本文是一篇專業(yè)的醫(yī)學(xué)論文，主要是NF-κB信號(hào)通路的影響及其臨床意義進(jìn)行闡述，詳情請(qǐng)看下面的介紹。

　　本研究基于中醫(yī)學(xué)理論及筆者的臨床經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展，通過(guò)制備內(nèi)毒素型急性肺損傷兔模型，觀察中藥制劑血必凈注射液對(duì)ALI肺組織NF-κB的活性變化，探討血必凈注射液是否通過(guò)拮抗內(nèi)毒素、抑制炎性介質(zhì)釋放和保護(hù)內(nèi)皮功能等機(jī)制而發(fā)揮治療作用，為中西醫(yī)結(jié)合方法治療ALI提供理論依據(jù)，提高搶救成功率。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　脂多糖、內(nèi)毒素脂多糖（LPS）及試劑盒購(gòu)自廣州晶美生物技術(shù)有限公司（代理美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品）。NF-κB的同源結(jié)合序列由北京奧科生物技術(shù)公司合成并行末端生物素標(biāo)記。血必凈注射液由天津紅日藥業(yè)股份有限公司提供，批準(zhǔn)文號(hào)：Z20040033，每支10 mL。有效成分是由中藥原料藥紅花、赤芍、川芎、丹參、當(dāng)歸中提取，其提取物的有效成分包括紅花黃色素A、川芎嗪、丹參素、阿魏酸、芍藥苷、原兒茶醛等。其中紅花黃色素A濃度>0.5 mg/mL，芍藥苷濃度>1.0 mg/mL，阿魏酸濃度>0.01 mg/mL。

　　1.2 動(dòng)物模型及分組

　　1.2.1 分組 取新西蘭兔80只（雄性），體重2.0～2.5 kg，按隨機(jī)方法分為四組：空白對(duì)照組、單純急性肺損傷（LPS）組、單純血必凈（XBJ）組、血必凈治療（LPS+XBJ）組，各20只。

　　1.2.2 動(dòng)物模型制作 1%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔麻醉，經(jīng)耳緣靜脈注入內(nèi)毒素LPS，制成急性肺損傷的動(dòng)物模型。

　　1.2.3 干預(yù)方法 空白對(duì)照組給予生理鹽水10 mL注射，LPS組僅注射LPS 5 mg/kg，XBJ組僅注射血必凈5 mL/kg，LPS+XBJ組注射LPS 5 mg/kg+血必凈5 mL/kg靜脈注射。

　　1.3 觀察指標(biāo)及標(biāo)準(zhǔn)

　　1.3.1 血流動(dòng)力學(xué)變化 通過(guò)生物多導(dǎo)儀觀察實(shí)驗(yàn)前后血流動(dòng)力學(xué)變化，包括呼吸頻率、心率、體溫、動(dòng)脈和靜脈氧分壓、體重等，在所需觀察時(shí)間內(nèi)抽取血液標(biāo)本。

　　1.3.2 動(dòng)物模型制作成功的病理指標(biāo) LPS致傷后半小時(shí)處死動(dòng)物，肺臟體積增大，表面可見(jiàn)大小不等的暗紅色斑片狀病灶，切面可有淡紅或白色泡沫樣液體溢出；光鏡下觀察，肺組織內(nèi)有白細(xì)胞浸潤(rùn)，可見(jiàn)肺間質(zhì)及肺泡水腫，肺出血明顯。肺組織濕/干（W/D）比值明顯升高。

　　1.3.3 肺組織病理形態(tài)變化 于12、24、36、48 h分批處死后分離肺組織后，取右肺組織進(jìn)行組織切片在光鏡、電鏡觀察病理形態(tài)變化。

　　1.3.4 NF-κB活性測(cè)定 分離左肺組織，采用4℃生理鹽水進(jìn)行左肺灌洗，收集灌洗液，取搖勻的灌洗液原液1滴，作細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)。灌洗液離心，細(xì)胞沉渣涂片做Wrigh-Giemsa染色，筆耕文化傳播，鏡下分類，計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞（PMN），采用凝膠電泳遷延率法（EMSA）加計(jì)算機(jī)輔助圖像分析技術(shù)檢測(cè)白細(xì)胞NF-κB活性（按試劑盒說(shuō)明操作）。

　　1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

　　使用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，重復(fù)測(cè)量的計(jì)量資料采用方差分析，樣本均數(shù)之間的兩兩比較用q檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　2 結(jié)果

　　與空白對(duì)照組比較，LPS組各時(shí)間點(diǎn)肺組織NF-κB表達(dá)量均明顯增高（P < 0.01）；與LPS組相同時(shí)間點(diǎn)比較，LPS+XBJ組24、36、48 h肺組織NF-κB表達(dá)量明顯減少（P < 0.01）；與空白對(duì)照組比較，XBJ組各時(shí)間點(diǎn)肺組織NF-κB表達(dá)量有一定減少，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表1。

　　3 討論

　　既往臨床報(bào)道顯示，接近半數(shù)的膿毒癥患者發(fā)生ALI，進(jìn)而發(fā)展成為急性呼吸窘迫綜合征（ARDS），后者為膿毒癥患者的主要死因之一。ALI發(fā)生時(shí)，肺組織中炎性因子大量表達(dá)，參與ARDS的發(fā)生發(fā)展。NF-κB是一組可被數(shù)百種上游因子激活的多效因子，其通過(guò)多條信號(hào)通路參與復(fù)雜的炎癥反應(yīng)。既往研究顯示，NF-κB是膿毒癥炎癥反應(yīng)的樞紐環(huán)節(jié)，其上游因子包括TLRs、TNF-α、COX-2等，由于單純下調(diào)某一上游因子并不能從根本上阻止ALI的進(jìn)展，因此本研究選取NF-κB作為研究對(duì)象。

　　張克君等[2]向大鼠胰膽管逆行注入5%�；悄懰徕c誘導(dǎo)ALI模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肺組織NF-κB在6 h后開始增加，24 h增加最明顯，而給予NF-κB抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）的干預(yù)組，各時(shí)間點(diǎn)相應(yīng)肺組織NF-κB含量明顯降低，且NF-κB的下游因子PUMA表達(dá)水平亦明顯降低，肺泡Ⅱ型細(xì)胞上皮凋亡明顯較模型組輕。故他們認(rèn)為NF-κB活化進(jìn)而上調(diào)下游因子PUMA表達(dá)，促進(jìn)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡，而在ALI過(guò)程中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，兔在注射LPS誘導(dǎo)ALI后，病程早中期NF-κB大量表達(dá)，至36 h達(dá)到峰值，隨后逐漸平穩(wěn)并出現(xiàn)降低趨勢(shì)，提示在ALI的早中期，促炎反應(yīng)占優(yōu)勢(shì)，而后期則轉(zhuǎn)為抗炎反應(yīng)占優(yōu)勢(shì)。由于ALI發(fā)展成為ARDS的根本原因在于內(nèi)毒素可造成大量炎性介質(zhì)釋放，產(chǎn)生“瀑布”效應(yīng)，促抗炎平衡隨之被破壞。而NF-κB是ALI中發(fā)揮重要角色的因子，其在多條炎性通路中占據(jù)上游位置，阻斷NF-κB的活化，就可能抑制肺組織細(xì)胞的凋亡過(guò)程，延緩ALI的發(fā)展。血必凈是由丹參、當(dāng)歸、赤芍、川芎、紅花五味中藥經(jīng)現(xiàn)代制藥工藝提取其有效成分制成，主要成分為丹參素、芍藥苷、阿魏酸、紅花黃色素、川芎嗪等，既往動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床資料均顯示血必凈具有降低MODS死亡率的作用[3-6]。本次研究結(jié)果顯示，血必凈顯著抑制了ALI兔模型的NF-κB表達(dá)，從而減輕了ALI，而未注射內(nèi)毒素的XBJ組并未表現(xiàn)出NF-κB表達(dá)的明顯抑制，提示血必凈可能通過(guò)對(duì)內(nèi)毒素的抑制作用阻斷NF-κB的活化過(guò)程，而對(duì)正常機(jī)體的NF-κB信號(hào)通路無(wú)明顯影響。

　　綜上所述，血必凈可通過(guò)下調(diào)ALI肺組織中NF-κB的表達(dá)水平，阻斷其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)通路，抑制肺組織細(xì)胞的凋亡過(guò)程，而對(duì)正常肺組織中的NF-κB表達(dá)并無(wú)明顯影響，具有顯著的臨床應(yīng)用價(jià)值。血必凈的具體作用機(jī)制及其是否對(duì)內(nèi)毒素產(chǎn)生直接的抑制作用，尚需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)。

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