發(fā)布時間：2024-07-01 20:32

　　小菜蛾(Plutella xylostella L.)是世界性十字花科蔬菜的重要害蟲,也是抗藥性產(chǎn)生和發(fā)展嚴(yán)重的害蟲之一。由于其世代重疊嚴(yán)重,繁殖力強(qiáng),加上一些地區(qū)田間不合理的用藥,導(dǎo)致田間小菜蛾抗藥性發(fā)展迅速且抗性背景復(fù)雜,這為該蟲的化學(xué)防治造成了較大困難。氟蟲雙酰胺作為新型魚尼丁受體激活類殺蟲劑,對鱗翅目害蟲高效,對哺乳動物低毒、安全,作用于昆蟲后可使調(diào)控鈣離子釋放的魚尼丁受體通道持續(xù)開放,導(dǎo)致細(xì)胞中鈣離子濃度上升,持續(xù)的鈣離子釋放會引起蟲體不斷的收縮、嘔吐、脫糞,進(jìn)而停止進(jìn)食,最終導(dǎo)致蟲體死亡。隨著氟蟲雙酰胺的應(yīng)用,害蟲對該藥劑的抗藥性問題也日益受到關(guān)注。為了了解小菜蛾對氟蟲雙酰胺的抗性發(fā)展情況,本文通過室內(nèi)抗性汰選及其生物適合度的研究,分析了小菜蛾對氟蟲雙酰胺的抗性風(fēng)險；同時以相對敏感品系、氟蟲雙酰胺抗性品系和田間抗性種群小菜蛾為材料,研究了抗性產(chǎn)生的可能分子機(jī)制及基因突變頻率,旨在為該藥劑的科學(xué)使用提供指導(dǎo)。研究結(jié)果如下： 1.采用點滴法,測定了小菜蛾3齡幼蟲對氟蟲雙酰胺三個品系/種群的毒力,結(jié)果表明,氟蟲雙酰胺對相對敏感品系(S)小菜蛾的72h LD50為0.921μg/g...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 魚尼丁受體(RyR)及魚尼丁受體激活劑類殺蟲劑的研究進(jìn)展
        1.1.1 魚尼丁受體的發(fā)展史
        1.1.2 魚尼丁受體的結(jié)構(gòu)
        1.1.3 魚尼丁受體的類型
        1.1.4 化合物對魚尼丁受體功能的調(diào)節(jié)
        1.1.5 作用于魚尼丁受體殺蟲劑的研究概況
            1.1.5.1 氟蟲雙酰胺(flubendiamide)
            1.1.5.2 氟蟲雙酰胺的理化性質(zhì)
            1.1.5.3 氟蟲雙酰胺的毒性
        1.1.6 魚尼丁受體激活劑類殺蟲劑的作用機(jī)制
    1.2 小菜蛾的生物學(xué)及其抗藥性研究進(jìn)展
        1.2.1 小菜蛾的生物學(xué)及危害
        1.2.2 小菜蛾的抗藥性現(xiàn)狀
        1.2.3 小菜蛾的抗藥性機(jī)理研究
    1.3 魚尼丁受體基因突變頻率檢測技術(shù)
        1.3.1 Bi-PASA技術(shù)原理
        1.3.2 Bi-PASA技術(shù)特點及應(yīng)用
    1.4 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 供試材料
        2.1.1 供試?yán)ハx
        2.1.2 供試藥劑及化學(xué)試劑
        2.1.3 主要分子試劑
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 試劑及培養(yǎng)基的配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 小菜蛾的飼養(yǎng)
        2.2.2 氟蟲雙酰胺對小菜蛾的毒力測定及抗性選育
        2.2.3 交互抗性的測定
        2.2.4 構(gòu)建種群生命表的方法
        2.2.5 抗性現(xiàn)實遺傳力(h²)估算與抗性風(fēng)險評估
    2.3 PCR及Bi-PASA等方法
        2.3.1 小菜蛾RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄及PCR擴(kuò)增
            2.3.1.1 小菜蛾RNA提取
            2.3.1.2 小菜蛾總RNA的檢測
                2.3.1.2.1 小菜蛾總RNA純度檢測—分光光度法
                2.3.1.2.2 小菜蛾總RNA完整性的鑒定—瓊脂糖凝膠電泳
            2.3.1.3 引物的設(shè)計
            2.3.1.4 小菜蛾第一鏈cDNA合成
            2.3.1.5 PCR擴(kuò)增
            2.3.1.6 產(chǎn)物純化、鏈接轉(zhuǎn)化與測序
                2.3.1.6.1 產(chǎn)物的回收與純化
                2.3.1.6.2 載體連接
                2.3.1.6.3 轉(zhuǎn)化、擴(kuò)大培養(yǎng)及測序
            2.3.1.7 分析軟件
        2.3.2 小菜蛾基因突變頻率的檢測
            2.3.2.1 Bi-PASA引物設(shè)計
            2.3.2.2 小菜蛾基因組DNA提取
            2.3.2.3 Bi-PASA的檢測
        2.3.3 不同品系小菜蛾對RyR的表達(dá)量
            2.3.3.1 熒光定量PCR的引物設(shè)計
            2.3.3.2 熒光定量PCR
3 結(jié)果與分析
    3.1 氟蟲雙酰胺對三種小菜蛾品系/種群的毒力測定
    3.2 小菜蛾對氟蟲雙酰胺的抗性發(fā)展規(guī)律及交互抗性
        3.2.1 氟蟲雙酰胺對小菜蛾的抗性汰選
        3.2.2 小菜蛾氟蟲雙酰胺抗性品系對其他藥劑的交互抗性
    3.3 小菜蛾氟蟲雙酰胺抗性品系的生物學(xué)特性
    3.4 小菜蛾抗氟蟲雙酰胺的抗性現(xiàn)實遺傳力和風(fēng)險評估
        3.4.1 小菜蛾對氟蟲雙酰胺的抗性現(xiàn)實遺傳力
        3.4.2 小菜蛾對氟蟲雙酰胺的抗性風(fēng)險評估
    3.5 小菜蛾魚尼丁受體基因序列與基因突變頻率檢測
        3.5.1 小菜蛾魚尼丁受體C-末端的克隆及基因序列比對分析
        3.5.2 小菜蛾RyR基因突變頻率檢測結(jié)果分析
    3.6 RyR在不同品系小菜蛾中的表達(dá)量
        3.6.1 小菜蛾總RNA質(zhì)量檢測(PAGE法)
        3.6.2 小菜蛾總RNA純度和濃度的檢測
        3.6.3 熒光定量PCR的特異性和重復(fù)性
        3.6.4 擴(kuò)增效率
        3.6.5 不同品系小菜蛾RyR基因的表達(dá)量
4 討論
    4.1 小菜蛾對氟蟲雙酰胺的抗性發(fā)展規(guī)律
    4.2 抗氟蟲雙酰胺小菜蛾品系的生物學(xué)特性
    4.3 小菜蛾對氟蟲雙酰胺的抗性風(fēng)險評估
    4.4 RyR基因突變頻率的檢測
    4.5 不同品系RyR基因表達(dá)量的檢測
    4.6 有待繼續(xù)研究的問題
5 結(jié)論
    5.1 小菜蛾對氟蟲雙酰胺的抗性發(fā)展規(guī)律及風(fēng)險評估
    5.2 抗氟蟲雙酰胺小菜蛾的生物適合度
    5.3 抗氟蟲雙酰胺小菜蛾RyR的基因突變頻率
    5.4 不同品系RyR的基因表達(dá)量的差異
本文創(chuàng)新之處
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號：3999146