發(fā)布時間：2020-07-05 14:42

【摘要】：覆盆子是薔薇科懸鉤子屬植物華東覆盆子的近成熟干燥果實,具有“益腎、固精、縮尿”之功效。課題組前期采用水提醇沉法從覆盆子中分離純化得到4個糖蛋白分子,通過體外實驗研究表明,其中3號糖蛋白分子(GP3)的抗氧化活性最強。為了進一步探討覆盆子的抗衰老活性,本論文以覆盆子糖蛋白GP3為研究對象,結(jié)合Klotho基因在抗衰老方面的重要作用,系統(tǒng)研究覆盆子糖蛋白GP3的抗衰老活性及其對小鼠腎組織中Klotho基因表達的調(diào)控作用。研究內(nèi)容主要分為以下兩個方面:1、覆盆子糖蛋白GP3體外抗衰老活性研究。測定糖蛋白GP3的總還原能力和羥自由基清除率以及對TCMK-1細胞作用后SOD、GSH-Px、CAT、MDA的含量。通過CCK-8法和β-半乳糖苷酶染色法分別測定糖蛋白GP3對H_2O_2損傷下TCMK-1、NRK-52E細胞的存活率及抗衰老活性的影響。結(jié)果表明,糖蛋白GP3能增加氧化損傷狀態(tài)下的TCMK-1、NRK-52E細胞的存活率,并且能明顯改善TCMK-1細胞內(nèi)SOD、GSH-Px、CAT、MDA的生理指標,存在一定的量效關系。2、覆盆子糖蛋白GP3體內(nèi)抗衰老活性及其對Klotho基因表達的調(diào)控研究。通過腹腔注射D-半乳糖的方法建立小鼠衰老模型,確定建模成功后口服給藥30天,處死小鼠。測定臟器系數(shù)及小鼠血清、心臟、肝臟、脾臟、腎臟的生理學指標,并對肝腎組織進行病理切片,同時提取小鼠腎臟中的總RNA和蛋白質(zhì),并通過RT-PCR和Western-blot方法檢測Klotho基因的表達量。結(jié)果表明,糖蛋白GP3能有效改善衰老小鼠腎組織器官的病理狀態(tài),使腎儲備能力得到修復,從而起到補腎的作用,并且能明顯改善衰老小鼠體內(nèi)SOD、GSH-Px、CAT、MDA的生理指標,具有明顯的抗衰老活性;同時還能明顯增加小鼠腎組織中抗衰老基因Klotho的表達量。綜上所述,覆盆子糖蛋白GP3具有顯著的抗氧化及抗衰老活性,對抗衰老基因Klotho起到明顯的調(diào)節(jié)作用,由此推斷糖蛋白可能是覆盆子延緩衰老的物質(zhì)基礎,而覆盆子抗衰老的機制可能是:(1)通過清除體內(nèi)有害的自由基,從而改善機體器官的生理狀態(tài),使各組織器官的功能得到修復,特別是對腎組織的修復可能與抗衰老作用直接相關;(2)通過調(diào)節(jié)體內(nèi)抗衰老基因Klotho的表達水平而實現(xiàn)其抗衰老作用。這一結(jié)果為覆盆子作為傳統(tǒng)抗衰延壽方中的重要一員提供科學依據(jù),同時也為“補腎是抗衰老的基本途徑”這一中醫(yī)觀點提供實驗基礎。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1.1 膜型 Klotho 與分泌型 Klotho 的示意圖[17]Klotho 基因表達的調(diào)控及其功能tho 基因在調(diào)控衰老以及增齡性相關疾病中扮演著必不可少的角色Klotho 基因能調(diào)節(jié)氧化應激，防止氧化損傷。例如，Klotho 基因能氧化損傷后人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）的存活率，增強細胞的減少細胞炎癥反應、衰老和凋亡[18-19]；相反，Klotho 基因缺陷不馬神經(jīng)元的氧化損傷，而且能引起體內(nèi)的磷酸鹽滯留[20]。另外，CKD）野生型小鼠中檢測到腎臟中具有較低的 Klotho 水平，而 K達轉(zhuǎn)基因小鼠腎臟的功能得到提高[21]。同樣，在自發(fā)型高血壓大注損傷模型大鼠[22]、糖尿病腎病大鼠[23]、慢性心衰大鼠[24]以及高下的大鼠[25]中 Klotho 基因的表達量減少。研究已經(jīng)表明，增加小因表達水平能夠延長壽命（約為正常小鼠的 20~30%）[26]，增強認抗腎臟相關疾病的發(fā)生[28-30]，對肺部疾病[31]、血管鈣化[32]、糖尿病[34]都具有改善作用，同時也能作為體內(nèi)腫瘤抑制劑等[35-38]，另外

圖 2.1 紫外檢測覆盆子糖蛋白M 1 2圖 2.2 SDS-PAGE 分析覆盆子糖蛋白 GP3（M：蛋白質(zhì) Marker；1：考馬斯亮藍染色；高碘酸－希夫試劑染色）2.4 覆盆子糖蛋白 GP3 總還原能力及對羥自由基清除率實驗的測

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

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本文編號：2742741