發(fā)布時(shí)間：2020-11-17 03:39

　　 池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)隸屬于軟體動(dòng)物門、瓣鰓綱,起源于日本,是優(yōu)質(zhì)的淡水育珠蚌。當(dāng)取完珍珠后,其肉質(zhì)往往被丟棄,未被利用。為了提高池蝶蚌資源利用率,本研究以成熟的池蝶蚌肉質(zhì)為材料,對(duì)其基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行分析:新鮮池蝶蚌全臟器含有水分89.68%、粗蛋白5.63%、灰分1.93%、總糖1.24%、粗脂肪0.96%、非蛋白氮0.56%組成。池蝶蚌肉質(zhì)中糖類和蛋白含量較豐富,為此開展池蝶蚌多糖和酶解相關(guān)研究。研究首次選用三種蛋白酶(木瓜蛋白酶、動(dòng)物蛋白酶、中性蛋白酶)對(duì)池蝶蚌全臟器進(jìn)行酶解,建立相關(guān)的工藝流程,獲得上述三種酶解產(chǎn)物。并對(duì)酶解產(chǎn)物的基本營(yíng)養(yǎng)成分和18種氨基酸含量進(jìn)行檢測(cè)分析。設(shè)計(jì)體外抗氧化實(shí)驗(yàn),探究其抗氧化能力。研究發(fā)現(xiàn):三種酶解產(chǎn)物均對(duì)DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)、羥基自由基和超氧自由基具有清除能力,而且清除效果隨著三種酶解產(chǎn)物濃度增加而增強(qiáng)。其中,中性蛋白酶酶解產(chǎn)物對(duì)三種指標(biāo)清除率效果最好。以0.6 mg/mL為例,對(duì)DPPH和羥基自由基以及超氧自由基清除率分別為23.8%、37.2%、19.6%,研究表明池蝶蚌酶解產(chǎn)物具有體外抗氧化的能力。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)體外乙醇脫氫酶(ADH)激活率、小鼠醉酒實(shí)驗(yàn),探究池蝶蚌三種酶解產(chǎn)物對(duì)解酒相關(guān)生物活性功能。體外ADH激活率結(jié)果表明,3.75-150 mg/mL濃度范圍表現(xiàn)出正相關(guān);醉酒實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:中性蛋白酶酶解產(chǎn)物與模型組相比能夠延長(zhǎng)耐受時(shí)間1.5小時(shí),縮短醉酒時(shí)間3小時(shí),以上兩種時(shí)間均具有顯著性差異(p0.01);動(dòng)物蛋白酶酶解產(chǎn)物與模型組相比延長(zhǎng)耐受時(shí)間0.5小時(shí)和縮短醉酒時(shí)間2小時(shí),具有顯著性差異(p0.01);木瓜蛋白酶酶解產(chǎn)物組耐受和醉酒時(shí)間與模型組相比無(wú)顯著性差異(p0.05)。結(jié)果表明動(dòng)物、中性蛋白酶酶解產(chǎn)物對(duì)解酒有一定的功效。根據(jù)體外抗氧化實(shí)驗(yàn)、ADH激活率實(shí)驗(yàn)和醉酒實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選用池蝶蚌中性蛋白酶酶解產(chǎn)物,設(shè)計(jì)抗小鼠急性酒精肝損傷實(shí)驗(yàn)。研究結(jié)果表明:中性蛋白酶酶解產(chǎn)物,在150 mg/kg BW劑量下會(huì)顯著提高肝臟勻漿中谷胱甘肽(GSH)的含量(p0.01),降低甘油三脂(TG)的含量(p0.01);降低血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的含量(p0.05)。丙二醛(MDA)含量降低雖不顯著,但隨著酶解產(chǎn)物濃度增加具有一定降低的趨勢(shì)。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)判定方法》,肝組織中TG、GSH、MDA任意兩者具有陽(yáng)性,則說明該物質(zhì)具有輔助保護(hù)肝臟的作用。研究結(jié)果表明:池蝶蚌中性蛋白酶酶解產(chǎn)物對(duì)酒精誘導(dǎo)小鼠急性酒精肝損傷具有一定的緩解保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)通過熱水乙醇提方式獲得池蝶蚌多糖(HSP-1),設(shè)計(jì)池蝶蚌多糖(HSP-1)抗腫瘤和修復(fù)肝損傷實(shí)驗(yàn)。選用SMCC-7721和SGC-7901細(xì)胞株進(jìn)行實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)池蝶蚌多糖(HSP-1)在低濃度下(100-200μg/m L)對(duì)兩者細(xì)胞生長(zhǎng)有促進(jìn)作用,超過400μg/m L時(shí)出現(xiàn)抑制效果,隨著HSP-1濃度增加,兩種腫瘤抑制率逐步提高,當(dāng)HSP-1濃度為1000μg/m L,對(duì)兩種細(xì)胞抑制率僅為12%、11%,抑制效果不顯著。探究HSP-1抗酒精誘導(dǎo)肝損傷時(shí),HSP-1在250mg/kg BW可以顯著降低血清中兩種轉(zhuǎn)氨酶的含量,在急性肝損傷和非急性肝損傷(4周)都能體現(xiàn)出很好降低兩種轉(zhuǎn)氨酶(p0.01)。小鼠肝臟勻漿中的甘油三酯(TG)含量顯著降低(p0.05),谷胱甘肽(GSH)的含量比模型組(只灌胃白酒組)顯著升高(p0.05);非急性(4周)肝損傷小鼠肝臟勻漿中MDA含量雖然未顯著降低(p0.05),但隨著池蝶蚌多糖(HSP-1)濃度的增加,對(duì)降低MDA含量趨勢(shì)月明顯。綜上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明HSP-1對(duì)酒精誘導(dǎo)肝損傷具有一定的保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S917.4
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 貝類生物活性研究進(jìn)展
    1.2 多糖生物活性研究現(xiàn)狀
        1.2.1 抗氧化活性
        1.2.2 抗腫瘤活性
        1.2.3 保護(hù)酒精性肝損傷
    1.3 貝類多糖的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 海水貝類多糖生物活性研究現(xiàn)狀
        1.3.2 淡水貝類多糖生物活性研究現(xiàn)狀
    1.4 多糖的提取制備
    1.5 全肉酶解產(chǎn)物生物活性研究
        1.5.1 貝類酶解產(chǎn)物活性研究
        1.5.2 酶解產(chǎn)物解酒研究
        1.5.3 酶解工藝研究
    1.6 本論文研究的目的及意義
第二章 池蝶蚌酶解產(chǎn)物的制備及生物活性探究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 池蝶蚌基本營(yíng)養(yǎng)成分檢測(cè)
        2.2.2 池蝶蚌酶解產(chǎn)物的制備
        2.2.3 池蝶蚌酶解產(chǎn)物基本營(yíng)養(yǎng)成分檢測(cè)
        2.2.4 池蝶蚌酶解產(chǎn)物氨基酸成分分析
        2.2.5 池蝶蚌酶解產(chǎn)物體外抗氧化實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 池蝶蚌酶解產(chǎn)物體外ADH激活率實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 醉酒實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 小鼠急性酒精肝損傷實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 池蝶蚌及其酶解產(chǎn)物基本營(yíng)養(yǎng)成分檢測(cè)
        2.3.2 池蝶蚌三種酶解產(chǎn)物氨基酸成分分析
        2.3.3 池蝶蚌三種酶解產(chǎn)物體外抗氧化活性
        2.3.4 體外檢測(cè)ADH激活率
        2.3.5 醉酒實(shí)驗(yàn)
        2.3.6 急性肝損傷實(shí)驗(yàn)
    2.4 討論
        2.4.1 酶解產(chǎn)物的制備及分析
        2.4.2 酶解產(chǎn)物的抗氧化分析
        2.4.3 酶解產(chǎn)物的解酒護(hù)肝分析
第三章 池蝶蚌多糖的提取及生物活性研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 多糖的制備
        3.2.2 HSP-1抗腫瘤活性探究
        3.2.3 HSP-1對(duì)酒精誘導(dǎo)的肝損傷影響探究
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 多糖的提取及分離純化
        3.3.2 HSP-1抑制腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        3.3.3 HSP-1對(duì)酒精誘導(dǎo)急性肝損傷實(shí)驗(yàn)影響探究
    3.4 討論
        3.4.1 池蝶蚌多糖HSP-1的提取
        3.4.2 池蝶蚌多糖HSP-1抗腫瘤分析
        3.4.3 池蝶蚌多糖HSP-1修復(fù)酒精誘導(dǎo)肝損傷分析
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)

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