發(fā)布時(shí)間：2020-10-20 12:01

　　 桃拓酚(toratol)是一種典型的桃拓烷型二萜,最早是通過(guò)超臨界CO_2技術(shù)從羅漢松屬植物桃拓羅漢松的芯材中萃取而出的,并且顯示出高效的生物活性、人體安全性和產(chǎn)品配方兼容性,在歐美均被列入藥妝品范疇。本文以羅漢松枝葉(Podocarpus macrophyllus Thunb.D.Don)作為原材料,對(duì)其甲醇提取物中乙酸乙酯和氯仿極性部位進(jìn)行系統(tǒng)分離,并對(duì)其抗氧化和抑制酪氨酸酶活性進(jìn)行初步研究,旨在發(fā)掘羅漢松中的天然活性成分,尋找與toratol結(jié)構(gòu)、活性類似的化合物作為替代資源,同時(shí)也為羅漢松在美白和抗衰老化妝品中的應(yīng)用提供重要的科學(xué)依據(jù)。1.采用了羅漢松總二萜的檢測(cè)方法。以totarol為對(duì)照品,采用紫外分光光度法測(cè)定羅漢松提取物的總二萜含量,得到線性方程為:A=0.0074C+0.0023,R~2=0.9998(濃度C/(mg/mL),吸光度/A)。利用超聲波輔助提取優(yōu)化羅漢松總二萜提取工藝。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面(Box-Behnken)試驗(yàn)設(shè)計(jì),得到最佳提取工藝為:甲醇濃度80.00%、液料比26.00:1(mL:g);提取溫度63.00℃、提取時(shí)間20 min,提取3次,總二萜得率為1.13%(RSD=0.89%)。以V_C作為陽(yáng)性對(duì)照,考察羅漢松總二萜對(duì)DPPH自由基(DPPH·)、超氧陰離子自由基(O_2~-·)、羥基自由基(·OH)的清除能力。結(jié)果表明,羅漢松總二萜對(duì)三種自由基都有不同程度的清除效果,且在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi),其清除率與質(zhì)量濃度呈線性關(guān)系。在羅漢松總二萜質(zhì)量濃度為0.59 mg/mL時(shí),其對(duì)DPPH·、O_2~-·和·OH自由基的最大清除率分別為81.71%、66.27%、38.60%。2利用浸提法,先以甲醇為溶劑提取羅漢松中的有效成分,將提取液濃縮成浸膏,加水制成懸浮液,再依次用石油醚,氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取得到四個(gè)不同極性部位,然后采用硅膠柱色譜、C-18反相硅膠柱色譜、葡聚糖凝膠(Sephadex LH-20)柱色譜、制備薄層色譜(PTLC)、半制備型高效液相色譜(RPLC)及重結(jié)晶等現(xiàn)代分離技術(shù),從乙酸乙酯和氯仿萃取部位共分離得到7個(gè)化合物,利用核磁共振光譜(~1H-NMR、~(13)C-NMR、HMQC、HMBC)、質(zhì)譜等現(xiàn)代光譜分析技術(shù)對(duì)所得化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,確認(rèn)得到的化合物為:totarol(1),4β-carbosy-19-nortotarol(2),1-deoxy-2α-hydroxy-nagilactone A(3),podocarpus flavone A(4),bilobetin(5),β-sitosterol(6),tridecanoic acid(7)。其中化合物1、3、4、5、7為首次從羅漢松中分離得到。3以L-dopa為底物考察羅漢松總二萜及獲得的單體化合物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用,結(jié)果表明:羅漢松總二萜和單體化合物對(duì)酪氨酸酶均有一定的抑制作用,且差異顯著,抑制能力由強(qiáng)到弱依次為totarolbilobetin總二萜4β-carboxy-19-nortotarolβ-sitosterol。對(duì)抑制活性表現(xiàn)最好totarol進(jìn)行動(dòng)力學(xué)研究,利用Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖法確定其對(duì)多酚氧化酶抑制作用的機(jī)制類型。結(jié)果表明:totarol屬于可逆的混合型抑制劑,米氏常數(shù)K_m為0.33 mg/mL,抑制常數(shù)K_I為0.44 mg/mL,K_(IS)為0.85mg/mL。
【學(xué)位單位】：吉首大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TQ658
【部分圖文】：

圖 2.3 不同因素對(duì)羅漢松總二萜得率的影響Fig. 2.3 Response surface plots illustrating the mutual effects of factors on the yield of diterpenoids再對(duì)回歸模型進(jìn)行進(jìn)一步典型性分析，得到最佳提取工藝條件為提取溫度為62.68℃、甲醇濃度 80.46%、液料比 26.34(mL/g)，預(yù)測(cè)值為 1.14%。為方便操作，將最優(yōu)方案定為提取溫度 63.00℃、甲醇濃度 80.00%、液料比 26.00:1(mL/g)。按最

圖3.1分離流程圖
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本文編號(hào)：2848657