發(fā)布時(shí)間：2020-07-05 13:33

【摘要】：陰地蕨(Botrychium ternatum(Thunb)Sw.)屬于陰地蕨科陰地蕨屬植物,是一種用途廣泛的民間中草藥,在傳統(tǒng)中醫(yī)中,陰地蕨歸肝經(jīng)、肺經(jīng),性味甘平、味淡,具有清熱解毒、平肝息風(fēng)、止咳、止血、明目去翳的作用,主治小兒高熱驚搐、肺熱咳嗽、百日咳、癲狂、痢疾、疔瘡癰毒、毒蛇咬傷、目赤火熱、目生翳障等。陰地蕨全株含有陰地蕨素、木犀草素等成分,其中大部分有效成分尚未完全明確。本論文對(duì)陰地蕨展開化學(xué)成分提取分離及生物活性的研究,主要研究結(jié)果如下:1、陰地蕨不同部位乙醇提取物黃酮與酚酸含量分析和抗氧化活性研究:采用75%乙醇加熱提取,測定提取率;以蘆丁、沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品,用分光光度法測定了陰地蕨不同部位的黃酮和酚酸含量;利用分光光度法測定陰地蕨不同部位對(duì)DPPH、ABTS自由基的清除能力以及對(duì)Fe的還原能力。結(jié)果顯示,陰地蕨全株各部位的乙醇提取率均超過20%,其中地上部分提取率達(dá)44.6%;不同部位陰地蕨總黃酮和酚酸含量有一定差異,兩類物質(zhì)地上部分均高于地下部分,地上部分的總黃酮含量高于酚酸含量,而地下部分總黃酮含量則低于酚酸含量。陰地蕨乙醇提取物的抗氧化能力隨總黃酮及酚酸含量的升高而增強(qiáng),但是地上部分對(duì)于DPPH自由基清除率高于地下部分,而對(duì)于ABTS自由基的清除率則低于地下部分,對(duì)于Fe的還原能力,兩部分表現(xiàn)差異不大。2、陰地蕨多糖含量分析及生物活性研究:采用煎煮、濃縮、醇提的方法提取陰地蕨全草粗多糖,計(jì)算提取率;以葡萄糖、牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品,用分光光度法測定了陰地蕨粗多糖中多糖和蛋白質(zhì)含量;利用分光光度法測定陰地蕨粗多糖的抗氧化能力;利用圓紙片擴(kuò)散法測定陰地蕨粗多糖的抑菌能力;利用MTT法測定陰地蕨粗多糖的抗腫瘤能力。結(jié)果顯示,陰地蕨全株均含有多糖物質(zhì)和蛋白質(zhì),其中多糖含量達(dá)20.60%,是蛋白質(zhì)含量的5倍。陰地蕨粗多糖的抗氧化能力隨多糖含量的升高而增強(qiáng),但增強(qiáng)幅度有限,其對(duì)于ABTS自由基清除能力高于對(duì)DPPH自由基清除能力。陰地蕨粗多糖對(duì)于大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑制作用,其中抑制大腸桿菌的能力更強(qiáng)。陰地蕨粗多糖對(duì)于人宮頸癌(Hela)細(xì)胞和人肺癌(A-549)細(xì)胞的增殖均具有抑制作用,其中對(duì)于肺癌細(xì)胞增殖的抑制作用更強(qiáng);在相同的培養(yǎng)時(shí)間下,其抑制效果隨給藥濃度的增加而增強(qiáng);在相同給藥濃度的條件下,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長,其抑制效果出現(xiàn)了先增強(qiáng)后減弱的趨勢(shì)。3、陰地蕨不同有機(jī)相的提取及生物活性研究:采用95%乙醇浸泡、低壓旋蒸濃縮的方法對(duì)陰地蕨全草粉末進(jìn)行萃取,繼而分別使用石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷三種有機(jī)溶劑進(jìn)行二次萃取,得不同有機(jī)相提取物。對(duì)不同提取物進(jìn)行生物活性研究,抗氧化活性研究表明:乙酸乙酯(EtOAc)部分提取物對(duì)DPPH、ABTS自由基清除能力均大于石油醚(PE)部分;抗菌活性研究表明:EtOAc部分和PE部分提取物對(duì)大腸桿菌及金黃色葡萄球菌均有抑制作用,兩者對(duì)大腸桿菌的抑制效果均優(yōu)于金黃色葡萄球菌,對(duì)大腸桿菌的抑菌活性方面,PE部分優(yōu)于EtOAc部分,而對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性方面,低濃度條件下PE部分優(yōu)于EtOAc部分,高濃度下則相反;抗腫瘤細(xì)胞活性研究表明:PE和EtOAc部分提取物均對(duì)人宮頸癌(Hela)細(xì)胞和人肺癌(A-549)細(xì)胞具有抑制作用,且高濃度(320μg/mL)下抑制效果明顯,同一濃度下的抗腫瘤活性隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長,表現(xiàn)出先增強(qiáng)后減弱的趨勢(shì)。4、陰地蕨提取物化學(xué)成分分離與結(jié)構(gòu)鑒定:運(yùn)用硅膠柱分段、MCI樹脂去除色素、MPFC分離、TLC分離及初步檢測、重結(jié)晶提純等方法對(duì)陰地蕨石油醚、乙酸乙酯和二氯甲烷部分提取物進(jìn)行分離,得到11種化合物,用核磁氫譜、碳譜、二維譜、質(zhì)譜等方法鑒定了10個(gè)化合物,確定了其中9個(gè)化合物的結(jié)構(gòu),除木犀草素、胡蘿卜苷和β-谷甾醇外,其余7個(gè)均為陰地蕨首次分離,分別是:新松香酸、2',3'-二羥基十五烷酸丙酯、山崳酸環(huán)氧乙烷甲酯、對(duì)羥基苯甲酸、苯十三酸甲酯、hopane-22,29-diolmonoacetate以及結(jié)構(gòu)待定的YDJ1。陰地蕨提取物中分離得到的這些化合物,分別屬于黃酮類、酚酸類、長鏈脂肪酸酯類、芳香酯類、甾體類和萜類。本文對(duì)明確陰地蕨有效成分,闡明其藥用價(jià)值以及對(duì)其進(jìn)一步開發(fā)利用有一定的指導(dǎo)意義。
【學(xué)位授予單位】：上海師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284
【圖文】：

圖 2-1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2-1 The standard curve of Rutin.3 不同部位陰地蕨乙醇提取物酚酸含量的測定1、沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取 12 支 4mL 試管編號(hào) a~f 和 0~5，試管 a~f 中分別加入沒食子酸標(biāo)品 1.0，1.4，1.8mL，然后再分別以甲醇溶液補(bǔ)足 2mL 混勻，每管取 60對(duì)應(yīng)新的試管 0~5 中，加入 1.54 mL 超純水，再加入 Folin-CiocalteL（福林試劑與水的體積比為1:2），避光振蕩3min后，加300μL20%的N，隨后在 30℃下避光水浴 1h，以 0 號(hào)試管為空白對(duì)照，測定在 750nm OD 值[99]。對(duì) OD 值與沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量分?jǐn)?shù)作回歸處理，得回歸6.042x - 0.0069，R2=0.9896，線性良好，見圖 2-2。2、酚酸含量的測定將提取的干樣品加入甲醇溶液配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 1 mg/mL 的待測樣品

圖 2-2 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2-2 The standard curve of Gallic Acid2 不同部位陰地蕨乙醇提取物抗氧化活性的測定.1 不同部位陰地蕨對(duì) DPPH 自由基清除能力的測定1、DPPH 溶液的制備：精密稱取 19.7mgDPPH 粉末溶于 250 mL 無水?dāng)嚢枞芙�，室溫下避光貯存。2、抗壞血酸（Vc）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作（以 Vc 作為陽性對(duì)照）：取 6 支 2mL 編號(hào)為 0~5 的試管，分別加入 0、10、20、30、40、50 μL 0.1mC，再分別用純水補(bǔ)足 500μL，然后各加入 500 μL 的 DPPH 溶液，搖靜置 30 min。以 0 號(hào)試管為空白對(duì)照，測定 517nm 波長下的 OD 值。3、樣品測定

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2 戴錫玲;曹建國;王全喜;;中國蕨類植物孢子形態(tài)研究Ⅸ.陰地蕨科[J];西北植物學(xué)報(bào);2010年09期

3 焦瑜,王士俊;三種國產(chǎn)陰地蕨科植物葉的表皮構(gòu)造[J];植物學(xué)通報(bào);2000年04期

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本文編號(hào)：2742672