發(fā)布時間：2024-07-07 06:16

　　偏甘油酯脂肪酶是一種對酯類底物有高度選擇性的脂肪酶,能水解甘油單酯和甘油二酯底物,對甘油三酯底物無水解活力。其獨特的底物識別特性使其在油脂加工及脂質改性領域具有廣闊的應用前景。但目前已知的偏甘油酯脂肪酶種類甚少,對其基礎理論及應用研究仍有待深入。本論文以婁地青霉(Penicillium roqueforti)來源的偏甘油酯脂肪酶Pr Lip為研究對象,研究其異源表達及純化、酶學性質、晶體學結構及在高酸價油脂脫酸中的應用,為闡明偏甘油酯脂肪酶的催化功能提供結構基礎,同時為工業(yè)應用提供科學指導。具體研究內容以及結果如下:(1)偏甘油酯脂肪酶Pr Lip的制備及酶學性質研究。構建Pr Lip畢赤酵母基因工程菌,篩選獲得高效表達目標蛋白的陽性克隆菌株。30℃發(fā)酵培養(yǎng)60 h后利用陰離子交換層析法純化粗酶液,獲得純度大于90%的重組Pr Lip,SDS-PAGE顯示其蛋白分子量大小為31 k Da。酶學性質表征結果顯示:該酶的最適反應溫度為45℃,最適反應p H值為7.0,40℃條件下半衰期為6 h。Pr Lip在堿性環(huán)境中更穩(wěn)定,具有良好的溫度耐受性及表面活性劑耐受性。通過Pr Lip催化水解...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號表
第一章 緒論
    1.1 偏甘油酯脂肪酶的簡介
        1.1.1 偏甘油酯脂肪酶的來源
        1.1.2 偏甘油酯脂肪酶的生理功能
    1.2 偏甘油酯脂肪酶的結構特點
        1.2.1 偏甘油酯脂肪酶的結構研究進展
        1.2.2 偏甘油酯脂肪酶的底物識別機制
    1.3 偏甘油酯脂肪酶的工業(yè)應用
        1.3.1 偏甘油酯脂肪酶應用概述
        1.3.2 偏甘油酯脂肪酶在高酸價米糠油脫酸中的應用
    1.4 蛋白質晶體學
        1.4.1 蛋白質結晶原理
        1.4.2 蛋白質結晶方法
        1.4.3 蛋白質晶體衍射及數(shù)據(jù)處理
    1.5 本課題研究的意義和主要內容
        1.5.1 本課題研究的意義
        1.5.2 本課題研究的主要內容
        1.5.3 本課題研究的技術路線
第二章 脂肪酶PrLip的制備與酶學性質研究
    2.1 引言
    2.2 實驗材料與儀器
        2.2.1 載體和表達宿主
        2.2.2 主要材料和試劑
        2.2.3 主要儀器和設備
        2.2.4 培養(yǎng)基及溶液配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 脂肪酶PrLip的表達與純化
        2.3.2 脂肪酶PrLip水解酶活力及蛋白濃度的測定
        2.3.3 p H值對脂肪酶Pr Lip酶活力的影響
        2.3.4 溫度對脂肪酶PrLip酶活力的影響
        2.3.5 金屬離子、有機溶劑及表面活性劑對脂肪酶PrLip酶活力的影響
        2.3.6 制備PrLip凍干粉
        2.3.7 脂肪酶PrLip的底物選擇性
    2.4 結果與討論
        2.4.1 脂肪酶PrLip序列分析
        2.4.2 脂肪酶PrLip的表達與純化
        2.4.3 p H值對脂肪酶Pr Lip酶活力的影響
        2.4.4 溫度對脂肪酶PrLip酶活力的影響
        2.4.5 金屬離子、有機溶劑及表面活性劑對脂肪酶PrLip酶活力的影響
        2.4.6 脂肪酶PrLip的底物選擇性
        2.4.7 不同來源的偏甘油酯脂肪酶的酶學特性比較
    2.5 本章小結
第三章 脂肪酶PrLip的晶體制備及結構解析
    3.1 引言
    3.2 實驗材料與儀器
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗儀器
        3.2.3 緩沖液及優(yōu)化試劑的配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 脂肪酶PrLip凝膠過濾色譜層析
        3.3.2 脂肪酶PrLip結晶蛋白濃度的篩選
        3.3.3 脂肪酶PrLip結晶條件的初篩和優(yōu)化
        3.3.4 脂肪酶PrLip晶體的觀察及撈取
        3.3.5 脂肪酶PrLip衍射數(shù)據(jù)的收集和處理
    3.4 結果與討論
        3.4.1 脂肪酶PrLip凝膠過濾層析純化
        3.4.2 脂肪酶PrLip結晶條件的篩選和優(yōu)化
        3.4.3 脂肪酶PrLip衍射數(shù)據(jù)處理
        3.4.4 脂肪酶PrLip的結構分析
    3.5 本章小結
第四章 脂肪酶PrLip催化高酸價米糠油脫酸的應用研究
    4.1 引言
    4.2 實驗材料與儀器
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 實驗儀器
        4.2.3 流動相及緩沖液配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 固定化載體的篩選
        4.3.2 優(yōu)化固定化的緩沖液pH值及酶載比
        4.3.3 固定化PrLip酶活力測定方法
        4.3.4 篩選固定化PrLip催化米糠油脫酸的�；�受體
        4.3.5 固定化PrLip催化高酸價米糠油脫酸的工藝優(yōu)化
        4.3.6 HPLC分析脂肪酸含量變化
    4.4 結果與討論
        4.4.1 固定化載體篩選
        4.4.2 固定化緩沖液pH值及酶載比的優(yōu)化
        4.4.3 不同酰基受體對固定化PrLip脫酸效果的影響
        4.4.4 固定化PrLip催化高酸價米糠油脫酸的工藝優(yōu)化
    4.5 本章小結
結論與展望
    一、主要結論
    二、論文創(chuàng)新點
    三、展望與設想
參考文獻
攻讀碩士學位期間取得的研究成果
致謝
附件



本文編號：4003281