發(fā)布時間：2020-07-04 23:42

【摘要】：研究背景近年來隨著經(jīng)濟的發(fā)展,人們生活方式發(fā)生了較大的變化,大量高能量、高脂和高糖食物的攝入使得高脂血癥的發(fā)病率逐年增高并伴有低齡化趨勢,高脂血癥是血清中的膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量過高和高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平過低的一種脂代謝紊亂性疾病,若不進行有效干預,可成為誘發(fā)高血壓、高血黏度、脂肪肝、動脈粥樣硬化甚至冠心病及腦卒中等一系列嚴重疾病的危險因素。目前市場上治療高脂血癥的藥物主要是他汀和貝特類,其不良反應對患者影響嚴重,因此尋找安全、有效、低毒的新型調(diào)脂藥物具有十分重要的應用前景,也成為了醫(yī)藥學界的研究熱點。本實驗中的脈抒(Maishu,MS)是一種天然產(chǎn)物組合物,主要原料為山楂、沙棘和枸杞等。IMM-H007是在天然產(chǎn)物蟲草素結構基礎上進行改造篩選出的具有顯著調(diào)血脂活性的新型AMPK激動劑,目前處于臨床前開發(fā)階段。本實驗主要觀察這兩種受試品對實驗性脂代謝紊亂和受累器官損害的保護作用。研究目的本研究主要觀察脈抒和IMM-H007對實驗性脂代謝紊亂和受累器官的影響。研究方法(1)高脂膳食誘導高脂血癥金黃地鼠模型,給予不同劑量脈抒(低劑量:1 g/kg,中劑量:2 g/kg,高劑量:4 g/kg)、辛伐他汀(4 mg/kg)、非諾貝特(54mg/kg),每天灌胃給藥一次,觀察給藥2,4,8周后血清TC,TG,HDL-C,non-HDL-C 的變化;采用快速蛋白液相色譜(fast protein liquid chromatography,FPLC)技術分離給藥8周后血清中極低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL),并檢測其所攜帶的-膽固醇含量;采用全自動血液粘度儀檢測8周后全血血粘度值;采用離體微血管壓力直徑灌流系統(tǒng)觀察各組金黃地鼠腸系膜小動脈對不同濃度梯度乙酰膽堿(Acetyl choline,Ach)誘導的內(nèi)皮依賴性舒張反應的變化,評價脈抒對血管內(nèi)皮功能的影響;測定肝臟TC,TG,計算肝指數(shù);制作肝臟病理切片,進行HE和油紅O染色;應用 western blot 方法檢測 LDLR,HMGCR,SREBP2,CD36,SCD1 蛋白的表達,探討脈抒對高脂血癥金黃地鼠脂質(zhì)代謝相關蛋白的影響。(2)采用高脂喂養(yǎng)建立ApoE-/-動脈粥樣硬化小鼠模型,觀察口服不同劑量脈抒(低劑量:1 g/kg,中劑量:2 g/kg,高劑量:4 g/kg),阿托伐他汀(10 mg/kg),普羅布考(200 mg/kg)10周后ApoE-/-小鼠血脂水平的變化,每天灌胃給藥一次;分離主動脈全長,采用油紅O染色,觀察主動脈全長斑塊形成;對主動脈根部冰凍切片分別采用油紅O及天狼星紅染色,觀察主動脈根部斑塊形成;采用動態(tài)可視化微血管觀察系統(tǒng),觀察小鼠體內(nèi)白細胞-內(nèi)皮細胞黏附作用;用免疫組化方法檢測主動脈根部斑塊中巨噬細胞標記物CD68表達變化。(3)高脂膳食誘導高脂血癥金黃地鼠模型,給予不同劑量IMM-H007(12.5 mg/kg,25 mg/kg,50 mg/kg,100 mg/kg,200 mg/kg),辛伐他汀(6 mg/kg),非諾貝特(50 mg/kg),每天灌胃給藥一次,連續(xù)給藥8周,在此期間,每周記錄動物體重及攝食量。觀察給藥1,4,8周后血清TC,TG,LDL-C的變化;采用FPLC技術分離給藥8周后血清中VLDL,LDL,HDL,并檢測其所攜帶的膽固醇和甘油三酯-含量;測定肝臟TC,TG水平,計算肝指數(shù);制作肝臟石蠟切片做HE染色及冰凍切片油紅O染色。實驗結果(1)脈抒改善金黃地鼠脂代謝紊亂與正常對照組比,模型組血脂水平明顯升高;與模型組比,辛伐他汀(4 mg/kg)僅在給藥2周降低血清TC水平;辛伐他汀(4mg/kg)降低血清脂蛋白VLDL,LDL的膽固醇運載量,不影響全血粘度、血管內(nèi)皮舒張功能、肝臟TC,TG含量及肝指數(shù),但減少肝臟脂質(zhì)沉積。與模型組比,非諾貝特(54 mg/kg)在給藥2周降低血清TC,TG,non-HDL-C水平,給藥4周僅降低TG水平,給藥8周對血脂無影響;非諾貝特(54 mg/kg)降低血清脂蛋白VLDL、LDL的膽固醇運載量,不影響全血粘度、血管內(nèi)皮舒張功能,顯著降低肝臟TC,TG含量及肝指數(shù)和肝臟脂質(zhì)沉積。與模型組比,脈抒中、高劑量(2 g/kg,4 g/kg)在給藥2,4,8周均能明顯降低高脂血癥金黃地鼠血清TC含量,還可以顯著降低血清VLDL,LDL,HDL的膽固醇運載量,并且能夠降低高脂血癥金黃地鼠肝組織TC,TG的含量,抑制肝指數(shù),改善中切和高切全血粘度;脈抒中劑量(2 g/kg)還可以改善高脂血癥金黃地鼠的血管內(nèi)皮舒張功能;脈抒可能通過抑制肝臟CD36,SCD1蛋白表達,減少脂肪酸攝取和合成來改善高脂膳食引起的肝臟脂肪變性。(2)脈抒抑制ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化形成作用與正常對照組比,模型組血清血脂水平明顯升高;與模型組比,阿托伐他汀(10 mg/kg)不影響血脂水平、主動脈根部斑塊面積和微循環(huán)中白細胞滾動速率,降低主動脈全長斑塊與內(nèi)皮面積占比。天狼星紅染色顯示阿托伐他汀他汀(10 rng/kg)給藥組斑塊膠原纖維含量明顯較高,CD68免疫組化染色顯示主動脈根部斑塊中巨噬細胞含量也明顯減少。與模型組比,普羅布考(200 mg/kg)降低血清TC水平、主動脈全長斑塊與內(nèi)皮面積占比和主動脈根部斑塊面積,不影響微循環(huán)中白細胞滾動速率。天狼星紅染色顯示,普羅布考(200 mg/kg)給藥組斑塊膠原纖維含量明顯較高,CD68免疫組化染色顯示,動脈根部斑塊中巨噬細胞含量也明顯減少。與模型組比,脈抒高劑量(4 g/kg)降低血清TC水平,脈抒低、中、高劑量(1 g/kg,2 g/kg,4 g/kg)顯著降低apoE-/-小鼠血清TG水平;主動脈全長斑塊形成中,脈抒中、高劑量(2 g/kg,4 g/kg)條件下斑塊與內(nèi)皮面積占比均顯著降低;主動脈根部冰凍切片發(fā)現(xiàn),脈抒中、高劑量(2g/kg,4g/kg)給藥組主動脈根部斑塊面積顯著降低;脈抒高劑量(4 g/kg)給藥組微循環(huán)中白細胞滾動速率顯著-增加;天狼星紅染色顯示,與模型組相比脈抒低、中(1 g/kg,2 g/kg)劑量給藥組斑塊膠原纖維含量明顯較高;CD68免疫組化染色顯示,脈抒給藥組主動脈根部斑塊中巨噬細胞含量也明顯減少。(3)蟲草素衍生物IMM-H007改善金黃地鼠脂代謝紊亂與正常對照組比,模型組血清血脂水平明顯升高;與模型組比,辛伐他汀(6 mg/kg)給藥1周時,不影響血脂水平,給藥4周時,降低血清TC,TG,LDL-C水平,給藥8周時同樣降低血清TC,TG,LDL-C水平;辛伐他汀(50 mg/kg)降低脂蛋白VLDL所攜帶的膽固醇和甘油三酯含量及LDL所攜帶的甘油三酯含量;辛伐他汀(50 mg/kg)降低肝指數(shù),但未影響脂肪指數(shù)和肝臟TC,TG水平,可以改善高脂飲食引起的肝臟組織結構紊亂和脂肪堆積情況。與模型組比,非諾貝特(50 mg/kg)給藥組動物體重降低明顯,給藥1周時,降低血清TC,LDL-C水平,給藥4周時,降低血清TC,TG,LDL-C水平,給藥8周時同樣降低血清TC,TG,LDL-C水平;非諾貝特(50 mg/kg)降低脂蛋白VLDL,LDL所攜帶的膽固醇和甘油三酯水平;并且降低脂肪指數(shù)和肝臟TC,TC含量,增加肝指數(shù),明顯改善高脂飲食引起的肝臟組織結構紊亂和脂肪堆積情況。與模型組比,IMM-H007不同劑量給藥組,不影響動物體重和攝食;給藥1周時,僅IMM-H007(200 mg/kg)降低血清LDL-C水平,給藥4周時,IMM-H007(25 mg/kg,200 mg/kg)降低血清 TC,TG,LDL-C 水平,IMM-H007(100 mg/kg)降低血清 TG,LDL-C 水平,給藥 8 周時,IMM-H007(100 mg/kg,200 mg/kg)降低血清TC,TG,LDL-C水平;分離出血清脂蛋白后,IMM-H007(200 mg/kg)降低VLDL及LDL的膽固醇和甘油三酯運載量;IMM-H007不同劑量給藥組均可以降低肝指數(shù),但對脂肪指數(shù)無影響;IMM-H007(100 mg/kg,200mg/kg)降低肝臟TC,TG含量和明顯改善高脂飲食引起的肝臟組織結構紊亂和脂肪堆積情況。結論(1)脈抒具有改善高脂膳食誘導的金黃地鼠血脂代謝紊亂和肝臟脂肪沉積的作用,可能是通過抑制肝臟CD36,SCD1蛋白表達減少脂質(zhì)沉積。(2)脈抒有效抑制apoE-/-小鼠動脈粥樣硬化模型主動脈斑塊形成,可能與其減少斑塊內(nèi)巨噬細胞數(shù)量有關。(3)IMM-H007具有改善高脂膳食誘導的金黃地鼠血脂代謝紊亂和肝臟脂肪沉積的作用。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

與模型組比較，脈抒高、中劑量組（４邋ｇ／ｋｇ，邋２邋ｇ／ｋｇ）對高脂膳食引起的高脂逡逑血癥金黃地鼠肝臟ＨＭＧＣＲ，邋ＬＤＬＲ，邋ＳＲＥＢＰ２蛋白表達并沒有統(tǒng)計學上的差異。逡逑見圖７。逡逑Ａ邐ＭＳ邋ＭＳ邐Ｂ邐１．０－ｊ邐□邋Ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋Ｍｏｄｅｌ邋ＮＩｉ（］（１｜ｅ邋，Ｉｊｇ｜）邐．邐ｔ邐■邋Ｍｏｄｔｌ逡逑Ｉ邐邐邐｜邐ｆ０８＇邐Ｃ３邋ＭＳ邋Ｍｉｄｄｌｅ逡逑瞧ｆｆ邋ｒｆｔｒ叫逡逑＾０４邋｜邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋｜邋Ｉ逡逑：：：ｃ邋＾ＪｌｌｌＵｌＵ逡逑圖７．脈抒不影響高脂血癥金黃地鼠肝臟膽固醇代謝相關蛋白ＳＲＥＢＰ２，邋ＬＤＬＲ，逡逑ＨＭＧＣＲ的表達。Ａ為具有代表性的一次實驗結果；Ｂ為Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ蛋白條帶逡逑信號密度值，每組�。祩�樣品混合后上樣，平均值±標準誤（ｎ＝５）。逡逑３７逡逑

高（Ｐ＜邋０．０５，尸＜０．０５）；與模型組比，脈抒高、中劑量組金黃地鼠肝臟ＣＤ３６逡逑蛋白表達量降低（尸＜０．０５，Ｐ＜０．０５），另外，脈抒高、中劑量組（４ｇ／ｋｇ，２ｇ／ｋｇ）逡逑金黃地鼠肝臟ＳＣＤ１蛋白表達量也降低（尸＜０．０５，尸＜０．０５）。見圖８。逡逑Ａ邐Ｂ邋ｉ．ｏｎ邐終逡逑ｔＣＺｌ邋Ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑■邋Ｍｏｄｅｌ逡逑您邋ＭＳ邋Ｍｉｄｄｌｅ逡逑ｒ逡逑ＣＤ３６／Ａｃｔｉｎ邐ＳＣＤ１／Ａｃｔｉｎ逡逑圖８．脈抒降低高脂血癥金黃地鼠肝臟脂肪酸代謝相關蛋白ＣＤ３６，邋ＳＣＤｌ的表達逡逑（ｎ＝５）。Ａ為具有代表性的一次實驗結果；Ｂ為Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ蛋白條帶信號密逡逑度值，每組�。祩�樣品混合后上樣，平均值±標準誤（ｒｉ＝５）。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋８．邋Ｍａｉｓｈｕ邋ｒｅｄｕｃｅｓ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ｆａｔｔｙ邋ａｃｉｄｓ邋ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ－ｒｅｌａｔｅｄ邋ＣＤ３６逡逑ａｎｄ邋ＳＣＤｌ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｌｉｖｅｒｓ邋ｏｆ邋ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉｃ邋ｇｏｌｄｅｎ邋ｈａｍｓｔｅｒｓ．邋Ａ）邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔｓ邋ａｎｄ逡逑ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｒｙ邋ｏｆ邋ＣＤ３６邋ａｎｄ邋ＳＣＤｌ．邋Ｂ）邋Ｄａｔａ邋ａｒｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ邋ａｓ邋ｍｅａｎ±邋ＳＥＭ邋（ｎ＝５）．逡逑＃＾＜０．０５

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 田鎏;張昌軍;刁紅錄;;脂肪酸結合蛋白研究進展[J];生命科學;2017年02期

2 郭宇超;劉震宇;張抒揚;;家族性高膽固醇血癥的藥物治療現(xiàn)狀和進展[J];國際藥學研究雜志;2017年02期

3 Rahul Chaudhary;Jalaj Garg;Neeraj Shah;Andrew Sumner;;PCSK9 inhibitors: A new era of lipid lowering therapy[J];World Journal of Cardiology;2017年02期

4 楊春;徐軍;梁有峰;;前蛋白轉化酶枯草溶菌素9單克隆抗體與脂調(diào)節(jié)相關研究進展[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2016年10期

5 胡慧明;朱彥陳;朱巧巧;邵峰;石強;龐敏霞;蘇潔;陳素紅;呂圭源;;實驗性高脂血癥動物模型比較分析[J];中國中藥雜志;2016年20期

6 張明;陳珍;;山楂黃酮提取物降血脂研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2016年16期

7 尹絹;寇光;邱元芝;彭樂;魏群;胡堅;陳發(fā)秀;;依澤替米貝對高脂血癥致老年血管內(nèi)皮功能破壞的作用及機制探討[J];重慶醫(yī)學;2016年19期

8 關榮春;;高脂血癥患者糖化血紅蛋白及血流變學的分析研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學院學報;2016年08期

9 王杰;倫語;荊兆海;楊光輝;王顏剛;;非他汀類藥物在家族性高膽固醇血癥的研究新進展[J];中國新藥雜志;2016年05期

10 熊友誼;;三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合應用對高脂血癥大鼠血液流變學的影響[J];安徽科技學院學報;2016年02期

本文編號：2741746