發(fā)布時間：2024-07-09 06:00

　　目的結(jié)合體內(nèi)實驗和體外實驗探討不同提取方案的蒿鱉養(yǎng)陰軟堅方對酒精性肝纖維化的作用機(jī)制,并探討其通過激活Nrf2通路誘導(dǎo)下游抗氧化反應(yīng)蛋白γ-GCS的表達(dá),而抑制酒精性肝纖維化,進(jìn)一步推動鱉養(yǎng)陰軟堅方成功應(yīng)用于臨床,為眾多酒精性肝纖維化患者提供更為健康、有效、副作用小的防治藥物。本課題組結(jié)合體內(nèi)、外兩大實驗部分,根據(jù)不同提取方案的復(fù)方給藥后,分析大鼠肝組織中膠原蛋白含量,觀察乙醛刺激后的LX-2細(xì)胞生長、增殖的情況,研究酒精性肝纖維化大鼠肝組織中以及乙醛刺激后的LX-2細(xì)胞中Nrf2/γ-GCS通路中主要蛋白Nrf2、γ-GCS的表達(dá)。方法1、從軍事科學(xué)院購買健康Wistar大鼠體重在200²40g的共80只,雌性和雄性各占一半。每日灌胃相應(yīng)濃度酒精并輔助大鼠皮下注射40%CCL4-花生油以及添加高脂飼料進(jìn)行酒精性肝纖維化模型造模。將大鼠按體重隨機(jī)區(qū)組分組法分為完全水提低劑量組(2.59g.kg-1.d-1)、完全水提高劑量組(8.2g.kg-1.d-1)、先水后醇95%低劑量組(2.59g.kg-1.d-1)、先水后醇95%高劑量組(8.2g.kg-1.d-1)、...

【文章頁數(shù)】：146 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1蛋白定量標(biāo)準(zhǔn)曲線

⑦設(shè)定酶標(biāo)儀波長為570nm，測定96孔板各孔的吸光度值，根據(jù)蛋白標(biāo)準(zhǔn)品濃度與所檢測的OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并利用標(biāo)準(zhǔn)曲線及其公式，根據(jù)樣品的OD值計算出樣品的總蛋白濃度以及電泳上樣體積。見圖1。表1蛋白定量測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線蛋白濃度(mg/mL)00.0250.050.....

圖2Nrf2蛋白免疫組化染色結(jié)果(×400)

實驗結(jié)果3.1體內(nèi)實驗結(jié)果3.1.1粉末提取方案的蒿鱉養(yǎng)陰軟堅方對酒精性肝纖維化模型肝組織中的免疫組化的影響3.1.1.1Nrf2蛋白免疫組化染色結(jié)果ABC

圖3γ-GCS蛋白免疫組化染色結(jié)果(×400)

正常組在視野范圍內(nèi)未見棕黃色染色，即無Nrf2蛋白表達(dá)。模型組在胞漿內(nèi)均可見棕黃色染色，但胞核內(nèi)未見其表達(dá)。中劑量組胞核內(nèi)陽性染色分布較少，多見炎癥細(xì)胞浸潤。高劑量組陽性染色多數(shù)在胞核，胞漿有少量分布，間質(zhì)細(xì)胞也有少量分布。秋水仙堿組在胞漿和胞核內(nèi)均可見棕黃色染色，以肝細(xì)胞核....

圖4肝組織羥脯氨酸Hyp標(biāo)準(zhǔn)曲線

正常組在視野范圍內(nèi)未見棕黃色染色，即無γ-GCS蛋白表達(dá)。模型組在胞漿內(nèi)均可見棕黃色染色，但胞核內(nèi)未見其表達(dá)，可見大量竇內(nèi)皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞增生。粉末中、高劑量組在胞漿、胞核內(nèi)均可見棕黃色染色，可見炎癥細(xì)胞浸潤。但兩個劑量組染色差別不大。秋水仙堿組在胞漿和胞核內(nèi)均可見棕黃色染色....

本文編號：4004506