發(fā)布時間：2020-12-08 18:00

　　近年來,EPA（二十碳五烯酸）在人類健康保健方面的應(yīng)用越來越受到關(guān)注,EPA的消費市場也隨著人類的需求而不斷擴大。微藻由于其總脂含量豐富,不飽和脂肪酸種類多樣性,EPA含量高,細(xì)胞繁殖生長快、細(xì)胞結(jié)構(gòu)簡單而被認(rèn)為是最具潛力的EPA生產(chǎn)原料來源。本研究從廣西北部灣海域紅樹林保護區(qū)中采樣,利用平板涂布分離法、平板劃線分離法、微吸管分離法分離海洋微藻,通過尼羅紅染色法初篩分離得到10株總脂含量較高海洋微藻。經(jīng)氣相色譜檢測EPA含量,得到5株產(chǎn)EPA微藻,其中2株微藻HD02和HE06的EPA含量分別為0.22%和0.16%,產(chǎn)率分別為33.4μg·L-1·d-1和25.8μg·L-1·d-1,其倍增時間分別為2.7 d和2.5 d,懸浮生長,具有一定的工業(yè)化應(yīng)用價值。經(jīng)形態(tài)觀察及18s DNA序列分析,鑒定HD02為橋灣藻屬、HE06為菱形藻屬。采用正交試驗對這兩株海洋微藻進行了培養(yǎng)條件優(yōu)化,以提高其生物產(chǎn)量以及EPA產(chǎn)率。優(yōu)化結(jié)果顯示:橋灣藻HD02的最適培養(yǎng)條件硅元素80mg/L、硝酸鈉75 mg/L、維生素B1 50μg/L、維生素B12 0.5μg/L、生物素8μg/L、IAA 4 ... 

【文章來源】：廣西民族大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

廣西北部灣紅樹林Fig2.1mangrovesforestinthenorthGulfofGuangxiZhuangAutonomous

PCR 條件為：95℃預(yù)變性 2 min，95℃變性 30 s，55℃退火 30 s，72℃延伸 90 s，3環(huán)，最后 72℃終延伸 2 min。PCR 產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測后進行測序。2.2 結(jié)果本實驗從廣西北海山口鎮(zhèn)國家級紅樹林自然保護區(qū)、廣西欽州茅尾海自治區(qū)級紅樹林區(qū)、廣西東興市北侖河口國家自然生態(tài)保護區(qū)、廣西防城港珍珠灣紅領(lǐng)巾紅樹林保護分離到 75 株海洋微藻。2.2.1 尼羅紅染色初篩通過尼羅紅染色法從 75 株分離株中獲得 10 株熒光強度較高的海洋微藻。圖 2.2 中，1、HE07 的總脂含量最為明顯，在各個細(xì)胞內(nèi)分布比較均勻，說明其脂肪酸含量高，內(nèi)有較大較明顯黃色脂肪滴，說明其含有較高的非極性脂類和中性脂，而 HE05、HE0紅色，內(nèi)含極性脂為主[29]。HD02 與 HE06 細(xì)胞形態(tài)相似，兩者細(xì)胞內(nèi)的脂肪滴不明但許多細(xì)胞內(nèi)都含有兩個小的脂肪滴。

測定結(jié)果 和 DHA 的標(biāo)準(zhǔn)品氣相圖譜中可以看出，標(biāo)準(zhǔn)品 EPA 的出峰時間在 25.37，根據(jù)氣相結(jié)果建立的 EPA 標(biāo)準(zhǔn)方程 R 值達(dá)到到 99.94。從圖 2.4 微藻的氣相測定結(jié)果中可以看出微藻 HD留時間為 21.9 時均出現(xiàn)了不同大小的峰值，說明這些微藻然總脂峰值較好，在保留時間 21.9 處卻沒有峰值，說明 HE EPA。微藻 HE08 中細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸含量不高，也沒有出現(xiàn) 曲線計算得出藻株HD01、HD02、HE05、HE06、HQ01的EPA含0.16%、0.14%。EPA 測定結(jié)果最終得到五株含量在 1000 μ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]激素IAA和ABA對小球藻(Chlorella sp.)生長和油脂積累的影響[J]. 鄧曉東,吳小霞,范新照,費小雯,任大明.  中國油料作物學(xué)報. 2013(01)
[2]尼羅紅染色法篩選產(chǎn)油酵母及定量檢測胞內(nèi)油脂含量的研究[J]. 林義,鐘添華,駱祝華,黃翔玲,葉德贊.  微生物學(xué)通報. 2012(01)
[3]不同碳、氮源對優(yōu)勢藻株Hhw總脂含量及脂肪酸成分的影響[J]. 馬帥,胡小文,付莉莉,弓淑芬,譚德冠,張家明.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2011(12)
[4]不同培養(yǎng)方式下微藻產(chǎn)油能力的研究[J]. 楊靜,蔣劍春,張寧.  生物質(zhì)化學(xué)工程. 2011(02)
[5]不同氮源對4種海洋微藻生長的影響[J]. 胡章喜,徐寧,段舜山.  生態(tài)環(huán)境學(xué)報. 2010(10)
[6]產(chǎn)油微藻的篩選及中性脂動態(tài)積累過程的檢測[J]. 王金娜,嚴(yán)小軍,周成旭,徐繼林.  生物物理學(xué)報. 2010(06)
[7]32株海洋微藻總脂含量及其脂肪酸組成的研究[J]. 盧麗娜,孫利芹,田煥玲,任蒙,王長海.  中國油脂. 2009(11)
[8]6種海洋微藻提取物抑菌活性研究[J]. 李俠,鄭法新,程璐.  德州學(xué)院學(xué)報. 2007(06)
[9]VB1、VB12和VH對雨生紅球藻生長及類胡蘿卜素含量的影響[J]. 李立欣,段舜山,李愛芬,徐寧.  生態(tài)科學(xué). 2006(02)
[10]不同氮源對微藻增殖的影響[J]. 張青田,董雙林,胡桂坤,張兆琪.  海洋科學(xué). 2005(02)

碩士論文
[1]部分南�？膳囵B(yǎng)微藻的分子鑒定及富油藻株的篩選[D]. 馮甜.中國海洋大學(xué) 2013
[2]隱甲藻生產(chǎn)DHA的研究[D]. 梅志剛.華南理工大學(xué) 2011
[3]植物激素ABA和GA對紫球藻生長的影響[D]. 肖丹曦.暨南大學(xué) 2009



本文編號：2905454