < 0.01.lucose combined with high insulin induced the insulin resistance (Iessed as mean ± SD. n = 6 in each group. *, p < 0.05, **, p < 0.01
【學(xué)位授予單位】：重慶理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 崔艷華;嚴(yán)繼萍;趙文莉;張小紅;崔遠(yuǎn)平;;超聲評價(jià)青年人群胰島素抵抗對頸動脈內(nèi)中膜厚度的影響[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)影像雜志;2019年03期

2 陳芳建;胡朝暉;胡雅國;陳秀花;祝素文;萬金星;;2型糖尿病患者脂聯(lián)素、瘦素及其比值與血脂、胰島素抵抗的相關(guān)性[J];浙江檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2008年04期

3 張涵濤;王f ;付紅萍;;羅格列酮聯(lián)合胰島素短期強(qiáng)化治療的療效觀察[J];中國水電醫(yī)學(xué);2007年03期

4 王偉;郭素麗;屈愛靜;;胰島素及胰島素抵抗研究進(jìn)展[J];山西體育科技;2011年03期

5 張軼偉;郝春艷;李思敏;;老年人甲狀腺激素與胰島素抵抗和脂聯(lián)素的相關(guān)性分析[J];中國藥物與臨床;2019年01期

6 ;蜂膠在改善胰島素抵抗方面研究取得新進(jìn)展[J];食品安全導(dǎo)刊;2018年33期

7 欒金紅;趙龍剛;;淺談2型糖尿病胰島素抵抗的中醫(yī)策略[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2019年18期

8 杜洪艷;;首診2型糖尿病短期胰島素強(qiáng)化治療對患者胰島素抵抗和病情的影響[J];臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志;2017年64期

9 楊偉;華琦;;衰老相關(guān)的慢性炎癥與胰島素抵抗的研究進(jìn)展[J];中華老年多器官疾病雜志;2017年01期

10 劉峰;;2型糖尿病胰島素抵抗及其機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國處方藥;2018年08期

相關(guān)會議論文 前10條

1 陳艷秋;宗敏;華莉;李臻;肖菲;孫建琴;;2型糖尿病患者肝臟脂肪與胰島素抵抗的關(guān)系[A];中國營養(yǎng)學(xué)會老年?duì)I養(yǎng)分會第七次全國營養(yǎng)學(xué)術(shù)交流會“營養(yǎng)與成功老齡化”暨國家級繼續(xù)教育項(xiàng)目“神經(jīng)系統(tǒng)疾病醫(yī)學(xué)營養(yǎng)治療”資料匯編[C];2010年

2 陳艷秋;陳敏;宗敏;華莉;李臻;張鑫毅;孫建琴;;2型糖尿病患者肝臟脂肪分布與胰島素抵抗[A];老年?duì)I養(yǎng)研究進(jìn)展與老年?duì)I養(yǎng)供餐規(guī)范研討會暨糖尿病腎病醫(yī)學(xué)營養(yǎng)治療進(jìn)展學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2011年

3 王天歌;畢宇芳;徐敏;黃韻;徐瑜;李小英;王衛(wèi)慶;寧光;;環(huán)境內(nèi)分泌干擾物雙酚A與肥胖及胰島素抵抗的相關(guān)性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

4 陳海冰;;骨骼肌胰島素抵抗[A];中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會第十六次全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

5 楊國慶;杜錦;巴建明;呂朝暉;竇京濤;母義明;陸菊明;;嚴(yán)重胰島素抵抗臨床線索和診斷策略[A];中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會第十六次全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

6 雷萬生;;胰島素抵抗與多器官功能不全綜合征[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2010年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2010年

7 崔濤;任艷;;α-糖苷酶抑制劑在臨床應(yīng)用中對體重和胰島素抵抗的影響的系統(tǒng)評價(jià)[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

8 曹文洪;;胰島素在將過剩的能量轉(zhuǎn)變成胰島素抵抗和T2DM中起一個(gè)關(guān)鍵作用[A];營養(yǎng)與糖尿病并發(fā)癥——達(dá)能營養(yǎng)中心第十六屆學(xué)術(shù)會議論文集[C];2013年

9 王香;邵萍;徐克煒;;OSAS與胰島素抵抗關(guān)系的探討[A];西部大開發(fā) 科教先行與可持續(xù)發(fā)展——中國科協(xié)2000年學(xué)術(shù)年會文集[C];2000年

10 宋曉敏;耿秀琴;郭長磊;;胰島素抵抗幾個(gè)相關(guān)因素在公安人群中的狀態(tài)與分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 廣西鐘山縣中醫(yī)院主治醫(yī)師 甘雨;胰島素和中藥合用更利于降血糖[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2016年

2 記者 陶婷婷;治療胰島素抵抗智能傳感器研究獲得重要成果[N];上�？萍紙�(bào);2017年

3 首席記者 譚嘉;糖尿病患者腫瘤患病率明顯增高[N];健康報(bào);2017年

4 北京朝陽醫(yī)院內(nèi)分泌科副教授 范慧;胖糖友用藥 需兼顧減重[N];健康報(bào);2017年

5 黃艾嬌 記者 王春;“以糖治糖”：這思路治糖尿病是不是“腦洞”夠大[N];科技日報(bào);2017年

6 記者 衣曉峰;胰島素抵抗或是流產(chǎn)重要“推手”[N];健康報(bào);2017年

7 記者 張夢然;胰島素竟可改變大腦反應(yīng)[N];科技日報(bào);2017年

8 上海市東方醫(yī)院婦產(chǎn)科副主任醫(yī)師 楊曉菊;“糖媽媽” 5招擁有健康寶寶[N];健康報(bào);2017年

9 石柏;游離糖雖好，但也會引發(fā)多種疾病[N];21世紀(jì)藥店;2017年

10 山東 主任醫(yī)師 王建華;糖尿病人能否輸注葡萄糖[N];家庭醫(yī)生報(bào);2017年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 韓新軍;基礎(chǔ)軍訓(xùn)對健康青年男性的胰島素敏感度，血脂及脂聯(lián)素的影響的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2019年

2 孫世碩;脂肪酸感知與修飾的細(xì)胞信號傳導(dǎo)功能[D];蘇州大學(xué);2018年

3 卓梅琴;黃顙魚PI3Ks功能解析及其通路在胰島素調(diào)控脂類代謝中的作用機(jī)制[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

4 陳廣道;胰島素在膿毒癥誘導(dǎo)急性腎損傷中改善線粒體功能障礙機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

5 阮玉婷;LncRNA-p3134在調(diào)控胰島β細(xì)胞功能和胰島素信號通路中的作用機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

6 張紫微;MiR-99a抑制胰島素促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖、遷移、去分化及雷帕霉素抵抗的作用及機(jī)制[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2017年

7 念馨;內(nèi)臟脂肪FOXC2表達(dá)調(diào)控與脂肪細(xì)胞分化和胰島素抵抗的關(guān)系及機(jī)制[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2018年

8 龐邵杰;成年人血脂及磷脂譜與胰島素抵抗的關(guān)系研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2018年

9 賴業(yè)瑞;DOCK5參與長期代謝紊亂及高脂誘導(dǎo)下肝胰島素抵抗調(diào)控及其機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

10 秦強(qiáng);蛋白激酶MST3抑制肥胖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和胰島素抵抗[D];浙江大學(xué);2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 鄧露;脂聯(lián)素/胰島素抵抗及其信號通路對子宮內(nèi)膜癌影響的基礎(chǔ)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

2 楊春霞;SGLT-2抑制劑藥物聯(lián)合胰島素治療1型糖尿病系統(tǒng)評價(jià)與meta分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

3 黎梅;多囊卵巢綜合征脂質(zhì)蓄積指數(shù)與胰島素抵抗的相關(guān)性Meta分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

4 黃亞博;不同糖耐量老年人群血清NUCB2/nesfatin-1水平與血糖和胰島素抵抗的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2019年

5 朱娜;阿托伐他汀對胰島素抵抗小鼠心室重構(gòu)的影響及機(jī)制研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2019年

6 翟文虎;術(shù)前飲用碳水化合物對老年高危手術(shù)患者麻醉前胃容量及術(shù)后胰島素抵抗的影響[D];西南醫(yī)科大學(xué);2019年

7 羅秀梅;2型糖尿病患者認(rèn)知功能障礙的相關(guān)危險(xiǎn)因素分析[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

8 程玉華;內(nèi)臟脂肪素對胰島素抵抗L6細(xì)胞叉頭框蛋白1的影響[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

9 邵飛;基于PI3K/AKT/GLUT4通路探討津力達(dá)顆粒改善多囊卵巢綜合征胰島素抵抗的機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

10 塔娜;新診斷2型糖尿病患者經(jīng)短期胰島素強(qiáng)化治療對生物節(jié)律和Clock mRNA水平的影響[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2019年

本文編號：2594529