發(fā)布時間：2020-07-04 21:20

【摘要】：牛樟芝(Antrodiacamphorata)為非褶菌目、多孔菌科、薄孔菌屬真菌,別名有:牛樟菇,樟菇,紅樟芝,樟芝,血靈芝等。野生牛樟芝來源我國臺灣省,是20世紀(jì)90年代新發(fā)現(xiàn)的真菌[1～4]。如今,國內(nèi)牛樟芝培養(yǎng)品種繁多,主要有:椴木培養(yǎng)牛樟芝、固體發(fā)酵培養(yǎng)牛樟芝、皿式培養(yǎng)牛樟芝等。目的1.建立野生牛樟芝的UPLC指紋圖譜,結(jié)合相似度評價體系和聚類分析方法,為野生牛樟芝質(zhì)量控制體系,在穩(wěn)定性、特異性方面進(jìn)行定性研究;2.建立高效液相色譜-離子阱-飛行時間質(zhì)譜(LCMS-IT-TOF)的液質(zhì)聯(lián)用對野生牛樟芝全成分的定性鑒別,解決和減輕因傳統(tǒng)化學(xué)成分提取、純化、鑒定分析方法帶來的不便利與高昂的科研成本,為牛樟芝物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供科學(xué)依據(jù)及研究思路。3.利用離子阱-飛行時間質(zhì)譜(IT-TOF MS)質(zhì)譜儀定性鑒定比較四種不同培養(yǎng)品種的牛樟芝(野生牛樟芝、椴木培養(yǎng)牛樟芝、固體發(fā)酵培養(yǎng)牛樟芝、皿式培養(yǎng)牛樟芝),從化學(xué)成分的角度,進(jìn)行準(zhǔn)確、快速的區(qū)分,解決市場上牛樟芝的魚目混珠,以次充好的社會問題。4.建立牛樟芝UPLC-DAD的含量測定方法,為牛樟芝質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。方法1.野生牛樟芝的UPLC指紋圖譜及聚類分析通過對液相洗脫梯度、流動相、最大吸收波長、流速、色譜柱、柱溫六個方面進(jìn)行優(yōu)選,在確立色譜條件的基礎(chǔ)上,對野生牛樟芝提取方法、提取溶媒、料液比、提取時間、提取次數(shù)進(jìn)行系統(tǒng)的單因素考察,優(yōu)化提取方案。再運(yùn)用《中國藥典》指定的2004版指紋圖譜軟件,進(jìn)行野生牛樟芝指紋圖譜相似度評價,并結(jié)合聚類分析方法,建立野生牛樟芝子實體UPLC指紋圖譜。2.LCMS-IT-TOF野生牛樟芝的成分定性分析采用LCMS-IT-TOF液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜儀,通過UPLC超高效液相色譜儀,進(jìn)行液相色譜分離,再利用離子阱-飛行時間質(zhì)譜(IT-TOFMS)質(zhì)譜儀,進(jìn)行野生牛樟芝化學(xué)成分液質(zhì)聯(lián)用的定性鑒別,以Antcin A、antcin C、antcin H和antcin K四種樟菇酸類成分對照品進(jìn)行驗證,建立基于IT-TOF MS野生牛樟芝的化學(xué)成分的定性鑒別。3.IT-TOF MS比較四種牛樟芝培養(yǎng)品種的成分基于LCMS-IT-TOF液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜儀,通過UPLC-DAD獲得紫外光譜,再結(jié)合IT-TOF MS質(zhì)譜儀,ESI源作為離子源,霧化氣流速為1.50 L/min,CDL溫度為200℃C,加熱板塊溫度為200℃C,檢測器電壓為1.56 kV,碰撞能量為50%,采集范圍(m/Z)在100～1000,累積時間為50 ms,采集時間為65 min。在正離子模式下檢測分析,獲得高精度質(zhì)譜數(shù)據(jù),實現(xiàn)對四種牛樟芝培養(yǎng)品種化學(xué)成分質(zhì)譜的定性鑒別,輔以Antcin A、antcin C、antcin H和antcin KK四種樟菇酸類成分對照品進(jìn)行驗證,建立基于IT-TOF MS四種牛樟芝培養(yǎng)品種化學(xué)成分的定性鑒別,并比較牛樟芝特有樟菇酸類成分在種類上的多寡。4.UPLC-DAD法測定牛樟芝四種樟菇酸類成分的含量四種牛樟芝培養(yǎng)品種,80%乙醇超聲提取,采用Shim-pack GISS-C18(2.1×100 mm,1.9 μm)色譜柱,以0.1%甲酸-乙腈溶液為流動相梯度洗脫,檢測波長為254 nm,流速0.20mL/min,柱溫25℃,進(jìn)樣量1.O μμL采用UPLC超高效液相色譜儀,在優(yōu)化色譜條件和提取方案的基礎(chǔ)上,建立UPLC-DAD法對四種牛樟芝培養(yǎng)品種,四種樟菇酸類成分的含量測定。結(jié)果1.建立了 10批野生牛樟芝UPLC指紋圖譜,標(biāo)定了 17個共有峰,指認(rèn)了 4個樟菇酸特征峰,分別為:AnticnK(1號峰)、anticnC(13號峰)、anticnH(15號峰)、和anticn A(21號峰),10批野生牛樟芝相似度在0.927～0.974,聚類分析,分類距離為10時,可細(xì)分為四類。同時,實驗優(yōu)化了野生牛樟芝的液相色譜條件和提取方案。2.建立了野生牛樟芝的LCMS-IT-TOF液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜儀全成分的定性鑒別分析方案,定性識別成分39個,鑒別出12個,分別為:Anticn K(2號峰),anticnN(3號峰),anticn D(9 號峰),lanosta-8,24-dien-3β,15α,21-triol(10 號峰),antroquinonol B(18 號峰),anticn C(22 號峰),anticn H(24 號峰),dehydrosulphurenic acid(30號峰),antrocinnamomins B(34 號峰),a-TocospiroB(35 號峰),anticnA(37 號峰),dehydroeburicoic acid(38 號峰)。3.建立了基于IT-TOF MS質(zhì)譜儀,四種不同培養(yǎng)品種的牛樟芝(野生牛樟芝、椴木培養(yǎng)牛樟芝、固體發(fā)酵培養(yǎng)牛樟芝、皿式培養(yǎng)牛樟芝),在化學(xué)成分的定性鑒定比較方法。定性識別成分63個,鑒別出16個成分,分別為:Methyl antcinate B、dexamethasone、antrocinnamomin G、antcin K、antcin N、antcin D、lanosta-8,24-dien-3β,15α,21-triol、antroquinonol B、antcin C、antcin H、dehydrosulphurenic acid、methyl-3,11-dioxo-4α-methylergost-8,24(28)-dien-26-oate、antrocinnamomins B、α-Tocospiro B、antcin A、dehydroeburicoic acid。4.建立了牛樟芝的UPLC-DAD法的含量測定,在60 min內(nèi)定量分析19批牛樟芝中4種樟菇酸類成分。在考察的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r0.999 7);日內(nèi)精密度RSD為0.54%～1.39%,日間精密度RSD為0.39%～0.60%;穩(wěn)定性試驗48 h內(nèi)RSD為1.22%～1.47%;重復(fù)性RSD為0.71%～1.86%;平均回收率和RSD分別在98.16%～104.78%和1.44%～2.44%。野生牛樟芝中4種樟菇酸類成分的平均含量分別為 Anticn K(1.15 mg/g),anticn C(8.58 mg/g),anticn H(8.58 mg/g),anticn A(1.36 mg/g)。結(jié)論1.所建立的10批野生牛樟芝UPLC指紋圖譜,方法準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好,可以快速、準(zhǔn)確地鑒別和綜合評價野生牛樟芝的質(zhì)量,為野生牛樟芝的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。2.所建立的LCMS-IT-TOF液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的定性分析,為野生牛樟芝的質(zhì)量評價提供了可行的方法,突破了傳統(tǒng)中藥材需要提取、純化、質(zhì)譜、核磁等一系列繁雜流程,優(yōu)化了中藥化學(xué)成分定性鑒別研究的固有方案。3.所建立的IT-TOF MS質(zhì)譜儀的定性分析方法,準(zhǔn)確、方便,能鑒別分析牛樟芝不同培養(yǎng)品種的成分,能很好地解決市場上牛樟芝質(zhì)量的良莠不齊、真假難辨的社會問題。4.所建立的測定牛樟芝中4種樟菇酸類成分的UPLC-DAD定量分析,方法簡便、快捷、準(zhǔn)確,為牛樟芝質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284.1
【圖文】：

邐Ａｎ丨ｉｃｉｉＡ的紫外光譜圖逡逑圖７牛樟芝四個對照品成分紫外光譜圖（１９０邋－邋４００邋ｎｍ）逡逑如圖７為野生牛樟芝中四個對照品成分的紫外光譜圖，除Ａｎｔｉｃｎ邋Ｈ在２７５邋ｎｍ存逡逑在最大吸收之外，均在２４８？２５６邋ｎｍ之間存在最大吸收，其中Ａｎｔｉｃｎ邋Ｃ和Ａｎｔｉｃｎ邋Ａ逡逑最大吸收波長為２５４邋ｎｍ，野生牛樟芝中其他各個液相峰的紫外最大吸收（見第二章逡逑第二節(jié)表２５），由表２５可知，野生牛樟芝中絕大多數(shù)成分的紫外最大吸收波長處于逡逑２５４邋ｎｍ附近。逡逑■ｗｍ逡逑圖８野生牛樟芝全波長３Ｄ掃描圖（１９０－４００邋ｎｍ）逡逑１３逡逑

圖８野生牛樟芝全波長３Ｄ掃描圖（１９０－４００邋ｎｍ）逡逑１３逡逑

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 程利娟;郭琪;雷虹;楊瑩;申睿;慕磊;王彥宗;;高效液相色譜法測定牛樟芝中腺苷的含量[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2014年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 劉典謨;牛樟芝滴丸保肝功效及藥代動力學(xué)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2012年

本文編號：2741609