發(fā)布時間：2024-11-03 07:06

　　中華絨螯蟹Eriocheir sinensis(河蟹、大閘蟹),作為大眾普遍接受喜愛的經濟水產品,是這些年來十分具有養(yǎng)殖價值的經濟養(yǎng)殖水產品,河蟹養(yǎng)殖是我國淡水養(yǎng)殖業(yè)的支柱性產業(yè),貢獻了巨大的經濟產值。但跟隨著養(yǎng)殖科學技術的進步,集約化養(yǎng)殖業(yè)已經稱為河蟹養(yǎng)殖的普遍方式,隨著起迅速發(fā)展的發(fā)展,由各種細菌、病毒、寄生蟲所導致的病害的發(fā)生束縛了河蟹養(yǎng)殖業(yè)的進步、對這個行業(yè)造成經濟損失十分巨大。中華絨螯蟹螺原體(Spiroplasma eriocheiris)是近年發(fā)現的能夠侵染中華絨螯蟹、克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)、南美白對蝦(Litopenaeus vannamei)、羅氏沼蝦(Macrobrachium rosenbergii)以及日本沼蝦(Macrobrachium nipponensis)等水生甲殼動物的重要病原。螺原體通過鰓及體表進入中華絨螯蟹體內,隨后侵染中華絨螯蟹血淋巴細胞,隨后在血淋巴細胞內大量繁殖,然后通過宿主血液循環(huán)到達全身以進一步侵染肌肉和神經等組織,導致中華絨螯蟹附肢顫抖直至死亡,故稱之為中華絨螯蟹“顫抖病”。由于螺原體的特殊性及致病性,研究其...

【文章頁數】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 螺原體的研究概況
        1.1.1 螺原體的發(fā)現
        1.1.2 螺原體的分類地位及生物學特性
        1.1.3 中華絨螯蟹螺原體的發(fā)現與鑒定
        1.1.4 中華絨螯蟹螺原體的危害
    1.2 中華絨螯蟹螺原體侵染機制的研究
    1.3 囊泡相關膜蛋白的研究進展
        1.3.1 囊泡相關膜蛋白(VAMP)的簡介
        1.3.2 囊泡相關膜蛋白的功能研究
    1.4 鈣調蛋白激酶Ⅱ的研究現狀
        1.4.1 鈣調蛋白激酶Ⅱ的簡介
        1.4.2 鈣調蛋白激酶Ⅱ的功能研究
    1.5 本論文的研究目的、內容、意義和技術路線
第2章 中華絨螯蟹囊泡相關蛋白與鈣調蛋白激酶Ⅱ的克隆、生物信息學分析及組織分布
    2.1 材料方法
        2.1.1 實驗動物和細菌
        2.1.2 主要實驗器材
        2.1.3 主要實驗試劑
    2.2 實驗步驟
        2.2.1 EsVAMP全長的RACE克隆
        2.2.2 EsVAMP的生物信息學分析
        2.2.3 RT-PCR檢測EsVAMP在中華絨螯蟹各個組織中的表達量
        2.2.4 EsCaMKⅡ全長的RACE克隆
        2.2.5 ESCAMKⅡ的生物信息學分析
        2.2.6 RT-PCR檢測EsVAMP在中華絨螯蟹各個組織中的表達量
    2.3 實驗結果
        2.3.1 EsVAMP基因c DNA全長的擴增
        2.3.2 EsVAMP基因的序列分析
        2.3.3 Es SVAMP m RNA在不同組織中的分布
        2.3.4 EsCaMKⅡ基因c全長的擴增
        2.3.5 EsCaMKⅡ基因的序列分析
        2.3.6 EsCaMKⅡm RNA在不同組織中的分布
    2.4 討論
第3章 中華絨螯蟹囊泡相關膜蛋白(EsVAMP)的功能研究
    3.1 材料方法
        3.1.1 實驗動物和細菌
        3.1.2 主要實驗器材
        3.1.3 主要實驗試劑
    3.2 實驗步驟
        3.2.1 使用RT-PCR檢測EsVAMP在螺原體侵染過程中的變化
        3.2.2 EsVAMP干擾實驗
        3.2.3 EsVAMP干擾對螺原體侵染的影響
        3.2.4 EsVAMP基因在真核細胞中表達
    3.3 實驗結果
        3.3.1 中華絨螯蟹螺原體刺激后EsVAMP的表達變化
        3.3.2 EsVAMP雙鏈RNA的合成
        3.3.3 EsVAMP基因干擾效率檢測
        3.3.4 EsVAMP基因干擾后對細胞內螺原體數量的影響
        3.3.5 干擾EsVAMP基因后螺原體侵染對中華絨螯蟹存活率的影響
        3.3.6 EsVAMP真核表達載體的構建
        3.3.7 EsVAMP在小鼠巨噬細胞中的表達
        3.3.8 過表達EsVAMP并用螺原體刺激后對細胞形態(tài)的影響
        3.3.9 過表達EsVAMP并用螺原體刺激后對巨噬細胞活性的影響
        3.3.10 過表達EsVAMP對細胞內螺原體數量的影響
    3.4 討論
第4章 中華絨螯蟹鈣調蛋白激酶Ⅱ及其主要功能結構域的功能的研究
    4.1 材料方法
        4.1.1 實驗動物和細菌
        4.1.2 主要實驗器材
        4.1.3 主要實驗試劑
    4.2 實驗步驟
        4.2.1 使用RT-PCR檢測EsCaMKⅡ在螺原體侵染過程中的表達變化
        4.2.2 EsCaMKⅡ干擾實驗
        4.2.3 EsCaMKⅡ主要結構域的真核表達
    4.3 實驗結果
        4.3.1 中華絨螯蟹螺原體刺激后EsCaMKⅡ的表達變化
        4.3.2 EsCaMKⅡ雙鏈RNA的合成
        4.3.3 EsCaMKⅡ基因干擾效率
        4.3.4 EsCaMKⅡ基因干擾后對細胞內螺原體數量的影響
        4.3.5 干擾EsCaMKⅡ基因后螺原體侵染對中華絨螯蟹存活率的影響
        4.3.6 EsCaMKⅡ-CD的克隆與真核表達質粒的構建
        4.3.7 EsCaMKⅡ-CD在小鼠巨噬細胞中的表達
        4.3.8 過表達EsCaMKⅡ-CD并用螺原體刺激后對細胞形態(tài)的影響
        4.3.9 EsCaMKⅡ-CD并用螺原體刺激后細胞活性的檢測
        4.3.10 EsCaMKⅡ-CD過表達后并用螺原體刺激對細胞內螺原體數量的影響
    4.4 討論
第5章 結論
    5.1 中華絨螯蟹囊泡相關蛋白與鈣調蛋白激酶Ⅱ的特性分析
    5.2 中華絨螯蟹囊泡相關蛋白(EsVAMP)的功能研究
    5.3 中華絨螯蟹鈣調蛋白激酶Ⅱ結構域的功能研究
參考文獻
在讀期間發(fā)表的學術論文及研究成果
致謝



本文編號：4010875