發(fā)布時間：2020-11-07 13:02

　　 本研究從湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院試驗田采集油菜湘油15盛花期植株的根、莖和葉,采用純培養(yǎng)法對內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行分離純化,采用基于16S rRNA基因序列的系統(tǒng)發(fā)育分析法對內(nèi)生菌株的多樣性進(jìn)行分析研究,利用瓊脂擴散法對內(nèi)生菌株進(jìn)行抗菌活性篩選,利用平板對峙法對油菜菌核病病原菌核盤菌的拮抗菌進(jìn)行篩選,繼而對其拮抗機理進(jìn)行初步研究。為該地區(qū)油菜內(nèi)生細(xì)菌資源的進(jìn)一步研究、及其在油菜菌核病生物防治等方面的應(yīng)用提供實驗依據(jù)和理論指導(dǎo)。1.選用肉湯瓊脂培養(yǎng)基(LBA)、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(NA)、牛肉膏-蛋白胨培養(yǎng)基(牛)和10%莖桿汁特殊因子培養(yǎng)基(T)為分離培養(yǎng)基,從油菜根莖葉樣品中共分離純化得到68株內(nèi)生細(xì)菌。比較菌落形態(tài),篩選出18株表觀差異較大的內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行下一步實驗。2.對代表性內(nèi)生菌株進(jìn)行16S rRNA基因序列測定和系統(tǒng)發(fā)育分析,結(jié)果表明,18株內(nèi)生細(xì)菌具有較高的類群、遺傳和物種多樣性,可分為14個物種(species),分屬于細(xì)菌域(Bacteria)的2個門(Firmicutes,Actinobacteria)的3個科(Bacillaceae,Pseudomonadaceae,Enterobacteriaceae),4個屬:芽孢桿菌屬(Bacillus),假單胞菌屬(Pseudomonas),拉恩氏菌屬(Rahnella)和埃希氏菌屬(Escherichia)。其中芽孢桿菌屬和假單胞菌屬菌株分別有8株和7株,為優(yōu)勢類群。3.選用枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、藤黃八疊球菌、大腸埃希菌、變形桿菌和黑曲霉作為指示菌,采用瓊脂擴散法對68株內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行抗菌活性篩選,得到7株抗菌活性較強的菌株(Y171004、Y172014、Y173005、Y174007、Y174017、Y177001、Y177002),并對其進(jìn)行生理生化特征研究。菌株Y171004、Y172014、Y174007、Y177001、Y177002為芽孢桿菌屬,菌株Y173005為假單胞菌屬,菌株Y174017為埃希氏菌屬。以上內(nèi)生細(xì)菌的成功分離,一定程度上填補了油菜內(nèi)生菌的研究空白,為研究有益菌株以及油菜與內(nèi)生菌之間的聯(lián)系提供了一定的參考。4.利用平板對峙法對核盤菌進(jìn)行拮抗實驗,篩選出2株具有較強拮抗能力的菌株,并對其拮抗機理進(jìn)行了初步研究。菌株Y171004和Y177002對核盤菌具有較好的拮抗作用。在光學(xué)顯微鏡下觀察受到抑制的病原菌,發(fā)現(xiàn)其菌絲均有不同程度的皺縮或變粗、變色。菌株Y171004的發(fā)酵液蛋白粗提物具有抗菌活性,經(jīng)95℃水浴30 min后抗菌活性喪失,說明其抗菌活性蛋白耐高溫性差。菌株Y177002的發(fā)酵液蛋白粗提物不具有抗菌活性,說明其抗菌活性物質(zhì)是非蛋白類。經(jīng)SDS-PAGE分析,菌株Y171004抑菌活性蛋白的分子量約為45~65KDa。
【學(xué)位單位】：吉首大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S435.654;S476.1
【部分圖文】：

第 1 章 前言對分離得到的內(nèi)生細(xì)菌的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行抗菌活性篩選，篩選出一批產(chǎn)抗質(zhì)的菌株，為各個領(lǐng)域?qū)τ筒藘?nèi)生細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物的開發(fā)利用打下一 菌核病拮抗菌的篩選及拮抗機理的初步研究核盤菌為病原菌，采用平板對峙法，用抗菌活性菌株做出發(fā)菌株，進(jìn)行抗菌抗菌篩選，從中篩選出一批拮抗菌株，為油菜菌核病的生物防治研定的理論與實踐基礎(chǔ)。技術(shù)路線究技術(shù)路線圖如下（圖 1-4-1）。

圖 2.2.1 8 株厚壁菌門菌株基于 16S rRNA 基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹 2.2.1 Phylogenetic tree constructed from 16s rRNA gene sequences of 8 Firmicute

圖 2.2.1 8 株厚壁菌門菌株基于 16S rRNA 基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 2.2.1 Phylogenetic tree constructed from 16s rRNA gene sequences of 8 Firmicutes strains
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2873984